乙二胺四乙酸依赖性假性血小板减少症简易纠正方案

郑 军，黄秀霞

(中国医科大学附属第一医院检验科,沈阳 110001)



·论 著·

乙二胺四乙酸依赖性假性血小板减少症简易纠正方案

郑 军，黄秀霞

(中国医科大学附属第一医院检验科,沈阳 110001)

目的 乙二胺四乙酸(EDTA)依赖性假性血小板减少症标本通过肝素锂、枸橼酸钠及改良方案进行纠正，对血小板测定结果进行评估，建立一个简单、实用、且不延长结果报告时间(TAT)的方法。方法 征集EDTA依赖性假性血小板减少症志愿者120例，同时收集肝素锂、枸橼酸钠、EDTA-K3抗凝标本各一份，其中EDTA-K3标本采用改良方法处理后再检测，三组检测结果与参考方法的测定结果进行比较。评估差异有无统计学意义。结果 肝素锂、枸橼酸钠、改良方案的纠正率分别为80.5%、39.2%、100.0%；与参考方法比较，P值分别0.129、0.013、0.051。TAT分别为(2.03±0.29)、(1.8±0.35)、(0.47±0.19)h。结论 肝素锂组的结果与参考方法测定结果相关性最好，可比性最好。其次是改良组和枸橼酸钠组。改良方案对TAT影响最小、不用进行患者的二次采血，并且结果与枸橼酸钠相似，因此该改良方案可以用于临床上对PTCP标本的纠正。

EDTA依赖性假性血小板减少症； 肝素锂； 枸橼酸钠

抗凝剂引起的假性血小板减少症(PTCP)随着真空采血系统的使用而不断增加。全血细胞分析通常以乙二胺四乙酸(EDTA)-K3作为全血的抗凝剂，引起血小板聚集也最为常见，导致EDTA依赖性假性血小板减少症(EDTA-PTCP)的发生。但在日常工作中，几乎所有的抗凝剂均会引起不同程度的血小板聚集。虽然没有证据证明PTCP可引发出血，但是作为临床第二大血小板减少的原因，如果诊断不及时，会导致对患者的无效治疗[1]；因血小板减少而被迫停止患者的一些其他疾病的治疗，如心脏瓣膜置换术后停用抗血小板药物等，可能给患者造成不可弥补的伤害。将EDTA-K3(采用改良方法测定)、肝素锂、枸橼酸钠抗凝全血检测后结果与参考方法进行比较，评估其统计学意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2011～2013年医院就诊者中存在PTCP的志愿者120例，分别收集EDTA-K3、枸橼酸钠、肝素锂抗凝标本。另外对2010～2011年135例PTCP患者中枸橼酸钠纠正80例，肝素锂方法纠正55例，统计结果报告时间(TAT)。

1.2 仪器与试剂 Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪； BD FACSCalibur 流式细胞仪；Sysmex F820单通道血细胞计数仪。试剂均为原厂配套试剂。采血管(EDTA-K3、肝素、枸橼酸钠)购于美国BD公司。

1.3 方法

1．3．1 常规检测 空腹8 h，静息状态抽取静脉全血于EDTA-K3管、枸橼酸钠管、肝素锂管内立即混匀，EDTA-K3标本通过纠正方案后检测。为了除去小红细胞或红细胞碎片对血小板测定的影响。均采用全血细胞计数(CBC)+网织红细胞计数(RET)模式进行，依次分为枸橼酸钠组、肝素锂组及改良组，结果分别与参考方法结果进行比较。

1．3．2 改良方案检测 将标本混匀后，吸取0.5 mL于微量离心管中，连续击打20 s后测定。血小板参考方法参照2005年卫生部颁布的行业标准《WS/T244-2005血小板计数参考方法》进行。

2 结 果

2．1 不同方法的纠正率 枸橼酸钠、肝素、改良法纠正率分别 为39.2%、80.5%、100.0%。与参考方法比较P值分别为0.013、0.129、0.051。只有枸橼酸钠差异有统计学意义(P<0.05),其他方法差异均无统计学意义(P>0.05)。但三种方法均临床可接受(Bias%<12.5%)。

2．2 不同方法的TAT 枸橼酸钠、肝素及改良法TAT分别为(1.8±0.35)、(2.03±0.29)、(0.47±0.19)h。

注：横坐标为参考方法测定的结果，纵坐标为肝素锂测定结果。

图1 肝素锂抗凝结果

注：横坐标为参考方法测定的结果，纵坐标为改良的测定结果。

图2 改良方法测定结果

注：横坐标为参考方法测定的结果，纵坐标为枸橼酸钠管标本测定结果。

图3 枸橼酸钠抗凝结果

2．3 相关性分析 肝素锂与参考方法相关性分析的回归方程是Y=0.965 8X+10.443，R2=0.9757，两种方法相关性好，见图1。改良方法与参考方法相关性分析的回归方程是Y=0.919 5X+15.393，R2=0.9554，两种方法相关性好，见图2。枸橼酸钠与参考方法相关性分析的回归方程是Y=0.925 8X-1.653 5，R2=0.887 8，两种方法相关性有偏差，见图3。

3 讨 论

EDTA-PTCP是一种由常规诱导剂在体外引发的血小板的弱聚集现象，能够引发这种聚集的抗凝剂不局限于EDTA，其他抗凝剂如枸橼酸钠、肝素均可引起[2]。EDTA-PTCP在无症状的人群中的发病率不到0.2‰，然而在住院患者中的发病率可高达0.8‰左右，平均为0.5‰，与国外的报道相符合[3]。目前EDTA-PTCP的发生机制不清楚，它的存在是否会加重或改变其他疾病的血栓或血液学状态也没有得到临床研究的验证。国内外相关文献报道，EDTA-PTCP均为散发，无年龄、性别、药物及个体特征的区别，无出血倾向及家庭史，其他血液与血栓学检查均提示无出血及血栓性疾病的可能。EDTA-PTCP常在自身免疫性疾病(系统性红斑狼疮)、长期重症疾病(如肿瘤、心血管疾病、肝脏疾病、格林巴利综合征)、手术治疗后、烧伤、某些炎症感染(肝炎、腮腺炎、风疹巨细胞病毒等)，某些药物(如美西律、阿昔单抗、抗菌药物等)应用后发生[4-6]。也有文献报道1例EDTA-PTCP母亲所生的孩子也曾在一段时间内表现出EDTA-PTCP[7]。目前报道的可引起血小板凝集的免疫球蛋白主要是IgG、IgM和IgA，同时存在IgG与IgM或者IgG和IgA也有报道，其中主要以IgG与IgM为主。

针对PTCP，纠正方案包括手工采血镜检，硫酸阿米卡星纠正等[8]，国内也有相关报道使用阿米卡星纠正失败的案例报道[9]。此外国内同行尝试使用多种药物(阿米卡星和塞氯匹定)研究不同药物对PTCP纠正的可能与相关性[10]。也有部分关于氟化钠纠正的相关报道[11]。目前，国内推荐方法是3.8%枸橼酸钠抗凝管进行复检，由于枸橼酸钠是一种液体抗凝剂并且以1∶9的抗凝比例添加，测定后会出现10%的稀释误差，导致3种纠正方案中，枸橼酸钠的相关性最差。肝素锂抗凝120例仅有39例不能纠正，但是其引起白细胞的聚集和染色背景偏蓝，不适合进行常规血细胞分析。简易纠正方案是基于PTCP血小板的弱聚集的基础上，这种聚集在体外虽然不可逆，但是却很不牢固，适度震荡可以使血小板重新分散，并且不再聚集[12]。测定结果优于枸橼酸钠纠正的结果，而且可以达到100.0%的纠正率，由于这种纠正方案是对原始采样标本的处理，而且纠正方法简单，又不会延长标本的TAT。其与参考方法的偏差小于1/2CLIA′88的临床可接受限。

可见，相对于枸橼酸钠和肝素方案，纠正方案更加有效、合理，可以大大缩短TAT并减少患者的等待，也不会增加患者二次采样的经济与心理成本。

[1]Yamaguchi M,Mayumi M,Kasuya T.A patient with EDTA-dependent pseudothrombocytopenia who underwent emergent clipping surgery for a ruptured aneurysm[J].Masui，1998，47(1):57-59.

[2]何海洪,陈艳清,贾建,等.枸橼酸钠和EDTA抗凝同时依赖的假性血小板减少症1例[J].广东医学,2013,23(2):3546-3547.

[3]Yoshikawa T,Nakanishi K,Maruta T,et al.Anticoagulant-induced pseudothrombocytopenia occurring after transcatheter arterial embolization for hepatocellular carcinoma[J].Jpn J Clin Oncol,2006，36(8)：527-531.

[4]Nair SK,Shah R,Petko M,et al.Pseudothrombocytopenia in cardiac surgical practice[J].Interact Cardiovasc Thorac Surg，2007，6(4)：565-566.

[5]Carrillo-Esper R,Contreras-Domínguez V.Pseudo thrombocytopenia induced by ethylenediaminetetraacetic acid in burned patients [J].Circulation,2004，72(4)：335-338.

[6]Tu CH,Yang S.Olanzapine-induced EDTA-dependent pseudothrom-bocytopenia [J].Psychosomatics,2002，43(5)：421-423.

[7]Chiurazzi F,Villa MR,Rotoli B.Transplacent altransmission of EDTA-dependent pseudothrombocytopenia[J].Haematologica，1999，84(7)：664：665.

[8]赵丽艳，刘昕鸣，庞孟煜,等.硫酸阿米卡星对EDTA依赖性假性血小板减少症血小板聚集的解离作用[J].吉林大学学报：医学版，2010，36(1)：178-182.

[9]张景全，陈骊婷，石厚荣，等.两例EDTA依赖性假性血小板减少应用阿米卡星无效探讨[J].检验医学,2014,29(6):676-678.

[10]赵凯华，周雄辉， 刘强.两种药物对EDTA依赖性血小板聚集的抑制作用比较[J].西南国防医药，2013,23(6):589-590.

[11]胡先泳， 张宏伟.探讨药物对EDTA依赖性血小板聚集的抑制和解离作用[J].临床血液学杂志：输血与检验版，2014,11(2):272-274.

[12]Sinha SK,Mandal PK,Mallick J.Pseudothrombocytopenia——a caveat[J].J Indian Med Assoc，2011，109(7)：476-478.

Simple correcting scheme of EDTA-dependent pseudothrombocytopenia

ZHENGJun,HUANGXiu-xia

(DepartmentofClinicalLaboratory,FirstAffiliatedHospitalofChinaMedicalUniversity,Shenyang,Liaoning110001,China)

Objective To correct the specimens of EDTA-dependent pseudothrombocytopenia(PTCT) by adopting heparin lithium,sodium sitrate and the improved corrective solution and to evaluate the platelet detection results for establishing a simple,practical method without extending the results report time.Methods 120 volunteer of EDTA-dependent PTCT and each anti-coagulation specimen with EDTA-K3,heparin lithium and sodium citrate were collected,in which the specimens of EDTA-K3was treated by the improved method and then the detection was conducted.The detection results in 3 groups were compared with the detection results by the reference method and whether having the statistical significance was evaluated.Results The corrective rates of heparin lithium,sodium citrate and improved corrective solution were 80.5%,39.2% and 100.0%.TheirPvalues were 0.129,0.013 and 0.051 respectively.Their result report time(TAT) were(2.03±0.29),(1.8±0.35),(0.47±0.19) h respectively.Conclusion The results of the heparin lithium group has the best correlation and the detection results by the reference method and the best comparability,followed by the improved group and the sodium citrate group.The improved corrective scheme has the minimal influence on TAT and without needing to collect blood specimen twice,its detection results are close to those detected by the sodium citrate method.Therefore the improved corrective scheme can be used to correct the PTCP specimens in clinic.

EDTA-dependent PTCP; heparin lithium; sodium citrate

郑军，男，主管检验师，学士学位，研究方向为临床血液学检验，血栓与止血。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.02.015

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1672-9455(2015)02-0177-02

2014-04-22

2014-09-13)