绵羊痘病毒感染的诊断与病原分离

王 珅

（辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁 锦州121000）

绵羊痘（Sheeppox，SP）是由绵羊痘病毒（Sheep poxvirus，SPPV）引起绵羊的一种急性、热性、高度接触性传染病。SPPV 是痘病毒科（Poxviridae），山羊痘病毒属（Capripoxvirus）的成员，该病毒具有高度的嗜上皮性，可感染不同年龄和不同品种的绵羊，其中以羔羊最为敏感，感染后引起皮肤和黏膜发生增生性病变，临床上以在感染羊唇、乳房、会阴、尾根以及皮肤无毛少毛处发生丘疹、痘疹和脓疱为特征，若无继发感染，绵羊痘引起的死亡率一般在10%～20%之间。目前，该病广泛流行于世界各养羊国家，该病在我国内蒙古、辽宁、吉林和黑龙江等多个养羊业发达的省市都有该病发生和流行的报道。给养羊业造成严重的经济损失。

1 发病情况

2014 年9 月辽宁省一养殖户从外地新购入小尾寒羊54 只。羊到场后由于更换饲料饲草，以及饲养环境的变化，大多数羊出现食欲不振，挑食。每天下午出去放牧2～3 h，1 周后陆续有5～6 只羊发病，后发展到21 只羊发病，2 周后出现死亡病例，在发病期间新生羔羊5 只，最后统计总发病21 只，死亡11 只。

2 临床症状

发病时出现咳嗽、眼睑发红以及发热症状，最高体温达41.5 ℃，不吃草，离群呆立，之后1～2 d，病羊出现口腔和皮肤病变，最初是在局部皮肤出现红斑，红斑大小如黄豆粒到指甲盖大小，1～2 d 后，红斑变为丘疹突出于皮肤表面，随后丘疹逐渐增大，变为灰白色或淡红色的隆起结节，结节大的直径可以达到4 cm 左右，结节在几天之内转变成典型的水疱，水疱初为透明液体，后变为脓性液体，形成脓疱，最后破溃结痂。出现皮肤损害的部位多是腹股沟、腋下和会阴等皮肤无毛或少毛部位。口腔病变明显，在齿龈和上下腭均可形成水疱，口腔及嘴唇肿胀，流涎严重，病羊眼睑肿胀、流泪、角膜发炎、失明；流鼻涕，咳嗽，呼吸困难，最终衰竭而死。症状轻微的羊不影响食欲和食量，只是偶尔咳嗽、尾根和腿内侧有少量痘疹，在少量水疱破溃后康复。

3 剖检变化

剖检病死羊4 只，可见咽喉、气管、食道等部位有大小不等的圆形或半球形结节；肺充血、水肿,整个肺部分布大量灰白色的结节性病变，结节质地坚实，切面灰白色，肝脏有坏死灶；真胃、瘤胃表面有许多大小不一的结节，个别病例见有糜烂或溃疡病变，小肠空虚，结肠肠壁变薄，黏膜脱落。

4 病原检查

4.1 细菌分离培养 无菌采集病死羊的血液、肝脏、脾脏以及皮肤痘疹做病料触片和涂片，并进行细菌的分离培养，经革兰染色和美蓝染色镜检。未发现细菌感染。

4.2 PCR检测 参照相关文献[1]针对绵羊痘病毒P32基因设计1 对特异性引物，引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，预期扩增的目的片段为1 045 bp。结果利用绵羊痘病毒RNA pol 基因序列设计特异性引物进行PCR 扩增，经琼脂糖凝胶电泳检测，扩增出与预期片段大小一致的条带，大小为1 045 bp，见图1，凝胶回收，克隆测序，经同源性分析，与AY077834 同源性为97.4%，测序结果见图2。

图1 S PPV PC R 电泳

5 诊断

根据小羊发病率高并且死亡率高，以及呼吸道症状为主，口腔、皮肤较薄处出现痘疹做出初步诊断，最终通过PCR 检测确诊，并排出细菌混合感染。

6 病原分离

将采集到的病羊的肺部痘疹组织痂皮剪碎，制作病毒悬液，将其接种于生长良好的原代胎羊肾细胞，从病羊肺组织中分离获得1 株绵羊痘病毒。收集细胞病变液，反复冻融3 次后使用差速离心法对病毒进行纯化。

7 讨论

7.1 关于发病原因的分析 此次羊群发病原因主要有以下几点：第一是引进动物只做了绵羊痘的临床基本检查，并没有作特异性的ELISA 检测和PCR 检测；第二是引进动物没有严格隔离，进场的第2 天就出去放牧；第3 是饲养场周边可能存在绵羊痘的传染源。