化浊解毒方对浊毒内蕴型反流性食管炎大鼠超氧化物歧化酶及丙二醛的影响※

赵 艳 霍永利 冯玉彦 张 纨

(河北省中医院脾胃科，河北 石家庄 050011)

实 验 研 究

化浊解毒方对浊毒内蕴型反流性食管炎大鼠超氧化物歧化酶及丙二醛的影响※

赵 艳 霍永利 冯玉彦 张 纨

(河北省中医院脾胃科，河北 石家庄 050011)

目的 观察化浊解毒方对浊毒内蕴型反流性食管炎(RE)大鼠超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的影响。方法 将60只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、中药组，每组各15只。除正常组外，其余3组制备RE大鼠模型。造模后正常组、模型组予0.9%氯化钠注射液灌胃；西药组按1 mL/100 g给予奥美拉唑溶液灌胃；中药组按1 mL/100 g给予化浊解毒方灌胃，共治疗8周。观察大鼠食管黏膜组织病理，检测RE大鼠血清SOD活性、MDA含量。结果 西药组、中药组均能改善食管黏膜病理变化，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。西药组、中药组均可降低血清MDA含量、提高SOD活性，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。中药组与西药组大鼠血清SOD活性、MDA含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 化浊解毒方可能是通过降低MDA含量、提高SOD活性，对RE起到治疗作用。

食管炎，消化性；丙二醛；超氧化物歧化酶；疾病模型，动物；中医药疗法

反流性食管炎(reflux esophagitis，RE)是酸性反流物(包括胃酸或胆汁)反流至食管致使食管黏膜受损而出现病变，主要病变表现为黏膜炎症、糜烂和溃疡等。随着人们生活节奏的加快，RE发病率逐年增高[1]。而氧化应激在RE发生发展过程中起重要作用。本实验研究旨在通过观察化浊解毒方对浊毒内蕴型RE大鼠超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响，进一步探讨该方治疗RE的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物、药物和试剂

1.1.1 实验动物 Wistar雄性大鼠60只，清洁级，12周龄，体质量250～320 g。河北医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(冀)2008-1-003。恒温室内饲养，温度为22 ℃，湿度为40%～60%。自由饮水，每日光照12 h。

1.1.2 实验药物和试剂 ①化浊解毒方药物组成：茯苓20 g，连翘20 g，半边莲15 g，半枝莲15 g，蒲公英15 g，绞股蓝15 g，石菖蒲15 g，白花蛇舌草15 g，佩兰12 g，藿香12 g，枳实12 g，厚朴12 g，砂仁12 g，黄芩9 g，红豆蔻 6 g。以上药物均购自河北省中医院中药房，并由河北省中医院制剂室煎煮制成1.25 g /mL药液备用。②奥美拉唑肠溶片(湖南方盛制药股份有限公司，国药准字H20103295)配制成0.36 mg/mL溶液，备用。③SOD、MDA酶联免疫检测试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组 按随机数字表法，将60只Wistar雄性大鼠分为4组，分别为正常组、模型组、西药组及中药组，每组各15只。

1.2.2 模型制备[1-2]正常组不予造模，其余3组大鼠进行RE模型制备，具体如下：(1)不全幽门结扎+贲门肌切开术。①适应性饲养1周后，禁食24 h(可饮水)，腹腔注射3.5%水合氯醛，其浓度为1 mL/100 g，将大鼠麻醉；②大鼠固定于手术台，呈仰卧位，常规备皮、消毒；③于上腹部正中处切一长约3 cm的切口，将食管下段、胃食管交界区暴露于视野内；④于胃-食管交界处缝扎胃左动脉的分支，再于上述位置纵行切开贲门肌0.5 cm，完全暴露黏膜层；⑤半结扎幽门，位置为幽门与十二指肠交界近幽门处；⑥吸尽腹腔液体，注入0.9%氯化钠注射液1 mL、硫酸庆大霉素注射液1万单位，关腹，严格无菌操作，术后禁食24 h。(2)于高热潮湿的环境下[3]，将上述手术后大鼠饲以高脂高糖饮食。普通饲料+10%蜂蜜和10%白糖混合饮料，21 d后即造模成功。造模1周后，大鼠共死亡4只，其中模型组死亡2只，西药组、中药组各死亡1只。

1.2.3 给药方法 给药开始时间：造模21 d后。正常组、模型组给予0.9%氯化钠注射液；西药组给予奥美拉唑溶液；中药组给予化浊解毒方。以上各组均每日灌胃1次，按1 mL/100 g计算，共给药8周。

1.2.4 标本采集与处理 ①血清标本：末次给药后，禁食24 h(可饮水)，行腹腔内麻醉，麻醉用药为2%戊巴比妥钠，按40 mg/kg给药。由门静脉取血4 mL置于试管中，其中含有7.5%乙二胺四乙酸二钠30 μL和抑肽酶40 μL，混匀，4 ℃，3 000 r/min，离心10 min，抽取上清液，冷藏待测。②病理标本：取大鼠食管黏膜组织，4%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，切片，苏木精-伊红(HE)染色。

1.2.5 观察指标与检测

1.2.5.1 食管黏膜病理组织观察 参照中华医学会消化内镜学分会制订“反流性食管炎诊断及治疗指南(2003年)”[4]。RE病理分级标准：①上皮细胞层内炎细胞浸润；②黏膜固有层乳头延伸；③鳞状上皮增生；④出现黏膜糜烂；⑤食管黏膜有溃疡形成；⑥Barrett食管改变为重度。轻度：符合以上①～③；中度：符合以上①～④；重度：符合以上①～⑤或①～⑥。

1.2.5.2 SOD活性、MDA含量检测 取上述血清标本，采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定 SOD活性、MDA含量，操作步骤严格按试剂盒说明书进行。

2 结 果

2.1 4组大鼠食管黏膜病理组织观察及病理分级比较 见表1。

表1 4组大鼠食管黏膜病理组织观察及病理分级比较 只

与正常组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05

由表1可见，正常组食管黏膜未见异常，模型组食管黏膜病理分级多为中度，有的呈重度表现；中药组和西药组食管黏膜病理分级多未见异常或为轻度。模型组食管黏膜病理阳性率高于正常组(P<0.05)，说明造模成功。中药组、西药组食管黏膜病理阳性率较模型组明显降低(P<0.05)，说明中药组、西药组均能改善食管黏膜病理变化。

2.2 4组大鼠血清SOD活性及MDA含量比较 见表2。

组 别nSOD(U/mL)MDA(nmol/mL)正常组15113．98±12．343．85±0．88模型组1388．26±11．43∗4．97±0．96∗西药组14109．60±10．85△3．83±0．87△中药组14110．26±10．47△3．84±0．89△

与正常组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05

由表2可见，与正常组比较，模型组SOD活性明显降低(P<0.05)，MDA含量升高(P<0.05)，说明造模成功；与模型组比较，中药组、西药组血清SOD活性升高(P<0.05)，血清MDA含量降低(P<0.05)；中药组与西药组大鼠血清SOD活性、MDA含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨 论

RE是一种由胃和十二指肠内容物反流至食管引起的一种胃食管反流病。其典型症状主要为泛酸、烧心、反胃等。在RE的发生、发展过程中，氧化应激有着不可忽视的作用。氧化应激所致的损伤使机体的抗氧化防御功能降低，而此过程中，氧自由基起着关键作用，其具有细胞毒性，可使脂质过氧化，损伤细胞膜，引起炎症反应。SOD是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，能催化氧自由基发生歧化反应，从而清除生物体内氧自由基，减少或阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，减少脂质过氧化物的生成，减轻炎症反应。生物体内，自由基作用于脂质发生过氧化反应，并生成终产物MDA，MDA能破坏细胞膜的通透性和完整性，加剧细胞的损伤，其含量可间接反应黏膜受攻击所致炎症的程度。

RE属中医学嘈杂、吐酸、胃痛、呕吐等范畴，中医对RE的病因病机有多种认识。多数认为其基本病机为胃气上逆，而瘀血停滞、湿热内阻、气机郁滞等均可导致胃失和降，胃气上逆，对此各中医学者见解多有不同。高祥华[5]认为，RE表象为痰、气、瘀互结于食管，致肝胃不和，但其根本在于脾虚失运，胃失和降。我们认为湿浊和热毒是RE的关键因素，因情志不遂，六淫伤中，饮食不适致脾胃受损，中焦失司，逆乱失和，脾胃不能升清降浊，则水反为湿，谷反为滞，湿滞中焦，日久化生热毒，湿热毒邪互结而酿生浊毒。治疗以化浊解毒为原则。化浊解毒方中重用石菖蒲、砂仁化湿和胃健脾，湿祛而脾自健，脾健而绝生湿之源；蒲公英、连翘清热解毒，蒲公英兼以利湿，连翘又可轻宣郁热，取“火郁发之”之意，此4味共为君药。佩兰、藿香、红豆蔻芳香化湿，醒脾开胃，增强化湿和胃，共为臣药。白花蛇舌草、半边莲、黄芩、半枝莲清热解毒祛湿；茯苓、绞股蓝健脾渗湿益气，化湿可祛脾病之因，健脾可绝生湿之本；以上药物均为佐药。配以厚朴、枳实降逆除胀，理气消痞，而复脾胃升清降浊之功。诸药相合，标本兼治，使浊邪祛，毒邪解，而诸症向愈。现代药理研究表明，石菖蒲可增强胆汁的分泌，缓解肠管平滑肌痉挛，增强肠管节律性蠕动，促进肠管内容物的推进[6]；砂仁具有促进胃肠动力、调节免疫的功能，其水煎剂可使湿困模型大鼠胃黏膜SOD活性增加[7]。

本实验研究结果显示，化浊解毒方能改善浊毒内蕴型RE大鼠食管黏膜病理变化，提高SOD活性，降低血清MDA含量，提示化浊解毒方可能是通过提高SOD活性、降低MDA含量，减少黏膜损伤，增强食管黏膜抗氧化能力，保护食管黏膜组织，减轻炎症反应，从而对RE起到治疗作用。

[1] 许树长，戴军，胡运彪，等.实验性酸性反流性食管炎动物模型制备的研究[J].中华消化杂志，1999，19(3)：208-209.

[2] 于强，袁红霞，崔乃强.酸性反流性食管炎大鼠模型的改良制备[J].中国中西医结合消化杂志，2002，10(2)：74-75.

[3] 郭喜军，张颜伟，赵见文.胃癌前病变大鼠中抑癌基因APC、P16表达与浊毒的相关性研究[J].河南中医，2011，31(10)：1119-1122.

[4] 中华医学会消化内镜学分会.反流性食管炎诊断及治疗指南(2003)[J].中华消化内镜杂志，2004，21(4)：221-222.

[5] 高祥华.反流性食管炎的中医病机及辨治探讨[J].吉林中医药，2004，24(3)：15-16.

[6] 胡锦官，顾健.石菖蒲及其有效成分对消化系统的作用[J].中药药理与临床，1999，15(2)：16-18.

[7] 邱赛红，陈立峰，柳克玲，等.芳香化湿药开胃作用机理的实验研究Ⅱ：对湿困动物模型的影响[J].中药药理与临床，1997，13(2)：1-4.

(本文编辑：习 沙)

Investigation of Huazhuo-tongluo formula on superoxide dismutase and malondialdehyde in reflux esophagitis rats with Zhuodu-neiyun type

ZHAOYan，HUOYongli，FENGYuyan，etal.

Departmentofspleenandstomach，HospitalofTraditionalChineseMedicineinHebeiProvince，Hebei，Shijiangzhuang050011

Objective To observe the effects of Huazhuo-tongluo formula on superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) in reflux esophagitis (RF) rats with Zhuodu-neiyun type.Methods 60 male Wistar rats were randomly divided into normal group，model group，western medicine group and traditional Chinese medicine (TCM) group，15 rats in each group.Except normal group，RF rats model were induced in other three groups.After model induced，rats in normal and model groups were received 0.9% sodium chloride injection by gavage.Rats in western medicine group were received omeprazole solution (1 mL/100 g)by gavage，and rats in TCM group were received Huazhuo-jiedu formula (1 mL/100 g) by gavage.The course was 8 weeks.Esophageal mucosa pathology was observed in all groups，and the serum SOD activity and MDA content were measured in RF rats.Results The esophageal mucosa pathology was improved in western medicine and TCM groups，as compared with that in model group，the difference was statistically significant (P< 0.05).The serum MDA content was decreased in western medicine and TCM groups，and the SOD activity was increased，as compared with those in model group，the difference was statistically significant (P< 0.05).There were no statistically differences between western medicine and TCM groups on the serum SOD activity and MDA content (P>0.05).Conclusin Huazhuo-jiedu formula has therapeutic effects on reflux esophagitis may by decrease MDA content and increase SOD activity.

Peptic esophagitis; Malondialdehyde; Superoxide dismutase; Disease model; Animal; Traditional Chinese medicine

10.3969/j.issn.1002-2619.2015.09.028

※ 项目来源：河北省中医药管理局2013年中医药类科研计划课题(编号：2013046)

赵艳(1980—)，女，主治医师，硕士。从事脾胃病临床工作。

R-332；R287；R57

A

1002-2619(2015)09-1360-04

2014-12-31)