豚鼠经皮给予苦参凝胶Buehler试验研究

金煜文 陈 凯 顾性初 蔡金娜 张 杰*

（1 上海中医药大学中药学院，上海 201203；2 美迪西普亚医药科技（上海） 有限公司，上海 201203）

苦参凝胶是由贵阳新天药业股份有限公司生产的具有抗菌消炎作用的阴道用药，已在临床使用多年，其主要成分为苦参总碱，临床上广泛用于宫颈糜烂、赤白带下、滴虫性阴道炎及阴道霉菌感染等妇科慢性炎症[1，2]。根据国家食品药品监督管理总局（CFDA）《药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》（2014年5月），本研究于2014年10月—2015年5月在通过GLP认证的美迪西普亚医药科技（上海） 有限公司药物安全评价中心进行，为临床安全使用苦参凝胶提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 药物 苦参凝胶及基质均有贵阳新天药业股份有限公司提供，苦参凝胶，批号140814；苦参凝胶（基质），批号140901。

阳性对照品的制备：在黄灯下称取需要量的2，4-二硝基氯苯至合适的容器中，在超净台中将指定量的无水乙醇加至该容器中，混合物被涡旋至均一，为淡黄色色澄清溶液。

1.2 受试动物及饲养条件

1.2.1 受试动物Hartley豚鼠：SPF级，60只，雌性，体重283.2～411.7 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK（京）2012-0001，签发单位：北京市科学技术委员会。实验动物质量合格证号：11400700076304。

1.2.2 饲养条件 每只豚鼠单独笼养在环境可调控房间的不锈钢丝网动物笼中。房间的温湿度每天记录两次，实验中温度和相对湿度范围分别为20.9 ~ 22.6 °C和50~56 %。明暗交替照明每天大约各12小时。自由摄取SPF豚鼠生长繁殖饲料和实验动物饮用水。

1.3 实验方法

1.3.1 分组60只雌性豚鼠根据体重水平随机分为4组，分别为高剂量组（20只）、低剂量组（20只）、基质组（10只） 以及阳性对照组（10只）。

1.3.2 剂量设计 苦参凝胶临床用法用量为“每晚一支，每支装5 g”，密度为1.07 g/mL，即1次/d，4.67 mL/次。高剂量组动物1次/d，0.8 mL/次；低剂量组动物1次/d，0.4 mL/次；基质组动物1次/d，0.8 mL/次。阳性对照组在诱导期给予1 %（W/V） 2，4-二硝基氯苯1 次/d，0.4 mL/次，在 激 发 期 给 予2 % （W/V）2，4-二硝基氯苯1次/d，0.4 mL/次。采用经皮涂抹给药，第一阶段为诱导期，试验第1、8、15日，共3次给予动物。第二阶段为激发期，在诱导期末次给药后第14日一次激发，首次给药定义为试验第一天（D1）。

1.3.3 给药 诱导期：试验前约24小时，将豚鼠背部左侧去毛，去毛范围为6 cm×6 cm。将受试物喷涂在豚鼠背部左侧4 cm×4 cm的去毛区域内，阳性对照品也涂抹在相应区域内；给药后1~2分钟，须待凝胶中溶剂挥发尽干燥后，以一层玻璃纸覆盖，再以无刺激胶布封闭固定6小时后，移去覆盖物，清洗残留受试样品。每次给药前，每组动物给药区相应位置重新去毛。

激发期：试验前约24小时，将豚鼠背部左侧去毛，去毛范围为6 cm×6 cm。将受试物喷涂在豚鼠背部左侧4 cm×4 cm的去毛区域内，阳性对照品也涂抹在相应区域内；给药后1~2分钟，须待凝胶中溶剂挥发尽干燥后，以一层玻璃纸覆盖，再以无刺激胶布封闭固定6小时后，移去覆盖物，清洗残留受试样品。

1.4 指标观察 所有动物每天进行两次笼边观察，观察内容包括发病、损害、死亡率和供食供水情况。实验过程中所有给药动物，每天进行一次详细临床观察，观察包括但不仅限于：皮肤，毛，眼，耳，鼻，口腔，胸部，腹部，外生殖器，四肢，呼吸及循环系统，自主效应（如流涎），神经系统（如震颤，抽搐，应激反应以及反常行为）。

各次致敏后1和24 h观察各组动物全身过敏及过敏反应情况。激发期给药后24 h和48 h观察豚鼠皮肤反应情况，按皮肤过敏反应评分标准（表1） 对每只动物的皮肤过敏反应评分。当受试物组动物出现激发侧皮肤反应积分≥2时，判为该动物出现皮肤变态反应阳性，按皮肤过敏性评价标准（表2） 判定受试物的致敏强度。过敏反应阳性接受标准：按《药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》“但轻-中度的致敏剂在加佐剂的试验中至少30%和不加佐剂试验中至少15%应有反应。”

表1 皮肤过敏反应评分标准 [例（%）]

表2 皮肤过敏性评价标准 （%）

2 结果

2.1 临床体征观察 各动物诱导期及激发期详细临床观察均未见明显异常。

2.2 诱导后观察结果 在诱导后1 h和24 h，各组动物皮肤均未见明显红斑和水肿等过敏反应。

2.3 激发后观察结果 激发24小时后，各组均未出现皮肤过敏反应。激发48小时后，阳性对照组1只动物（1/10例） 出现轻微红斑，1只动物（1/10例） 出现中度红斑、轻度水肿，2只动物（2/10例） 出现轻度红斑、轻度水肿。苦参凝胶低、高剂量组及基质组激发后均正常。

2.4 过敏评价 根据1.4项下过敏反应判定标准可以得出，阳性对照组产生过敏反应，过敏反应发生率为30%，属于中度致敏；苦参凝胶低、高剂量组和基质组均未见局部过敏反应。

3 讨论

苦参凝胶的主要成分为苦参总碱，临床上广泛用于宫颈糜烂、赤白带下、滴虫性阴道炎及阴道霉菌感染等妇科慢性炎症。本试验发现，苦参凝胶皮肤给药对豚鼠无明显致敏作用。此外有很多研究[3-8]是在验证苦参凝胶治疗妇科炎症等疾病的临床疗效的同时，观察了其不良反应的发生情况，结果均表明苦参凝胶的临床不良反应发生率低，无明显毒副作用。

[1]胡珍真，高妍，张杰.苦参凝胶临床应用研究进展[J].中草药，2014，21(45):3204-3207.

[2]刘东泽，胡珍真，张萍，等.苦参凝胶药理作用与临床研究进展[J].上海中医药杂志，2014，11:96-98.

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