半夏与掺伪半夏及水半夏的鉴别研究

李江维，许润春，王鹏飞，林彦君

(成都中医药大学 药学院 中药材标准化教育部重点实验室 四川省中药资源系统研究与开发利用重点实验室——省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137)



半夏与掺伪半夏及水半夏的鉴别研究

李江维，许润春*，王鹏飞，林彦君

(成都中医药大学 药学院 中药材标准化教育部重点实验室 四川省中药资源系统研究与开发利用重点实验室——省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137)

目的：优化半夏与混淆品水半夏的氨基酸薄层鉴别，并建立半夏与掺伪半夏的薄层色谱和紫外光谱鉴别方法，以期解决市场上半夏的部分掺伪问题，为临床正确用药提供保障。方法：以甲醇为提取溶剂，正丁醇-无水乙醇-水(2∶1∶1)为展开剂，2%茚三酮乙醇试液为显色剂，进行薄层鉴别；采用紫外谱线组法进行鉴别实验。结果：半夏、掺伪半夏及水半夏的薄层色谱图存在明显差异，且特征区别点源于水半夏；半夏、掺伪半夏及水半夏三者水提液、醇提液和石油醚提取液的紫外谱线组图像、最大吸收峰数目及峰位值差异明显。结论：优化的薄层色谱方法不仅可用于半夏与水半夏的鉴别，也可用于半夏与掺伪半夏的鉴别；紫外光谱法也可作为半夏、掺伪半夏及水半夏的鉴别方法，可有效解决市场上半夏的伪品和部分掺假的问题，提高临床用药的可靠性和准确性。

半夏；掺伪半夏；水半夏；薄层色谱法；紫外光谱法；鉴别

半夏为天南星科植物半夏(Pinelliaternata(Thunb.)Breit.)的干燥块茎，又名旱半夏，内服具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结之功效，外用还可消肿止痛，为燥湿化痰、温化寒痰之要药，也为止呕之要药，为临床常用中药材。水半夏与半夏同属于天南星科植物，其燥湿化痰的功效与半夏相同，但无止呕的作用。随着经济的快速发展，半夏的生长环境遭到了严重破坏，其产量急剧减少，市场上半夏供不应求且价格昂贵，而水半夏产量高且价格低廉，因此市场利用水半夏冒充半夏的现象较为常见。半夏与水半夏为两种不同的中药，其功效和主治也不尽相同，以水半夏代替半夏使用，会直接影响药品质量及临床疗效，两者不可相互代用[1]。

TLC是一种快速、灵敏、高效的分离化学成分的方法，是最简单的色谱法技术之一，具有专属性好、分析速度快、设备简单、操作方便、色谱参数易调整等特点。肖海英[2]、王凤玲[3]、许卫峰[4]、冯家龙[5]、张婷[6]、杨培树[7]等采用薄层色谱法对半夏、水半夏的氨基酸进行鉴别，结果均表明：氨基酸薄层色谱可用于半夏与水半夏的鉴别，并将该方法作为二者鉴别的重要依据之一，《中国药典》(2010版)半夏质量标准鉴别项下也将其记载为鉴别方法之一。上述半夏与水半夏的薄层鉴别特征区别点源于半夏，即在薄层色谱图中，与精氨酸对照品色谱相应的位置上，半夏显示出相同斑点，而水半夏未显示该斑点，可达到将正品半夏与伪品水半夏区别的目的。但在使用该方法进行半夏与水半夏的鉴别时笔者发现有不足，如若在半夏饮片中掺杂部分水半夏，则在掺伪品的薄层色谱中也会显示出精氨酸的斑点，因此上述以精氨酸为区别点的鉴别方法可能不适用于“掺伪半夏”的鉴别，从而导致临床用药的准确性、可靠性降低。因此，笔者在上述研究基础上，对该方法进行优化，并建立半夏、掺伪半夏及水半夏的薄层色谱和紫外光谱鉴别方法，以期解决半夏药材部分掺伪的问题，建立更加可靠的半夏药材鉴别方法，为临床用药的可靠性和准确性提供保障。

1 材料与仪器

1.1 材料

半夏：共9批，购自四川千方中药饮片有限公司。

水半夏：共9批，购自四川千方中药饮片有限公司。

1.2 仪器与试剂

LT502E电子天平(常熟市天量仪器有限责任公司)；数控超声波清洗器；TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；双槽展开缸；101-2型电热鼓风干燥箱(上海浦东荣丰科学仪器有限公司)；点样毛细管。硅胶G(青岛海洋化工有限公司分厂，批号：0130416)；CMC-Na(成都市科龙化工试剂厂，批号：20110909)；国产普通硅胶G板(青岛海洋化工有限公司分厂制造，型号：T2354-2010，批号：20130416，规格10cm×20cm)；茚三酮(成都市科龙化工试剂厂，批号：20121012)；正丁醇(成都市科龙化工试剂厂，批号：20121121)；无水乙醇(成都市科龙化工试剂厂，批号：2015011001)；甲醇(成都市科龙化工试剂厂，批号：2014060701)；乙酸乙酯(成都市科龙化工试剂厂，批号：20110309)；氯仿(成都市科龙化工试剂厂，批号：20110419)；石油醚(成都市科龙化工试剂厂，批号：20121024)；浓硫酸(成都市科龙化工试剂厂，批号：20090615)；蒸馏水。实验所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱法

2.1.1 半夏与水半夏的薄层鉴别

取各批次粉碎过一号筛的半夏、水半夏粉末各1g，分别加入甲醇10mL，超声30min(500W，40kHz)，滤过，滤液水浴浓缩至0.5mL，作为供试品溶液。按照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录ⅥB)，吸取上述供试品溶液各10μL，分别点于同一以CMC-Na为黏合剂的硅胶G自制板上，以正丁醇-无水乙醇-水(2∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以2%的茚三酮乙醇试液，在105℃加热至斑点显色清晰，由图可知，半夏与水半夏的色谱图存在差异，且特征区别点源于水半夏，因此优化后薄层色谱法可用于半夏与水半夏的鉴别。显色结果见图 1。

图1 半夏与水半夏薄层鉴别结果

2.1.2 半夏、掺伪半夏及水半夏的薄层鉴别结果

掺伪半夏样品的制备：5%掺伪半夏：取过一号筛的半夏粉末1.9g，水半夏粉末0.1g，混匀，即得。10%掺伪半夏：取过一号筛的半夏粉末1.8g，水半夏粉末0.2g，混匀，即得。20%掺伪半夏：取过一号筛的半夏粉末1.6g，水半夏粉末0.4g，混匀，即得。30%掺伪半夏：取过一号筛的半夏粉末35g，水半夏粉末15g，混匀，即得。40%掺伪半夏：取过一号筛的半夏粉末30g，水半夏粉末20g，混匀，即得。50%掺伪半夏：取过一号筛的半夏粉末25g，水半夏粉末25g，混匀，即得。

取半夏、水半夏粉末及不同比例掺伪半夏各2g，分别加入甲醇20mL，超声30min(500W，40kHz)，滤过，滤液水浴浓缩至1mL，作为供试品溶液。按照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录ⅥB)，吸取上述供试品溶液各10μL，分别点于同一以CMC-Na为黏合剂的硅胶G自制板上，以正丁醇-无水乙醇-水(2∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以2%的茚三酮乙醇试液，在105℃加热至斑点显色清晰，由图2可知，半夏与不同比例的掺伪半夏及水半夏均存在差别，掺有伪品水半夏的“半夏”色谱图中显示出半夏与水半夏的特征区别点，因此该方法可用于掺伪半夏的鉴别。

2.2 紫外光谱法[8]

精密称取半夏、水半夏及“2.1.2”项制备的30%、40%、50%掺伪半夏各6份，每份2g，分别加入蒸馏水、甲醇、无水乙醇、乙酸乙酯、氯仿、石油醚各20mL，超声30min(500W，40kHz)，滤过，根据滤液情况稀释。置1cm石英比色杯中，以相应溶剂做空白对照，进行紫外光谱扫描。以峰位值、峰数目作为该溶剂紫外光谱谱线组的光谱特征数据。根据实验结果可知，半夏与水半夏及不同比例掺伪半夏的水提液、醇提取液及石油醚提取液均存在较大差别。结果见图3～图8，特征峰位值见表 1。

图2 半夏、掺伪半夏及水半夏薄层鉴别

(nm)

图3 半夏、掺伪半夏及水半夏水提液紫外光谱

3 讨论

2010版《中国药典》记载的半夏鉴别方法之一是以甲醇为提取溶剂，采用加热回流的提取方法，以正丁醇-冰醋酸-水(8∶3∶1)为展开剂，对半夏进行薄层鉴别，该实验条件下半夏与水半夏的特征区别点源于半夏。若出现半夏中掺入部分水半夏，采用《中国药典》中的记载方法进行鉴别，色谱图中亦有半夏的特征区别点，难以实现半夏的真伪鉴别。同时，供试品溶液的制备采用加热回流方法提取，操作繁琐且存在一定的安全隐患。本研究在2010版《中国药典》记载的鉴别方法基础上对实验条件进行调整，以甲醇为提取溶剂，采用超声提取的方法制备供试品溶液，以正丁醇-无水乙醇-水(2∶1∶1)为展开剂，进行半夏与水半夏的薄层鉴别，薄层色谱结果表明，半夏与水半夏的色谱图存在差异，且二者的特征区别点源于水半夏，不同比例的掺伪半夏与半夏亦存在差异，若出现上述部分掺伪现象，采用优化后的薄层色谱法亦可鉴别出。此外，本研究还对提取溶剂、提取方法、提取时间、展开剂及比例等进行考察，以确保薄层色谱的分离效果，结果显示：以甲醇为溶剂，超声提取30min，正丁醇-无水乙醇-水(2∶1∶1)为展开剂，点样量为10μL时色谱展开效果较好。同时，也对薄层色谱展开条件的耐用性进行了考察，结果显示展开时温度和环境相对湿度对分离效果有一定影响，进行薄层鉴别时以室温(20℃)、湿度(18%～47%)为宜。展开所用薄层板可为自制硅胶G板，也可用国产普通硅胶G板。因此，该方法既可作为半夏与水半夏的鉴别方法，也可解决半夏部分掺伪难鉴别的问题。

图4 半夏、掺伪半夏及水半夏甲醇提取液紫外光谱

图5 半夏、掺伪半夏及水半夏乙醇提取液紫外光谱

本研究所建立的薄层色谱法分离效果好，灵敏度高，掺伪半夏的鉴别限度最低可达5%。但特征区别点成分仍不明确，有待进一步研究。

图6 半夏、掺伪半夏及水半夏乙酸乙酯提取液紫外光谱

图7 半夏、掺伪半夏及水半夏氯仿提取液紫外光谱

本研究选用多溶剂紫外光谱法[9]进行半夏与掺伪半夏及水半夏的鉴别实验，通过综合比较不同极性溶剂提取液图谱的差异，可达到鉴别的目的。相对于普通紫外鉴别方法而言，克服了因亲缘关系近而难鉴别的情况，实验结果更加可靠。实验中供试品溶液的制备采用超声提取方法，简便、快捷，可有效缩短实验时间。

半夏与水半夏同属天南星科植物，二者亲缘关系较近，所含成分相差不大。但半夏为植物半夏的块茎，水半夏为植物鞭檐犁头尖的块茎，因此二者的化学组成也必然存在差异，为半夏与水半夏鉴别的重要依据。文献[2-8]研究结果也表明二者成分有异同，本研究亦证实该观点。水半夏与半夏均有燥湿化痰的作用，半夏资源缺乏，功效上可灵活代用，但水半夏无止呕作用，代用时应多加注意。

图8 半夏、掺伪半夏及水半夏石油醚提取液紫外光谱

[1] 林芸,邱福莲.半夏与水半夏的区别应用[J].中医中药,2008,5(8):72-73.

[2] 肖海英,曾明,彭学东,等.半夏与水半夏的对比研究[J].中国中医药现代远程教育,2013,11(19):151-153.

[3] 王凤玲,王月英.乌海地区半夏及其混充品水半夏的鉴别[J].内蒙古中医药,2005(1):23-24.

[4] 许卫峰,张保国,刘广河,等.半夏及其混淆品水半夏的鉴别研究[J].中成药,2008,30(4): 561-563.

[5] 冯家龙.半夏与水半夏的鉴别[J].齐鲁药事,2006,25(1): 32-33.

[6] 张婷,尹玉芳.半夏与水半夏的鉴别研究[J].中国中医基础医学杂志,2014,20(2):250-251.

[7] 杨培树.半夏与水半夏的鉴别与研究[J].天津药学,2013,25(4):47-48.

[8] 许卫锋,张保国,李勉,等.紫外光谱组法鉴别半夏与水半夏[J].时珍国医国药,2007,18(5):1191-1192.

[9] 张汉明,许秩峰,秦路平,等.中药鉴别研究的发展和现代鉴别技术介绍[J].中成药,2000,22(1):101-110.

(责任编辑：李岚春)

Identification Study ofRhizomaPinellia,AdulterateRhizomaPinelliaandRhizomaTyphoniiFlagelliformis

Li Jiangwei,Xu Runchun*,Wang Pengfei,Lin Yanjun

(Key Laboratory Breeding Base of Co-founded by Sichuan Province and MOST,Key Laboratory of Systematic Research,Development and Utilization of Chinese Medicine Resources in Sichuan Province,The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine,Pharmacy College,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 611137,China)

Objective:To optimize the discernible methods of amino acid of Rhizoma pinellia and Rhizoma typhonii flagelliformis,and establish distinguish methods of TLC and UV spectrometry with regard to Rhizoma pinellia and adulterate Rhizoma pinellia.In order to solve the proportion adulterate problem of Rhizoma pinellia on the market,and provide security of clinical accurately medication.Methods:Using MeOH as solvent,n-Bu-anhydrous EtOH-H2O(2∶1∶1) as developing agent,and 2% ethanol solution of ninhydrin as colour developing reagent during identification of TLC.Ultraviolet line method was adopted. Results:There are obvious difference between Rhizoma pinellia and adulterate Rhizoma pinellia as well as Rhizoma typhonii flagelliformis,and the distinguish point is derived from Rhizoma typhonii flagelliformis.The UV spectrum of Rhizoma pinellia and adulterate Rhizoma pinellia as well as Rhizoma typhonii flagelliformis gave different maximum absorp tion peaks both in number and intendities.Conclusion:UV spectrometry and optimized TLC can be used to distinguish Rhizoma Pinellia from the others,which can solve the the proportion ad-ulterate problem of Rhizoma pinellia on the market,and improve the accuracy and reliability of clinical medication.

RhizomaPinellia;AdulterateRhizomapinellia;RhizomaTyphoniiflagelliformis;TLC;UV Spectral Method;Identification

2015-07-05

李江维(1990-)，女，成都中医药大学硕士研究生，研究方向为中药炮制与制剂。E-mail: 5768 54819 @qq.com

许润春(1973-)，女，博士，成都中医药大学副教授，研究方向为中药炮制与制剂。 E-mail:309786953@qq.com

R246

A

1673-2197(2015)24-0023-04

10.11954/ytctyy.201524010