小细胞和非小细胞肺癌晚期患者CD3 + CD4 + 及CD3 + CD8 + T 淋巴细胞亚群的差异

吴姗姗 严 峰 邓玉玲 于腊梅 (辽宁中医药大学附属医院临床检验中心，沈阳 110032)

肺癌是当今恶性肿瘤所致死亡的高风险因素之一，因为早期阶段并无显著的临床特点和症状，也没有特异性强的检查手段［1］。所以大多数肺癌患者在确定诊断时已处于进展阶段，进而严重影响了患者治疗的效果和预后。机体抗肿瘤以细胞免疫为主，T 细胞是机体抗肿瘤免疫的重要效应细胞，并通过功能各异的淋巴细胞亚群来完成免疫调控机能。成熟的T 淋巴细胞根据其表面表达不同的CD 分子分为CD3+CD4+T 细胞和的CD3+CD8+T 细胞。T细胞亚群可反映机体细胞免疫的水平［2］。肺癌根据病理类型不同分为小细胞肺癌(Small cell lung cancer，SCLC)和非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)，非小细胞肺癌包括鳞癌和腺癌。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象 65 例患者为我院2013 年1 月至2013 年9 月收治的肺癌晚期患者，其中男性33 例，女性32 例;年龄45～82 岁，平均年龄为(56.2±3.6)岁，小细胞癌14 例，非小细胞癌51 例(鳞癌20 例，腺癌31 例);Ⅲ期49 例，Ⅳ期16 例。入选标准:患者无其他肿瘤史;患者不伴发自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、风湿性骨关节病等;患者未服用激素类药物或接受免疫抑制剂的治疗［3］。选择与患者性别年龄相匹配的健康人20 例即健康对照组，其中男女各10 例;年龄38～70 岁，平均(55.3±2.9)岁。

1.1.2 主要试剂和仪器 BD 公司的FACSCalibur流式细胞仪、Tritest CD4FITC/CD8PE/CD3PerCP 试剂、10 ×免洗溶血素。

1.2 方法

1.2.1 T 细胞亚群的检测 具体步骤如下:患者清晨空腹抽取2 ml 外周静脉全血选择EDTA 抗凝，将5 μl CD4FITC/CD8PE/CD3PerCP 试剂加入流式管中，加入20 μl EDTA 抗凝血，涡旋振荡混合均匀，室温避光15 min，加入经10 倍稀释的免洗溶血素(BD公司)450 μl，室温避光15 min，样本溶血充分后流式细胞仪FACSCalibur(BD 公司)检测，MULTISET软件进行分析。

1.3 统计学分析 所有数据采用SPSS17.0 软件包进行分析，差异比较采用t 检验，以P ＜0.05 具有统计学意义。

2 结果

2.1 肺癌晚期患者CD4+T 细胞的水平 应用流式方法对健康对照组(NC 组)、小细胞肺癌组(SCLC组)和非小细胞肺癌组(NSCLC 组)进行了CD3+CD4+T 细胞表达水平的测定，见图1。与NC 组相比SCLC 组和NSCLC 组均显著下降，P ＜0.01，详细结果见表1 和图2A。

2.2 肺癌晚期患者CD8+T 细胞的水平及CD4+/CD8+比值 与NC 组相比SCLC 组和NSCLC组CD3+CD8+T细胞表达水平并无显著差异。但是与NC 组相比SCLC 组CD4+/CD8+比值显著下降，P ＜0.05，详细结果见表1 和图2B、C。

图1 NC 组、SCLC 组和NSCLC 组CD3 +CD4 +T 细胞和CD3 +CD8 +T 细胞表达的代表性流式细胞图Fig.1 Representative flow cytometric graphs of CD3 +CD4 + T cells and CD3 + CD8 + T cells in NC group，SCLC group and NSCLC group

表1 小细胞肺癌与非小细胞肺癌晚期患者外周血T 细胞亚群检测结果比较(%，±s)Tab.1 Difference of peripheral blood T lymphocyte subset between patients with advanced small cell lung cancer and non-small cell lung cancer(%，±s)

表1 小细胞肺癌与非小细胞肺癌晚期患者外周血T 细胞亚群检测结果比较(%，±s)Tab.1 Difference of peripheral blood T lymphocyte subset between patients with advanced small cell lung cancer and non-small cell lung cancer(%，±s)

Note:Compared with NC group，1)P ＜0.05，2)P ＜0.01.

图2 NC、NSCLC 和SCLC 三组CD3 +CD4 +、CD3 +CD8 +T 淋巴细胞及CD4 +/CD8 +比值的比较Fig.2 Comparison of percentage of CD3 +CD4 +T cells，CD3 +CD8 +T cells and CD4 +/CD8 + among NC，NSCLC and SCLC three groups

表2 非小细胞肺癌晚期男女患者外周血T 细胞亚群检测结果比较(%，±s)Tab.2 Difference of peripheral blood T lymphocyte subset between males and females with advanced nonsmall cell lung cancer(%，±s)

表2 非小细胞肺癌晚期男女患者外周血T 细胞亚群检测结果比较(%，±s)Tab.2 Difference of peripheral blood T lymphocyte subset between males and females with advanced nonsmall cell lung cancer(%，±s)

Note:Female group compared with male group，1)P ＜0.05.

表3 小细胞肺癌晚期男女患者外周血T 细胞亚群检测结果比较(%，±s)Tab.3 Difference of peripheral blood T lymphocyte subset between males and females with advanced small cell lung cancer(%，±s)

表3 小细胞肺癌晚期男女患者外周血T 细胞亚群检测结果比较(%，±s)Tab.3 Difference of peripheral blood T lymphocyte subset between males and females with advanced small cell lung cancer(%，±s)

2.3 不同性别肺癌晚期患者外周血CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T 细胞水平以及CD4+T/CD8+T比值的比较 无论是NSCLC 还是SCLC 晚期患者，外周血CD3+CD4+T 细胞和CD3+CD8+T 细胞水平男女并无差异，见表2。CD4+T/CD8+T 比值SCLC晚期患者男女并无差异，而NSCLC 晚期患者女性显著低于男性，见表3。

3 讨论

随着对肿瘤免疫机制的探索，我们发现恶性肿瘤的发生发展与机体的免疫功能密切相关，抗肿瘤免疫尤以细胞免疫最为重要，T 细胞亚群之间的平衡是维持免疫系统内部稳定的重要环节，目前T 细胞亚群的测定被广泛应用于监测肿瘤的发展、判断疗效以及预后［4-6］。CD3+CD4+T 细胞能够通过分泌细胞因子活化单核细胞、巨噬细胞和NK 细胞，并诱导单核细胞、巨噬细胞和NK 细胞发生免疫应答进而发挥抗肿瘤功能。CD4+T 细胞还可以分泌IL-2 作为第二信号活化CD8+T 细胞然后参与对抗肿瘤的免疫应答［3，7］。CD3+CD8+T 细胞为抑制性T细胞发挥免疫抑制功能，二者处于平衡状态机体才能发挥正常的免疫功能。有研究发现由于多重免疫抑制因素的作用肺癌患者通常处于免疫抑制状态［8］。这些抑制因素能够抑制CD3+CD4+T 细胞的成熟和分化，进而减少了CD3+CD4+T 细胞的数量，并且削弱了对机体肿瘤细胞的免疫监督功能。与此同时CD3+CD8+T 细胞显著增多进一步削弱识别杀伤肿瘤细胞的功能［3］。本次研究发现肺癌晚期患者无论是NSCLC 还是SCLC 较健康人其CD3+CD4+T 细胞的比例都显著下降这与Da-Ping Yu等［3］的研究结果是一致的，而且NSCLC 和SCLC 晚期的患者其CD3+CD4+T 细胞的比例无显著性差异，也不存在男女性别不同引起的差异这与Da-Ping Yu 等［3］的研究结果是一致的。说明肺癌晚期患者的细胞免疫功能严重受损，严重影响对肿瘤细胞的识别和杀伤，导致肿瘤细胞在机体内广泛扩散。

本次研究发现肺癌晚期患者无论是NSCLC 还是SCLC 较健康人其CD3+CD8+T 细胞的比例都无显著差异这与Da-Ping Yu 等［3］的研究结果不同，Da-Ping Yu 等［3］的研究发现NSCLC 患者CD3+CD8+T 细胞的比例较健康人显著升高，分析之所以结果会有差异与我们选择的研究对象不同有关，本研究选择的患者是处于Ⅲ期和Ⅳ期的NSCLC 和SCLC 患者即肺癌晚期患者，而Da-Ping Yu 等人的研究选择的研究对象为Ⅰ期-Ⅳ期的NSCLC 患者。本次研究发现肺癌晚期患者无论是NSCLC 还是SCLC 其CD3+CD8+T 细胞的比例不存在性别差异这与Da-Ping Yu 等人的得出的NSCLC 患者CD3+CD8+T 细胞的比例不存在性别差异的结论是一致的。本次研究还发现NSCLC 晚期女性患者较男性患者CD4+/CD8+比值显著降低，而SCLC 患者则无性别引起的差异，具体原因尚不清楚有待深入研究。

综上所述，无论是小细胞还是非小细胞肺癌晚期患者机体的细胞免疫都遭受重创CD3+CD4+T 细胞的比例较健康人显著降低，而CD3+CD8+T 细胞的比例较健康人并无显著差异。简言之肺癌晚期患者由于细胞免疫功能严重受损，削弱了识别和杀伤肿瘤细胞的功能，使肿瘤细胞进一步广泛扩散疾病进展，据此情况我们在今后的临床治疗应着重考虑采取针对提高机体细胞免疫功能的治疗方案，并将检测患者T 淋巴细胞亚群的变化作为评价疗效和预后的参考指标。

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［3］Da-Ping Yu，Yi Han，Qiu-Yue Zhao，et al.CD3+CD4+and CD3+CD8+lymphocyte subgroups and their surface receptors NKG2D and NKG2A in patients with non-small cell lung cancer［J］.Asian Pacific J Cancer Prevention，2014，15:2685-2688.

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