藤贝母乙酸乙酯部位化学成分研究

何 峰， 向梅先， 胡亚京， 刘新桥

(中南民族大学 药学院， 武汉 430074)



藤贝母乙酸乙酯部位化学成分研究

何 峰， 向梅先， 胡亚京， 刘新桥*

(中南民族大学 药学院， 武汉 430074)

采用薄层色谱、正相硅胶柱、反向硅胶柱、葡聚糖凝胶、半制备高效液相柱对植物药藤贝母乙酸乙酯部位的化学成分进行了系统的研究.共分离得到8个单体化合物，分别为：7-羟基-6-甲氧基香豆素(7-hydroxy-6-methoxy coumarin) (1)，表儿茶素(epicatechin) (2)，儿茶素(catechin) (3)，(E)-N-(4-羟基苯乙基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺[(E)-N-hydroxy phenyl ethyl-3-(4-hydroxy-3-methoxy phenyl) acrylamide] (4)，邻苯二甲酸二丁酯(Dibutyl phthalate) (5)，(Z)-3-O-咖啡酰基-4-O-甲基奎宁酸甲酯[(Z)-3-O-Coffee acyl-4-O-methyl quinic acid methyl ester] (6)，绿原酸甲酯(methyl chlorogenate) (7)， 3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃半乳糖]-5，7，4′-三羟基黄酮(3-O-[beta-D-pyran rhamnose-(1-6)-beta-D-pyran galactose]-5， 7， 4′-three hydroxy flavone) (8). 所有化合物均首次从该植物分离得到.

藤贝母； 乙酸乙酯部位； 化学成分

藤贝母来源于葫芦科土贝母属植物土贝母Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet，以鳞茎入药.秋、冬采挖，洗净，蒸透，晒干，用时打碎.藤贝母生于山坡草丛或平地， 主要分布于河北、山西、陕西、山东、甘肃、宁夏、河南和云南等省区，现有栽培.具清热解毒，散结消肿.主治淋巴结结核、骨结核、乳腺炎、疮痈肿毒；外用治蛇、虫咬伤和外伤出血等症[1].现代药理研究表明藤贝母具有抗肿瘤活性[2]，本研究为了弄清其抗肿瘤的药用功效的物质基础， 对藤贝母的化学成分进行了相应研究.采用正相硅胶柱层析、凝胶色谱、制备薄层色谱、半制备高效液相色谱等多种方法， 从藤贝母乙酸乙酯部位分离得到并鉴定了8个化合物.8个化合物的结构如图1所示.

1 材料和方法

1.1 试剂、材料和仪器

藤贝母药材采自湖北恩施地区，经中南民族大学药学院万定荣教授鉴定为葫芦科土贝母属植物土贝母Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet [Actinostemma paniculatum Maxim.] 的鳞茎.石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、甲醇为分析纯(国药集团)，95%的乙醇为工业级，色谱级甲醇(天地公司).柱层析用硅胶(100～200目，200～300目)，硅胶G高效预制板(青岛海洋化工产).ZF-6型三用紫外光谱仪；Bruker AM-400型核磁共振仪；Finnigan LCQ-Deca型质谱仪；戴安Ultimate 3000型高效液相色谱仪；5C18-MS-Ⅱ(10 mm×250 mm)型色谱柱；RE-52AA型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；KQ-500E型超声波清洗仪；紫外分光光度仪；Nicolet NEXUS-670傅里叶变更红外光谱仪.

1.2 提取与分离

取藤贝母10 kg 淋洗后晒干，用粉碎机粉碎成粗粉.将藤贝母粗粉置95% 的乙醇中室温浸泡提取3 次，每次24 h.过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏2.1 kg，将浸膏用90%甲醇水溶液溶解后用等体积石油醚萃取，回收石油醚得到石油醚浸膏200 g(石油醚部位) .减压回收下层的甲醇溶液得浸膏，然后用蒸馏水溶解浸膏后，依次用等体积乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别减压回收乙酸乙酯和正丁醇，得到乙酸乙酯提取物600 g (乙酸乙酯部位) 和正丁醇提取物900 g (正丁醇部位)，余下为水部位，蒸干水分后称重 (水部位) .称取乙酸乙酯部位浸膏500 g 上正相硅胶色谱柱，用环己烷-丙酮梯度洗脱(9∶1， 8∶2， 7∶3， 6∶4， 5∶5， 4∶6，3∶7， 2∶8， 1∶9， 0∶1)，收集各洗脱液，500 mL为一流分，TLC检测合并相同流分后得到Fr.E1～E9九个部分.其中Fr.E1经正、反相硅胶柱、葡聚糖凝胶柱层析得化合物Ⅰ(13 mg)和Ⅴ(7 mg); Fr.E2经正相硅胶柱和凝胶柱、制备薄层板得化合物Ⅳ(23 mg); Fr.E4经正相硅胶柱和半制备高效液相(HPLC)得化合物Ⅱ(9 mg)和Ⅲ(5 mg); Fr.E5、Fr.E6、Fr.E8分别经正、反相硅胶柱和HPLC等方法进行分离，得到化合物Ⅵ (11 mg)、Ⅶ (14 mg)、Ⅷ (23 mg).

图1 化合物的结构Fig.1 The structures of compounds

2 结构鉴定与结果

2.1 化合物I (7-羟基-6-甲氧基香豆素)

化合物I为白色针状晶体(氯仿)，1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ: 6.30(1H， d，J=9.2 Hz， H-3)， 7.63(1H， d，J=9.2 Hz， H-4)， 6.94(1H，s， H-6)， 3.98(3H，s，-OCH3-7).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ: 161.42(C-2)，113.40(C-3)， 143.30(C-4)， 111.49(C-5)， 107.48(C-6)， 150.26(C-7)， 144.01(C-8)， 103.19(C-9)， 150.26(C-10)， 56.41(7-OCH3).1H NMR和13C NMR数据与文献[3]报道基本一致，故鉴定化合物I为7-羟基-6-甲氧基香豆素(7-hydroxy-6-methoxy coumarin，分子式为C10H8O4).

2.2 化合物Ⅱ(表儿茶素)

化合物Ⅱ为白色粉末(甲醇)，[α]D-59.1°.1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ: 4.83(1H， s， H-2)， 4.19(1H， s， H-3)， 2.89(1H， dd，J=16.8， 4.8 Hz，H-4)， 2.75(1H， d，J=16.2 Hz， H-5)， 5.92(1H， s， H-6)， 5.95(1H， s， H-8)， 6.99(1H， s， H-1′)， 6.78(1H， d，J=8.0Hz， H-5′)， 6.83(1H， d，J=8.0 Hz， H-6′).13C NMR(100 MHz， CD3OD)δ: 78.50(C-2)， 66.10(C-3)， 27.83(C-4)， 156.29(C-5)， 95.08(C-6)， 155.97(C-7)， 94.55(C-8)， 98.73(C-4a)， 156.59(C-8a)， 130.91(C-1′)， 114.54(C-2′)， 144.39(C-3′)， 144.56(C-4′)， 113.97(C-5′)， 118.04(C-6′).1H NMR和13C NMR数据与文献[4]报道基本一致，故鉴定化合物Ⅱ为表儿茶素(epicatechin，分子式为C15H14O6).

2.3 化合物Ⅲ (儿茶素)

化合物Ⅲ为白色粉末(甲醇)，[α]D-17.1°.1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ: 4.73(1H， s， H-2)， 4.01(1H， s， H-3)， 2.67(2H， dd，J=16.8， 4.8 Hz，H-4)， 5.89(1H， s， H-6)， 5.72(1H， s， H-8)， 6.89(1H， s， H-2′)， 6.69(1H， d，J=8.0 Hz， H-5′)， 6.66(1H， d，J=8.0 Hz， H-6′).13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ: 82.7(C-2)， 68.5(C-3)， 28.4(C-4)， 100.5(C-4a)， 157.3(C-5)， 96.3(C-6)， 156.9(C-7)， 94.7(C-8)， 157.5(C-8a)， 131.7(C-1′)， 115.1(C-2′)， 145.3(C-3′)， 145.5(C-4′)， 115.5(C-5′)， 120.2(C-6′).1H NMR和13C NMR数据与文献[5]报道基本一致，故鉴定化合物Ⅲ为儿茶素(catechin， 分子式为C15H14O6).

2.4 化合物Ⅳ[(E)-N-(4-羟基苯乙基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺]化合物Ⅳ为黄褐色粉末(二甲亚砜)，1H NMR(400 MHz， DMSO-d6)δ: 8.00(1H， s)， 7.12(1H， d，J=1.6 Hz， H-2)， 6.79(1H， d，J=8.4 Hz，5-H)， 6.99(1H， dd，J=8.4， 1.6 Hz， H-6)， 7.32(1H， d，J=15.6 Hz， H-7)， 6.44(1H， d，J=15.6 Hz， H-8)， 3.33(2H， m， H-1′)， 2.65(2H， m， H-2′)， 7.01(2H， d，J=8.4 Hz， H-4′，8′)， 6.68(2H， d，J=8.4Hz， H-5′-7′)， 3.80(3H， m，-OCH3-3).13C NMR(100 MHz， DMSO-d6)δ: 127.06(C-1)， 116.09(C-2)， 148.88(C-3)， 148.86(C-4)， 119.46(C-5)， 121.96(C-6)， 139.33(C-7)， 111.17(C-8)， 165.97(C-9)， 41.11(C-1′)， 34.87(C-2′)， 130.17(C-3′)， 129.92(C-4′，8′)， 115.56(C-5′-7′)， 156.27(C-6′)， 55.96 (-OCH3-3).1H NMR和13C NMR数据与文献[6]报道基本一致，故鉴定化合物Ⅳ为(E)-N-(4-羟基苯乙基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺((E)-N-(4-hydroxyphenethyl)-3-(4-hydrixy-3-methoxyphenyl) acrylamide， 分子式为C18H19O4N).

2.5 化合物Ⅴ(邻苯二甲酸二丁酯)

化合物Ⅴ为墨绿色油状物(氯仿)，1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ: 4.32(4H， t，H-1-1′)， 1.73(4H， m， H-2-2′)， 1.47(4H， m， H-3-3′)， 1.17(6H， td， H-4-4′)， 7.56(2H， m， H-3″-6″)， 7.76(2H， m， H-4″-5″).13C NMR(100 MHz， CDCl3)δ: 65.53(C-1-1′)， 30.58(C-2-2′)， 19.12(C-3-3′)， 13.66(C-4-4′)， 130.89(C-1″-2″)， 128.84(C-3″-6″)， 132.40(C-4″-5″)， 167.67(C-7″，8″).1H NMR和13C NMR数据与文献[7]报道基本一致，故鉴定化合物Ⅴ为邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate， 分子式为C16H22O4).

2.6 化合物Ⅵ [(Z)-3-O-咖啡酰基-4-O-甲基奎宁酸甲酯]

化合物Ⅵ为灰绿色粉末(甲醇)，1H NMR(400 MHz， CD3OD)δ: 2.18(2H， m，H-2′)， 5.26(1H， d，J=3.6 Hz， H-3′)， 3.67(1H， m， H-4′)， 4.07(1H， m， H-5′)， 2.01(2H， m， H-6′)， 7.40(1H， d，J=1.6 Hz， H-2)， 6.72(1H， d，J=8.4 Hz， H-5)， 7.04(1H， dd，J=1.6， 8.0 Hz， H-6)， 6.80(1H， d，J=12.8 Hz， H-7)， 5.71(1H， d，J=12.8 Hz， H-8)， 3.68(3H， s，-OCH3-7′).13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ: 76.28(C-1′)， 71.87(C-2′)， 72.14(C-3′)， 38.12(C-4′)， 70.54(C-5′)， 38.12(C-6′)， 175.78(C-7′)， 128.48(C-1)，118.61(C-2)， 145.38(C-3)， 148.47(C-4)， 115.66(C-5)， 125.17(C-6)， 145.75(C-7)， 116.54(C-8)， 167.42(C-9)， 53.33 (-OCH3-7′).1H NMR和13C NMR数据与文献[8]报道基本一致，故鉴定化合物Ⅵ为(Z)-3-O-咖啡酰基-4-O-甲基奎宁酸甲酯((Z)-3-O-caffeoyl quinic acid methyl ester，分子式为C17H20O9).

2.7 化合物Ⅶ (绿原酸甲酯)

化合物Ⅶ为灰绿色粉末(甲醇)，1H NMR(600 MHz， CD3OD)δ: 6.94(1H， d，J=1.8 Hz， H-2)， 6.68(1H， d，J=7.8 Hz， H-5)， 6.85(1H， dd，J=1.8， 7.8 Hz， H-6)，7.43(1H， d，J=16.2 Hz， H-7)， 6.12(1H， d，J=16.2 Hz，H-8)， 5.16(1H， d，J=4.8 Hz， H-3′)， 2.09(2H， m， H-2′)， 2.09(1H， m， H-6′)， 1.92(1H， m， H-6′)， 3.67(1H， m， H-4′)， 4.15(2H， m， H-5′).13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ: 127.58(C-1)， 115.06(C-2)， 149.71(C-3)， 146.87(C-4)， 116.58(C-5)， 122.98(C-6)， 147.21(C-7)， 114.98(C-8)， 168.25(C-9)， 75.16(C-1′)， 72.42(C-2′)，72.16(C-3′)， 37.65(C-4′)，70.32(C-5′)， 37.65(C-6′)，175.35(C-7′).1H NMR和13C NMR数据与文献[9]报道基本一致，故鉴定化合物Ⅶ为绿原酸甲酯(Methyl chlorogenate，分子式为C17H20O9).

2.8 化合物Ⅷ(3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃半乳糖]-5，7，4′-三羟基黄酮)

化合物Ⅷ为黄绿色粉末(甲醇)，1H NMR(600 MHz， CD3OD)δ: 8.18(1H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′)，6.58(1H，d，J=8.6 Hz， H-3′，5′)，6.58(1H，brs， H-8)， 6.19(1H， brs， H-6)， 5.13(1H， d，J=7.8 Hz， H-1″of Gal)，4.62(1H，s，H-1‴of Rha)，1.28(3H， d，J=6.2 Hz， H-6‴of Rha);13C NMR(150 MHz， CD3OD)δ: 179.4(C=O)， 166.8(C-7)， 162.8(C-5)，161.7(C-4′)，158.6(C-4)， 159.3(C-2)， 135.6(C-3)， 132.4(C-2′，6′)， 122.5(C-1′)， 116.3(C-3′，5′)， 105.7(C-1″ of Gal)， 105.4(C-10)， 101.7(C-1‴ of Rha)， 100.3(C-6)， 95.0(C-8)， 75.5(C-3″of Gal)， 75.2(C-5″of Gal)， 73.7(C-4‴of Rha)， 73.1(C-2″of Gal)，72.4(C-3‴of Rha)，72.2(C-2‴of Rha)， 70.1(C-5‴of Rha)， 69.8(C-4″of Gal)， 67.4(C-6″of Gal)， 18.1(C-6‴of Rha).以上数据与参考文献一致[10-11]，故鉴定化合物Ⅷ为3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃半乳糖]-5，7，4′-三羟基黄酮(3-O-[beta-D-pyran rhamnose-(1-6)-beta-D-pyran galactose]-5，7，4′-three hydroxy flavone， 分子式为C27H29O15)．

3 讨论

藤贝母来源于葫芦科土贝母属植物土贝母Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet [Actinostemma paniculatum Maxim.]，本研究对藤贝母进行了化学成分分析研究.运用溶剂萃取，柱层析分离技术：如采用正相硅胶柱层析、凝胶色谱、制备薄层色谱、半制备高效液相色谱等多种方法， 从藤贝母乙酸乙酯部位分离得到了10多个化合物，鉴定了其中的8个，分别是7-羟基-6-甲氧基香豆素(7-6-hydroxy-6-methoxy coumarin)，表儿茶素(epicatechin)，儿茶素(catechin)，(E)-N-(4-羟基苯乙基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺[(E)-N-hydroxy phenyl ethyl-3-(4-hydroxy-3-methoxy phenyl) acrylamide]，邻苯二甲酸二丁酯(di butyl phthalate)，(Z)-3-O-咖啡酰基-4-O-甲基奎宁酸甲酯[(Z)-3-O-Coffee acyl-4-O-methyl quinic acid methyl ester]，绿原酸(chlorogenic acid)，3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃半乳糖]-5，7，4′-三羟基黄酮(3-O-[beta-D-pyran rhamnose-(1-6)-beta-D-pyran galactose]-5，7，4′-three hydroxy flavone).查阅文献资料，发现这些化合物均为首次从该植物中分离得到，下一步将对分离得到的化合物进行抗肿瘤活性的筛选，以弄清该药抗肿瘤的物质基础.

[1] 南京中医药大学编写组. 中药大辞典[M].上册.上海: 科学技术出版社， 2005: 114．

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Study on chemical composition of ethylacetate fraction fromBolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet

HE Feng， XIANG Meixian， HU Yajing， LIU Xinqiao

(College of Pharmacy， South-central University for Nationalities， Wuhan 430074)

To study chemical composition of ethylacetate fraction fromBolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet. TLC， normal-phase silica gel column， reveres-phase silica gel column， Sephadex-LH， semi-preparative HPLC column were used to isolate chemical compositions of ethylacetate fraction fromBolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet. Eight compounds were gained and identified as∶7-6-hydroxy-6-methoxy coumarin (1); epicatechin (2); catechin (3); (E)-N-hydroxy phenyl ethyl-3-4-hydroxy-3-methoxy phenyl acrylamide (4); dibutyl phthalate(5); (Z)-3-O-Coffee acyl-4-O-methyl quinic acid methyl ester (6); chlorogenic acid (7); 3-O-[beta-D-pyran rhamnose-(1-6)-beta-D-pyran galactose]-5，7，4′-three hydroxy flavone (8). All compounds were isolated for the first time from this plant．

Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet; ethylacetate fraction; chemical composition

2015-03-23.

武汉市科技晨光计划项目(2014070404010210).

1000-1190(2015)04-0563-04

O629< class="emphasis_bold">文献标识码： A

A

*通讯联系人. E-mail: lxqsuec@163.com.