HPLC-ELSD法同时测定感愈胶囊中胆酸和猪去氧胆酸的含量

王 蕾，仇其原

盐城市药品检验所，盐城 224002

HPLC-ELSD法同时测定感愈胶囊中胆酸和猪去氧胆酸的含量

王 蕾，仇其原

盐城市药品检验所，盐城 224002

目的：建立HPLC-ELSD法同时测定感愈胶囊中胆酸和猪去氧胆酸的含量。方法：采用Capcell PAK MGⅡ C18色谱柱，以乙腈-水（55∶45）为流动相进行测定。结果：胆酸和猪去氧胆酸分别在0.0614～0.3684 mg·mL-1（r=0.9995）和0.0423～0.2538 mg·mL-1（r=0.9992）范围内进样量与峰面积的对数具有良好线性关系；两者平均回收率分别为99.52%、99.83%，RSD分别为0.74%、0.87%（n=6）。结论：本法简便、准确、分离效果好，可用于感愈胶囊的质量控制。

感愈胶囊；胆酸；猪去氧胆酸；HPLC-ELSD法；含量测定

感愈胶囊是由板蓝根、金银花、人工牛黄、对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺等制备而成的复方制剂。主要用于风热感冒所致的发热、流汗、鼻塞、咽痛、咳嗽。现行质量标准“含量测定”项下仅收载对乙酰氨基酚和盐酸金刚烷胺的含量[1]。其中人工牛黄具有清热解毒、化痰定惊的作用，而胆酸和猪去氧胆酸是其主要成分，为了更好地控制感愈胶囊的质量，笔者参考文献[2-3]，建立了HPLC-ELSD法同时测定感愈胶囊中胆酸和猪去氧胆酸的含量，结果表明该法灵敏度、稳定性和重现性均能满足测定要求，是一种检测感愈胶囊中胆酸和猪去氧胆酸的有效方法。

1 仪器与试药

Agilent 1200 Series高效液相色谱仪；Varian 380-LC ELSD检测器；XS205DU电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

胆酸对照品 （批号：100078-200414，纯度98%），猪去氧胆酸对照品（批号：100087-200610，纯度97.3%），均为中国药品生物制品检定所提供；感愈胶囊（每粒含人工牛黄10 mg，通药制药集团股份有限公司，批号为130503、130609、130912）；甲醇、乙腈为色谱纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液 精密称取胆酸对照品30.70 mg与猪去氧胆酸对照品21.15 mg，置于50 mL量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。精密量取贮备液3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每毫升含胆酸0.1842 mg、猪去氧胆酸0.1269 mg的对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液 取感愈胶囊10粒，精密称定，研细，混匀，精密称取内容物1.0 g置10 mL量瓶中，加甲醇适量超声处理30 min，取出，放至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.2 色谱条件

色谱柱：Capcell PAK MGⅡC18（4.6mm×150mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（55∶45）；流速：0.6 mL·min-1；柱温：30℃；进样量：10 μL；ELSD检测器漂移温度为100℃；雾化气体为空气，气流速度为1.8 L·min-1。

2.3 专属性试验

在“2.2”色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，在此条件下，胆酸与猪去氧胆酸的分离度符合规定，峰形良好，阴性样品无干扰。结果见图1。

图1 对照品（A）、供试品（B）、阴性对照（C）色谱峰图

2.4 线性关系考察

分别精密吸取对照品贮备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL各置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。在“2.2”色谱条件进样测定。以进样量对数值（X）为横坐标，峰面积对数值（Y）为纵坐标，制得胆酸、猪去氧胆酸的回归方程分别为Y=1.4662X+1.7837，r=0.9995和Y=1.5328X+1.6976，r=0.9992。结果表明，胆酸和猪去氧胆酸分别在0.0614～0.3684 mg· mL-1、0.0423～0.2538 mg·mL-1范围内线性关系良好。

2.5 进样精密度试验

精密吸取“2.1.1”项下对照品溶液10 μL，在“2.2”色谱条件下重复进样6次，测得峰面积的RSD（n= 6）分别为1.02%、0.98%。结果表明进样精密度良好。

2.6 重复性试验

取同批次样品（批号130503）5份，按“2.1.2”项方法制备供试品溶液，按“2.2”项色谱条件测定，结果胆酸、猪去氧胆酸含量的RSD分别为0.87%、0.92%。

2.7 稳定性试验

取同一批次样品（批号130503），按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取同一供试品溶液10 μL，于0、2、4、8、12、24 h进样，注入液相色谱仪，按“2.2”项下色谱条件测定，记录色谱峰面积。结果胆酸和猪去氧胆酸峰面积的RSD分别为0.95%、1.01%（n=6），表明样品在24 h内稳定性良好。

2.8 加样回收率试验

取已知含量感愈胶囊（批号130503）的内容物约0.5 g共6份，精密称定，分别置10 mL量瓶中，精密加入对照品溶液3 mL，按“2.1.2”项方法制备供试品溶液并测定含量，计算回收率，见表1。

2.9 样品含量测定

取3批感愈胶囊，照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，以“2.2”项下色谱条件测定，按外标法计算。结果样品中胆酸的含量为0.73、0.75、0.69 mg/粒，猪去氧胆酸的含量为0.45、0.43、0.41 mg/粒（n=5）。

表1 胆酸和猪去氧胆酸加样回收试验结果

3 讨 论

胆酸和猪去氧胆酸的紫外吸收较弱，如按《中国药典》2010版一部“清开灵注射液胆酸”项下测定波长192 nm检测[2]，基线噪声较大，供试品溶液中胆酸和猪去氧胆酸不能分离。经试验，采用HPLCELSD法同时测定胆酸和猪去氧胆酸的含量，简化了实验操作，提高了测定的灵敏度，同时具有基线平稳、峰形良好等优点。

[1] 国家药品监督管理局标准（试行）WS-10368（ZD-0368）-2002-2012Z[S].

[2] 国家药典委员会.中华人共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：1110-1.

[3] 罗晓茹，曹 红，邢俊波，等.人工牛黄及其制剂中胆酸含量测定的研究进展[J].解放军药学学报，2009，25（3）：247-9.

Determination of Cholalic Acid and Hyodeoxycholic Acid in Ganyu Capsules by HPLC-ELSD

WANG Lei,QIU Qi-yuan
Yancheng Institute for Drug Control,Yancheng 224002

Objective:To simultaneously determine cholic acid and hyodeoxycholic acid in Ganyu capsules by an HPLC-ELSD method.Methods:The column was Capcell PAK MGⅡ C18,the mobile phase was acetonitriles-water (55∶45);ELSD was used for detection.Results:The linear ranges of cholalic acid and hyodeoxycholic acid were 0.0614-0.3684 mg·mL-1(r=0.9995)and 0.0443-0.2538 mg·mL-1(r=0.9992), respectively,with average recoveries at 99.52%(RSD=0.74%,n=6)and 99.83%(RSD=0.87%,n=6)respectively.Conclusion:The method is simple and accurate with good separation,and it is applicable for the quality control of Ganyu capsules.

Ganyu capsules;Cholalic acid;Hyodeoxycholic acid;HPLC-ELSD;Determination

R927.2

A

1673-7806（2015）06-571-02

王蕾，女，副主任药师 E-mail:hujun7273@126.com

2015-05-13

2015-08-10