拉米夫定和阿德福韦酯抗病毒疗效与HBV基因型的关系*

刘 键，陆学东，黄 烈，庄 鹏，王 琼，吴润香，杨来智

(广东省深圳市第四人民医院：1.检验医学部;2.感染科 518033)



·论 著·

拉米夫定和阿德福韦酯抗病毒疗效与HBV基因型的关系*

刘 键1，陆学东1，黄 烈1，庄 鹏2，王 琼1，吴润香1，杨来智1

(广东省深圳市第四人民医院：1.检验医学部;2.感染科 518033)

目的 探讨慢性乙型肝炎患者应用拉米夫定、阿德福韦酯的疗效与HBV基因型的关系。方法 选取125例慢性乙型肝炎患者，分别给予拉米夫定(拉米夫定组，n=60)和阿德福韦酯(阿德福韦酯组，n=65)抗病毒治疗。观察2组治疗3、6、12个月后的病毒学应答率、血清学应答率及生化学应答率，并于治疗12个月后检测耐药率及耐药基因突变位点。结果 拉米夫定组在治疗6、12个月后，B基因型HBV感染患者病毒学应答率、血清学应答率明显高于C基因型HBV感染患者(P<0.05)，但生化学应答率差异无统计学意义(P>0.05)。阿德福韦酯组在治疗期间B基因型HBV感染患者与C基因型HBV感染患者的病毒学应答率、血清学应答率、生化学应答率差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗12个月后，拉米夫定组耐药率明显高于阿德福韦酯组(P<0.05)，拉米夫定组和阿德福韦酯组耐药基因突变位点分别以rt108M、rt236T为主。结论 拉米夫定对B基因型HBV的抑制作用优于C基因型HBV；阿德福韦酯的抗病毒疗效与HBV基因型无关；在慢性乙肝型炎治疗过程中要重视HBV耐药性发生，加强疗效评估。

乙型肝炎病毒； 基因型； 拉米夫定； 阿德福韦酯

抗HBV治疗是慢性乙型肝炎的主要治疗手段。研究显示，慢型乙型肝炎的进展、抗病毒治疗的疗效与HBV基因型及耐药基因变异有密切关系[1-2]。 核苷类似物是目前临床上最常用的抗病毒类药物。本研究拟探讨深圳地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型与核苷类似物抗病毒疗效的关系，为不同基因型患者选择合理有效的抗病毒治疗方案提供一定的理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2011年1月至2013年12月本院门诊和住院的接受拉米夫定、阿德福韦酯抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者125例，其中男83例，女42例，年龄19～63岁，平均33.55岁，均按慢性乙型肝炎防治指南(2010版)诊断标准确诊[3]。纳入患者甲、丙、丁、戍、庚等其他类型肝炎病毒检测均为阴性，并且无拉米夫定或阿德福韦酯治疗史，HBV DNA无拉米夫定、阿德福韦酯耐药基因位点。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 入选者分为拉米夫定组、阿德福韦酯组。拉米夫定组(n=60)中，B基因型HBV感染患者38例，C基因型HBV感染患者22例，给予口服拉米夫定(葛兰素史克制药苏州有限公司，批号H20030581)100 mg/d，1次/天；阿德福韦酯组(n=65)中，B基因型HBV感染患者40例、C基因型HBV感染患者25例，给予口服阿德福韦酯片(上海益生源药业有限公司，批号H20070216)10 mg/d，1次/天。每组患者至少用药12个月，分别在治疗前及治疗3、6、9、12个月时检测HBV DNA、HBV血清标志物及肝功能指标，在治疗12个月时进行该药物的耐药性检测。

1.2.2 标本采集 静脉采集慢性乙型肝炎患者不抗凝血3 mL，2 000 r/min离心5 min，分离血清-20 ℃储存备用，所有标本无溶血、脂血现象。

1.2.3 HBV DNA检测 采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测HBV DNA，MX-3000P荧光定量PCR仪购自Agilent公司，HBV DNA定量试剂盒由QIAGEN公司提供。

1.2.4 HBV DNA基因型与常见耐药位点检测 采用DNA反相斑点杂交芯片技术检测HBV DNA基因型与常见耐药基因位点。COMBI-H12型分子杂交仪购自FINEPCR公司，PTC-200型PCR扩增仪购自MJ RESEARCH公司，HBV DNA耐药基因芯片试剂盒由深圳亚能生物技术有限公司提供。

1.2.5 丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测 采用日本日立7600型全自动生化分析仪检测ALT，试剂由北京九强生物技术有限公司提供。

1.2.6 乙型肝炎e抗原(HBeAg)相对水平检测 采用免疫化学发光法检测HBeAg的相对水平，Gene-Amp5700型荧光PCR检测仪购自美国PE公司，病毒核酸定量检测试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供。

1.3 疗效评价标准[4]根据《病毒性肝炎防治方案》确定抗病毒疗效评价标准：(1)生化学应答，ALT复常指ALT降至正常范围之内；(2)病毒学应答，HBV 阴转指HBV DNA低于检测下限，即HBV DNA<1×103copy/mL；(3)血清学应答，HBeAg阴转或HBeAg血清学转换。

2 结 果

2.1 B、C基因型HBV感染患者拉米夫定疗效比较 在拉米夫定抗病毒治疗3个月时，B、C基因型HBV感染患者的病毒学应答率、血清学应答率及生化学应答率差异无统计学意义(P>0.05)。治疗6、12个月时，B、C基因型HBV感染患者的病毒学应答率、血清学应答率差异有统计学意义(P<0.05)，但生化学应答率差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

2.2 B、C基因型HBV感染患者阿德福韦酯疗效比较 B、C基因型HBV感染患者应用阿德福韦酯抗病毒治疗3、6、12个月，病毒学应答率、血清学应答率及生化学应答率差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表1 B、C基因型HBV感染患者拉米夫定疗效比较[n(%)]

表2 B、C基因型HBV感染患者阿德福韦酯疗效比较[n(%)]

2.3 耐药性检测 治疗12个月时，对拉米夫定组和阿德福韦酯组患者进行治疗药物的耐药性检测，结果显示拉米夫定组耐药率明显高于阿德福韦酯组(P<0.05)；拉米夫定组中，C基因型HBV感染患者的耐药率明显高于B基因型HBV感染患者(P<0.05)，见表3。耐药基因位点检测结果显示，拉米夫定组耐药基因位点主要为rt108M，其次为rt204V；阿德福韦酯组耐药基因位点为rt236T，其次为rt181V。

表3 拉米夫定和阿德福韦酯耐药性检测结果

3 讨 论

拉米夫定和阿德福韦酯是目前临床上应用较广泛的2种核苷类抗HBV药物。拉米夫定抑制HBV复制的作用机制是药物在细胞内磷酸化后再与脱氧胞嘧啶核苷之间进行竞争，进入合成中的cDNA链，逐步终止复制过程，从而阻断HBV复制中RNA-DNA的反转录[5-6]。阿德福韦酯是1种新型腺嘌呤磷酸酯类化合物。口服阿德福韦酯吸收后，经水解、磷酸化形成阿德福韦二磷酸酯，与腺苷酸竞争，终止HBV DNA 新链合成，抑制HBV复制[7-8]，阿德福韦酯不仅抗HBV效果显著，在拉米夫定耐药突变株出现的情况下，还可对其进行有效抑制[9-10]。

有研究显示，不同基因型的HBV对抗病毒药物的敏感性有一定差异。核苷类似物的研究主要集中于拉米夫定，关于拉米夫定疗效与HBV基因型相关性的报道较多，有学者认为B、C基因型HBV对拉米夫定的疗效无影响；也有学者发现，拉米夫定对C基因型HBV的抑制作用较B基因型HBV差[6]。有研究报道，B基因型HBV感染患者病毒学应答率、血清学应答率及生化学应答率均高于C基因型及B+C基因型HBV感染患者[11]。接受拉米夫定治疗的C基因型HBV感染患者的反应性及停药后的抗病毒持续时间均低于B基因型HBV感染患者[12]。目前，HBV基因型对阿德福韦酯抗病毒疗效是否具有影响尚存在争议[13-15]。

本研究对深圳地区125例慢性乙型肝炎患者分别应用拉米夫定或阿德福韦酯进行为期12个月的抗病毒治疗，通过对HBV DNA、HBeAg、ALT等指标的检测分析，发现B基因型HBV感染患者与C基因型HBV感染患者在应用拉米夫定6、12个月后的病毒学应答率、血清学应答率存在明显差异(P<0.05)，但在治疗期间生化学应答率差异无统计学意义(P>0.05)，提示B基因型HBV对拉米夫定的抗病毒应答率高于C基因型HBV。阿德福韦酯抗病毒治疗3、6、12个月后，B基因型HBV感染患者与C基因型HBV感染患者的病毒学应答率、血清学应答率、生化学应答率均无明显差异(P>0.05)，说明HBV基因型对阿德福韦酯的疗效无明显影响，与许正锯等[16]和杨丽敏等[17]报道结果一致。本研究通过对药物的耐药性检测，发现治疗12个月后，拉米夫定组和阿德福韦酯组均有耐药突变基因出现，拉米夫定组耐药基因位点主要为rt108M，阿德福韦酯组耐药基因位点为rt236T。拉米夫定组耐药率高于阿德福韦酯组(P<0.05)；拉米夫定组中，C基因型HBV感染患者的耐药率明显高于B基因型HBV感染患者(P<0.05)。

综上所述，在慢性乙肝型炎治疗过程中要重视HBV耐药性的发生，加强疗效评估，一旦发现耐药，要及时调整治疗方案，如对拉米夫定耐药者可更换阿德福韦酯治疗或联合用药治疗；对阿德福韦酯耐药者可联合应用拉米夫定，或用替比夫定、恩替卡韦联合用药治疗[18-19]。建议治疗6个月时进行耐药基因检测，及早发现耐药，及时更换药物，以保证和提高疗效。

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Correlation between HBV genotype and the antiviral efficacy of lamifuding and adefovir dipivoxil*

LIUJian1,LUXue-dong1,HUANGLie1,ZHUANGPeng2,WANGQiong1,WURun-xiang1,YANGLai-zhi1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory;2.DepartmentofInfectiousDisease,theFourthPeople′sHospitalofShenzhen,Shenzhen，Guangdong518033，China)

Objective To explore the relationship between the antiviral therapy efficacy of lamifuding and adefovir dipivoxil with HBV genotypes in chronic hepatitis B(CHB).Methods 125 cases of CHB patients were selected and treated lamivudine (lamivudine group,n=60) and adefovir dipivoxil (adefovir dipivoxil group,n=65).The virus response rates,serological response rates and biochemical response rates of two groups were observed respectively after 3,6,12 months treatment.The drug resistance rates and mutation sites of drug resistance gene were detected after 12 months treatment.Results In lamivudine group,patients infected genotype B HBV had higher virus response rate and serological response rate than patients infected genotype C HBV after 6 and 12 months treatment (P<0.05),while the biochemical response rates had no significant difference between two genotypes (P>0.05).In adefovir dipivoxil group,there were no significant difference of virus response rates,serological response rates and biochemical response rates between patients infected genotype B and genotype C HBV (P>0.05) during treatment.After 12 months treatment,the drug resistance rate of lamivudine group was higher than adefovir dipivoxil group (P<0.05).The main mutation sites of drug resistance gene of lamivudine group and adefovir dipivoxil group were rt108M and rt236T respectively.Conclusion Lamivudine has better antiviral efficacy for genotype B HBV than genotype C HBV,while the antiviral efficacy of adefovir dipivoxil is independent with HBV genotypes.The drug resistance of HBV should be paid attention to during treatment,and the assessment of efficacy should also be strengthened.

hepatitis B virus； genotype； lamivudine； adefovir dipivoxil

广东省深圳市福田区公益性科研项目(FTWS081)。

刘键，男，本科，主管检验师，从事医学临床检验研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.20.033

A

1672-9455(2015)20-3055-03

2015-04-10

2015-07-05)