EphrinA1及其受体EphA1 与VEGF在直肠癌中的表达及相关性研究

张静　林燕830000新疆医科大学附属中医医院



EphrinA1及其受体EphA1 与VEGF在直肠癌中的表达及相关性研究

张静林燕
830000新疆医科大学附属中医医院

摘要目的：探讨EphrinA1及其受体EphA1与VEGF在直肠癌中的表达及相关性。方法：检测直肠癌标本40例与癌旁组织标本40例中EphrinA1、EphA1、VEGF的表达。结果：癌旁组织EphrinA1阳性率、EphA1阳性率、VEGF阳性率低于直肠癌组织(P＜0.01)。直肠癌EphrinA1表达与VEGF的表达呈正相关(P＜0.05，r=0.32)，直肠癌EphA1表达与VEGF的表达呈正相关(P＜0.05，r=0.3)。结论：直肠癌的发生、发展可能和EphrinA1、EphA1、VEGF的异常表达有关。EphrinA1及其受体EphA1有望成为抗血管治疗的新靶点。

关键词EphrinA1；EphA1；VEGF；直肠癌；免疫组化

Expression and correlation study between EphrinA1,receptor EphA1 and VEGF in rectal carcinoma

Zhang Jing,Lin Yan The Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University 830000

Fund project The creating fund of Xinjiang Medica of angiogenesis University(Expression and correlation study of angiogenesis between EphrinA1 and EphA1 in rectal acrcinoma XJC201296)

Abstract Objectives:To study the expression and correlation correlation study between EphrinA1,receptor EphA1 and VEGF in rectal carcinoma.Methods:The expression of EphrinA1,EphA1,VEGF were detected in 40 specimens rectal carcinoma tissue and 40 specimens of paracarcinoma tissue.Results:The positive rate of EphrinA1,positive rate of EphA1,positive rate of VEGF in paracarcinoma tissue were lower than in rectal carcinoma(P＜0.01).The expression of EphrinA1 in rectal carcinoma was positively associated with the expression of VEGF(P＜0.05,r=0.32),and the expression of EphrA1 in rectal carcinoma was positively associated with the expression of VEGF(P＜0.05,r=0.3).Conclusions:The occurrence and development of rectal carcinoma were correlated with abnormal expression of EphrinA1,EphA1 and VEGF.EphrinA1 and EphA1 could become the new targets for the anti-angiogenesis treatment.

Key words EphrinA1;EphA1;Vascular endothelial growth factor;Rectal carcinoma;Immumohistochemistry

直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤，死亡率和发病率都居肿瘤前列，其发生、发展与基因的异常表达和相互作用有关。受体酪氨酸激酶家族参与细胞的分化、生长，是血管形成的重要信号因子。EphrinA1和受体EphA1以及VEGF都是受体酪氨酸激酶的家族成员，EphrinA1及EphA1形成的配体受体复合物在肿瘤中的作用日渐受到关注，但在直肠癌组织中的作用目前尚不清楚。VEGF是一种重要的血管生成诱导因子，诱导肿瘤血管形成，本研究采用免疫组化方法研究EphrinA1、EphA1、VEGF在直肠癌组织中的表达，探讨其对直肠癌发生、发展的作用以及它们之间的相互作用，从而为干预肿瘤发生和肿瘤治疗奠定一定的理论基础。

资料与方法

选取新疆医科大学附属中医医院病理科2012-2014年直肠癌标本40例及癌旁组织标本40例作为研究对象，所有标本均检测EphrinA1、EphA1、VEGF。试剂购自Santa Cruz的试剂及迈新试剂。

方法：采有链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶法(S-P法)。按试剂盒说明书操作，PBS代替一抗作为阴性对照，已知阳性的肿瘤标本作为阳性对照。免疫组化步骤如下：将切片脱蜡置蒸馏水中，PBS冲洗两遍；3%H2O2室温孵育5～10 min，消除内源性H2O2酶活性；蒸馏水洗，PBS浸泡5 min；切片抗原修复；滴加封闭用血清，室温10 min；加入一抗或一抗工作液，在4℃的冰箱中过夜；PBS冲洗两遍；生物素标记二抗，在37℃环境中孵育10～30 min；PBS冲洗两遍；切片加链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液，浸10 min；PBS冲洗3遍；切片DAB显色，显微镜下观察3～10 min。自来水充分洗蒸馏水洗5～10 s；用苏木素复染；用梯度酒精脱水、二甲苯透明、树胶封固。

结果判断：光镜下观察：EphrinA1的表达主要见于肿瘤细胞的胞质或胞膜，在肿瘤血管内皮细胞中也有弱阳性表达，EphA1的表达主要见于肿瘤细胞的胞质或胞膜，在肿瘤血管内皮细胞及一些巨噬细胞中也有表达。VEGF的表达主要见于肿瘤细胞的胞质或胞膜，血管内皮细胞上未见VEGF着色。

统计学处理：采用SPSS 17.0统计软件对数据进行统计学分析，采用χ2检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

结果

EphrinA1、EphA1、VEGF在直肠癌和癌旁组织中的表达：EphrinA1在直肠癌中的阳性率(62.5%)高于癌旁组织中的阳性率(20%)，差异具有统计学意义(P＜0.01)。EphA1在直肠癌中的阳性率(75%)高于癌旁组织中的阳性率(22.5%)，差异具有统计学意义(P＜0.01)。VEGF在直肠癌中的阳性率(70%)高于癌旁组织中的阳性率(27.5%)，差异具有统计学意义(P＜0.01)。见表1。

直肠癌中EphrinA1的表达与VEGF的表达呈正相关(r=0.32，P＜0.05)；直肠癌中EphA1的表达与VEGF的表达具有相关性(r=0.3，P＜0.05)。见表2。

表1　EphrinA1、EphA1、VEGF在直肠癌和癌旁组织中的表达统计

表2　直肠癌中VEGF与EphrinA1、EphA1相关性统计

讨论

EphrinA1、EphA1、VEGF在直肠癌中的作用及EphrinA1、EphA1与VEGF的相关性：直肠癌是常见的消化系统肿瘤，发病率和死亡率均较高，易发生淋巴道、血道转移和消化道种植播散。EphrinA1、EphA1是受体酪氨酸激酶家族成员，EphA1为受体，EphrinA1是酪氨酸激酶受体的配体之一[1]，其与血管生长的关系越来越被重视[2]，参与细胞分化、增殖、细胞内信号传导等过程，在血管生成及肿瘤发生和发展中起着重要作用，EphinA1在膜结合时使Eph受体完全激活[3]，是EphA1高亲和力的配体，依靠糖基磷脂酰肌醇链定位在细胞膜上，和EphA1的结构域结合，使信号传递到细胞膜内，使酪氨酸残基磷酸化，激发信号蛋白如Grb2、RasGTPase2活化蛋白等和SAM区结合，从而使信号传递到下游蛋白，调控血管生成、肿瘤发生及转移。但在各种组织、各种类型的肿瘤中，甚至在相同类型的肿瘤或肿瘤发展的不同阶段，EphA1基因表达情况存在很大差异，提示此类基因功能的多元性。Hirai等通过Northern印迹法发现[4]，EphA1的mRNA水平在结肠癌、肺腺癌、肝癌和乳腺癌中有高表达，本研究显示EphrinA1和EphA1在直肠癌中的表达高于癌旁组织的，提示EphrinA1、EphA1高表达与直肠癌的发生有关，EphrinA1通过和EphA1结合，调控下游信号传递，从而影响肿瘤生物学特性，最终影响肿瘤血管生成[5]，促进直肠癌生长、转移。VEGF是近些年发现的和血管增殖有关的多肽生长因子，能特异高效促进血管内皮细胞分裂，通过多种机理实现血管生成，不仅能促使新血管生成，同时也能促使肿瘤血管生成和转移。本研究显示VEGF在直肠癌中的表达高于癌旁组织的，提示VEGF高表达与直肠癌的发生有关，VEGF通过诱导肿瘤血管的形成，为肿瘤迅速生长及转移提供有利条件。本研究显示VEGF与EphrinA1的表达、VEGF与EphA1的表达均呈正相关，提示其具有协同作用，通过不同的作用途径，共同参与直肠癌的发生、发展、浸润、转移。

EphrinA1及其受体EphA1有望成为抗血管生成治疗的新靶点：有关Eph基因在肿瘤中作用的报道逐渐增多[6]，EphrinA1与其受体EphA1结合，调节肿瘤血管内皮细胞的激活、黏附、转移、渗透，从而调节和影响肿瘤的血管形成[7，8]，促进肿瘤生长、浸润、转移，EphrinA1及受体EphA1可以作为一个很有希望的抗血管治疗的新靶点，为肿瘤治疗提供新思路、新方法。随着EphrinA1及受体EphA1基因调控肿瘤生成的机制进一步的阐明，有望从病因学上研究直肠癌的发生，从而为预防直肠癌的发生提供理论基础。

参考文献

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[4]王建东,周晓军.酪氨酸激酶受体Eph基因及其与肿瘤的关系[J].医学研究生学报, 2006,19(10):935-938.

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[7] Wykosky J,Palma E,Gib DM,et al.Soluble mono-meric EphrinA1 is released from tumor cells and is a functional ligand for the EphA2 receptor[J].Onco-gene,2008,27(58): 7260-7273.

[8]Larsen AB,Stockhausen MT,Poulsen HS. Cell adhe-sion and EGFR activation regulate EphA2 expression in cancer[J].Cell Signal,2010,22(4):636-644.

基金项目新疆医科大学创新基金(直肠癌EphrinA1及EphA1表达与血管生成关系的研究XJC201296)

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2015.35.82