戒酒灵酊剂对大鼠亚慢性毒性试验的研究

戒酒灵酊剂是甜瓜蒂的有效提取物，有小毒，具有抗癌，催吐及戒酒之功效。本文通过对戒酒灵酊剂的亚慢性试验研究，了解戒酒灵酊剂对SD大鼠的潜在毒性及可能的靶器官，为临床用药安全提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 戒酒灵酊剂的制备

瓜蒂粗粉，以80%乙醇回流提取制得瓜蒂总提取物后用硅胶柱溶剂极性依次递增分离法(石油醚-乙酸乙酯-甲醇连续洗脱)制得的分段提取物(石油醚I)，(乙酸乙酯II)，(甲醇III)。提取物II为瓜蒂有效部位，主要含有葫芦素类成分。瓜蒂有效部位为类白色粉末，临用时用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)蒸馏水配成所需浓度的混悬液备用。

1.2 试验动物

SD大鼠80只，雌雄各半，购买于辽宁长生生物技术有限公司。实验动物生产许可证号:SLXK(辽)2010-0001;饲养条件:哈尔滨医科大学公共卫生学院SPF级动物中心饲养，实验动物使用许可证号:SYXK(黑)2011007，饲养温度为(24±2)℃，湿度为55%～58%。饲料为大鼠清洁级维持饲料，购自北京科澳协力有限公司(许可证号:SCXK(京)2009-0012)，动物自由饮用双蒸水。

1.3 分组及给药方法

动物饲养适应1周后，随机分为4组，每组20只。高剂量组，100mg/kg(1/2 LD50，相当于临床推荐剂量的10倍);中剂量组，50 mg/kg(1/4 LD50，相当于临床推荐剂量的5倍);低剂量组，10mg/kg(1/20 LD50，相当于临床推荐剂量)。阴性对照组，等体积的生理盐水。采用与临床相同的给药方式，即经口灌胃给药，每日8:00定时给药，连续给药3个月。

1.4 检测指标

每周称量体质量1次，并根据体质量变化调整给药量，给药前12h禁食不禁水，给药期间对动物的各项体征进行观察，主要包括体质量，摄食量，粪便，行为等一般状态。给药3个月后，将大鼠麻醉，腹主动脉取血，室温静置30min后，3000r离心10min，取上清放入EP管中，置于-80℃冰箱中备用，用于血液学(主要检测指标包括白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板)及血液生化学检查(谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST、尿素UREA、肌酐Cr、血糖Glu、血清白蛋白Alb、总蛋白TP、总胆固醇TCH和甘油三酯TG);摘取心、肝脏、肾脏、肺、脑、睾丸/子宫，放入4%甲醛溶液中固定用于组织病理学检查。

1.5 统计学处理

应用SPSS 13.0统计分析软件，采用完全随机设计的方差分析(单因素方差分析)，各组之间两两比较采用SNK-Q检验，多个试验组与一个对照组比较，采用Dennett-t检验，P＜0.05视为差别具有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠体质量变化

大鼠体质量呈增长趋势，各组平均体质量均有增长，但各给药组与对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)，具体结果见图1。

图1 各组大鼠体质量变化

2.2 一般状况

给药期间各组大鼠进食、饮水、步态、精神状态等行为活动与阴性对照组相比未见明显异常变化;高剂量组大鼠在给药后期出现不同程度的腹泻现象，但未见致死，延迟毒性期停止给药后回复正常。

2.3 血液生化学指标

中高剂量组ALT吸光度值与对照组相比差异具有统计学意义。其他各项指标与对照组相比差异无统计学意义。结果见表1～2。

表1 大鼠亚慢性毒性试验血液生化学指标吸光度值()

表1 大鼠亚慢性毒性试验血液生化学指标吸光度值()

注:与阴性对照组比较，※P＜0.05。

组别ALT AST UREA Cr阴性对照组 31.95±2.99 5.85±1.50 7.48±0.76 917.70±72.71低剂量组 40.37±5.71 8.10±1.38 7.35±0.63 869.62±81.95中剂量组 43.97±4.61 7.43±1.06 6.84±0.56 883.50±89.96高剂量组 77.95±2.60※7.85±0.77 5.84±0.52 798.00±86.51

表2 大鼠亚慢性毒性试验血液生化学指标吸光度值()

表2 大鼠亚慢性毒性试验血液生化学指标吸光度值()

组别Glu Alb TP TCH TG阴性对照组4.71±0.55 19.29±1.23 70.51±4.40 0.69±0.06 0.58±0.08低剂量组 4.77±0.47 17.27±1.30 70.04±4.01 0.56±0.08 0.53±0.09中剂量组 5.55±0.74 18.36±0.93 71.39±4.91 0.76±0.07 0.50±0.06高剂量组 5.93±0.56 18.43±1.24 72.34±2.77 0.61±0.06 0.36±0.04

2.4 血液学指标

各剂量组与对照组相比白细胞、红细胞、血红蛋白及血小板含量的差别无统计学意义，检测结果见表3。

表3 大鼠亚慢性毒性试验血液学检测指标()

表3 大鼠亚慢性毒性试验血液学检测指标()

组别 白细胞 红细胞 血红蛋白 血小板阴性对照组5.82±1.05 6.47±0.71 134.60±1.31 957.05±99.86低剂量组 5.75±0.48 7.10±0.23 133.36±3.64 956.33±97.15中剂量组 5.44±0.45 7.11±0.19 133.08±2.36 955.74±79.82高剂量组 5.36±0.81 6.98±0.21 134.85±2.55 956.77±31.30

2.5 组织病理学改变

各剂量组大鼠心肌细胞未见变性和坏死，排列整齐，心肌间质无炎细胞浸润;肾小球系膜无增生，未见炎细胞浸润，肾小管上皮细胞无变性坏死;脑组织中的神经元未见变性坏死，胶质细胞无增生，未见炎细胞浸润;在阴性对照组及低、中剂量组肝小叶结构清晰，无淋巴细胞浸润，肝细胞未见变性坏死，间质无纤维化，在高剂量组可见肝细胞肿胀，轻度空泡变性。如图2。

图2 大鼠肝脏病理学改变

3 讨论

酒滥用和酒精依赖已越来越成为当今世界严重的社会问题和医学问题，酒精依赖已成为世界上前10种致残疾病之一［1］。随着我国经济的快速发展和人民生活水平的提高，酒精生产和消费逐步增加，酒精所致精神障碍的患病率和酒精依赖患病率亦急剧增加，据保守估计我国目前至少有1300～3700万酒精依赖者。因此，积极开展酒精依赖的防治研究具有重要的现实意义。

国外很早即采用戒酒硫治疗酒精依赖，但其药价昂贵，且少数人在治疗中即使少量饮酒亦可出现严重的不良反应，甚至有死亡的危险［2］。戒酒灵酊剂是甜瓜蒂的有效提取物，瓜蒂出自《神农本草经》，又名甜瓜蒂、瓜丁、瓜丁香、苦丁香，为葫芦科植物甜瓜的果柄。全国大部分地区均产，苦寒、有小毒、入胃经，主要作用催吐、退黄疸。课题组前期研究［3］表明，小剂量的瓜蒂对酒欲起抑制作用。小剂量应用可达到淡黄色或微苦，患者饮用后，很快出现恶心、呕吐，排便次数增多等胃肠道反应，反复应用可形成条件反射，即“厌恶疗法”。其作用机制是以巴普洛夫的条件反射学说为理论基础，通过附加某种刺激，使患者在进行不适行为时，同时产生令人厌恶的心理或生理反应。如此反复实施，使不适行为与厌恶反应建成一种条件联系。厌恶治疗属于行为治疗法的一种，其原理是经典的条件反射原理。例如利用催吐药物使病人产生恶心、呕吐感时给患者闻酒味，饮酒，通过数次的治疗，使患者建立对酒精的厌恶条件反射，达到戒酒的作用。为了确保临床用药的安全性和为该制剂的后续临床研究提供实验依据，本文对其进行了大鼠3个月的长期毒性实验。评价长期连续服用戒酒灵酊剂对大鼠血液学、血液生化学、病理组织学等指标的影响，对戒酒灵酊剂的用药安全性进行评价。结果表明，连续给药3个月后，高剂量组大鼠血清ALT水平明显高于对照组，差异具有统计学意义(P＜0.05);高剂量组大鼠肝组织病理学检查可见肝细胞肿胀，轻度空泡变性。说明长期连续给予戒酒灵酊剂在临床用药的5倍以内都相对安全，在临床用量的10倍可出现肝脏的轻微损伤。

［1］姜佐宁.现代精神病学·酒滥用与酒精依赖［M］.北京:科学技术出版社，1999:528.

［2］郝伟.精神病学［M］.5版.北京:人民卫生出版社，2004:81.

［3］陈华昌，夏炎，赵冲保，等.戒酒灵酊剂戒酒作用有效部位的筛选［J］.中医药信息，2012，29(5):22-24.