离子色谱法测定盐酸法舒地尔注射液中的高哌嗪

沈艳丽，刘建平

(鲁南制药集团股份有限公司，国家手性制药工程技术研究中心，山东临沂276006)

离子色谱法测定盐酸法舒地尔注射液中的高哌嗪

沈艳丽，刘建平

(鲁南制药集团股份有限公司，国家手性制药工程技术研究中心，山东临沂276006)

摘要:目的建立盐酸法舒地尔注射液中高哌嗪含量的离子色谱检测方法。方法采用IonPac CS12A(4 mm ×250 mm)阳离子交换色谱柱;以20 mmol·L－1甲磺酸水溶液－乙腈(80∶20)为淋洗液，流速为1.0 mL·min－1;外接抑制器，以100 mmol·L－1四丁基氢氧化铵水溶液为再生液;进样量为50 μL，检测器温度为30℃。结果高哌嗪在0.30～7.56 μg·mL－1浓度范围内线性关系良好(r=0.999 7)，平均回收率为99.99%。结论该法灵敏度高、专属性强、重现性好，可用于盐酸法舒地尔注射液中高哌嗪的含量测定。

关键词:离子色谱;抑制器;盐酸法舒地尔注射液;高哌嗪

盐酸法舒地尔(Fasudil Hydrochloride)是异喹啉磺胺衍生物，由旭化成制药株式会社开发，其注射液于1995年在日本首次上市，在临床上用于蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛等引起的缺血性脑血管疾病症状的改善［1～4］。离子色谱法(IC)是一种主要用于阴、阳离子的新型分析技术，具有选择性好，灵敏、快速、简便、环保，近年来也被应用于药物及合成中间体的分析等方面［5～7］。高哌嗪为盐酸法舒地尔的原料和降解产物，张锦梅等［8］采用非抑制电导离子色谱法对盐酸法舒地尔原料中高哌嗪进行了测定，但灵敏度较低。而陈梅兰等［9］采用抑制性离子色谱法对盐酸法舒地尔原料中高哌嗪进行了测定，灵敏度高。至今未见盐酸法舒地尔注射液中高哌嗪含量测定方法的报道，而盐酸法舒地尔降解亦会产生高哌嗪［10］，因此为了严格控制盐酸法舒地尔注射液的质量，需要对高哌嗪进行检查。由于高哌嗪没有紫外吸收，极性又较大，用高效液相色谱(HPLC)法无法进行有效检测。本文采用离子色谱法，建立了盐酸法舒地尔注射液中高哌嗪含量的测定方法，经方法学验证，该法灵敏度高、专属性强、精密度好、回收率高，可准确测定盐酸法舒地尔注射液中高哌嗪的含量，有效控制盐酸法舒地尔注射液的质量。

1　仪器与试药

1.1仪器戴安1996－2001型离子色谱仪，ECD(电导)检测器; IonPac CS12A(4 mm×250 mm)色谱柱及CG12A保护柱(50 mm×4 mm) ; CMMS300_4mm抑制器; Cascadatm LS MK2超纯水系统(PALL公司) ;梅特勒XS205DU型电子天平。

1.2试药高哌嗪对照品(含量: 99.99%，Alfa Aesar公司，批号: L06392) ;甲磺酸为分析纯;实验用水均为电阻率为18.2 MΩ·cm的超纯水，乙腈(色谱纯，Merck公司) ;盐酸法舒地尔注射液［山东新时代药业有限公司，规格(2 mL: 30 mg)，批号: 131201、131202、131203］。

2　方法与结果

2.1溶液制备供试品溶液:取本品5支，定量转移至25 mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

对照品溶液:取高哌嗪对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1 mL中约含5 μg的溶液，摇匀，滤过，即得。

系统适用性溶液:取本品和高哌嗪对照品各适量，用溶剂溶解并稀释制成每1 mL中约含盐酸法舒地尔6 mg和高哌嗪5 μg的混合溶液，摇匀，滤过，即得。

2.2色谱条件淋洗液:20 mmol·L－1甲磺酸水溶液－乙腈(80∶20) ;再生液:100 mmol·L－1四丁基氢氧化铵水溶液;检测器温度:30℃;流速:1.0 mL·min－1;进样量: 50 μL。溶剂: 20 mmol·L－1甲磺酸水溶液。

2.3专属性试验取空白辅料、系统适用性溶液、对照品溶液和供试品溶液各50 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图见图1。

图1　IC谱图A.空白辅料; B.系统适用性溶液; C.对照品溶液; D.供试品溶液1.高哌嗪; 2.盐酸法舒地尔; 3.钠离子

由图1可见，空白辅料不干扰本品高哌嗪的检查，高哌嗪峰与钠离子峰、盐酸法舒地尔峰的分离度均符合要求，本法能有效检出盐酸法舒地尔注射液中的高哌嗪。

2.4线性与范围取高哌嗪对照品约10 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照储备液;精密量取储备液0.3、1.0、2.5、4.0、5.0、6.0、7.5 mL，分别置100 mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，依法测定，以浓度(C)对峰面积(A)进行线性回归，得高哌嗪的回归方程A=0.056 9C+0.005 8，r=0.999 7(n=7)。结果表明，高哌嗪在0.30～7.56 μg·mL－1浓度范围内线性关系良好。

2.5精密度试验取“2.4”项下的储备液，分别精密量取2.5、5.0、7.5 mL，各置100 mL的量瓶中，溶剂稀释至刻度，分别制成低、中、高浓度的供试品溶液，每个浓度配制3份，分别依法测定，计算得低、中、高浓度供试品溶液峰面积的RSD分别为0.667%、0.331%、0.005%。结果表明本法的精密度良好。

2.6稳定性试验取高哌嗪对照品溶液和盐酸法舒地尔供试品溶液分别于配制后0、1、2、4、6、8、10 h取样依法测定，结果高哌嗪峰面积的RSD为0.45%，盐酸法舒地尔峰面积的RSD为1.98%，结果表明对照品溶液和供试品溶液至少在10 h内稳定。

2.7加样回收率试验取盐酸法舒地尔注射液(批号: 131201) 100支，定量转移至200 mL量瓶中，摇匀，作为校正储备液;精密量取校正储备液10 mL，置25 mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为校正溶液;分别精密量取“2.4”项下高哌嗪对照储备液各2.5、5.0和7.5 mL及校正储备液各10 mL，置同一25 mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为低、中、高浓度的供试品溶液，各3份;按“2.1”项下配制对照品溶液。精密量取上述校正溶液、供试品溶液及对照品溶液各50 μL，依法测定，结果高哌嗪的回收率为99.09%～100.69%，平均回收率为99.99%，RSD为0.54%。说明此法测定本品中高哌嗪的回收率良好。

2.8耐用性试验通过改变流速(±20%)、柱温(±5℃)、流动相中乙腈比例(±5%)后，对照品溶液中高哌嗪峰面积无显著性差异;系统适用性溶液中高哌嗪峰与法舒地尔峰的分离度均符合要求;供试品溶液中均未检出高哌嗪。证明本方法的耐用性较好。

2.9定量限和检测限取高哌嗪对照品溶液逐步稀释，以S/N≈10时，定量限浓度为0.03 μg·mL－1，定量限为1.5 ng;以S/N≈3时检测限浓度为0.01 μg·mL－1，检测限为0.5 ng。

2.10样品测定取盐酸法舒地尔注射液(批号:131201、131202、131203)各适量，依法测定，结果本品3批样品均未检出高哌嗪。

3　讨论

3.1对淋洗液的浓度进行了考察，结果淋洗液浓度为20 mmol·L－1时，峰形较好，灵敏度较高。

3.2为消除背景溶剂干扰，提高灵敏度，外部连接抑制器，分别以CMMS 300_4 mm和CSRS_4 mm抑制器进行试验，发现以CMMS 300_4 mm抑制器，选择四丁基氢氧化铵水溶液作为再生液，当再生液浓度为100 mmol·L－1时，获得理想色谱图，灵敏度高，溶剂无干扰。

3.3该方法快速、方便，灵敏度高、重现性好，高哌嗪峰形较好，溶剂和辅料无干扰，可准确测定盐酸法舒地尔注射液中高哌嗪的含量，有效控制其质量。

参考文献:

［1］孟祥军，齐杰，田莉.12盐酸法舒地尔的合成、药理和临床研究进展［J］.沈阳医学院学报，2010，12(1) : 45 －50.

［2］Yukito S，Makoto K，Toshiya U.Medico－economic evaluation for the treatment of acute ischemic stroke using a placebo－controlled clinical trial of fasudil［J］.Nosotchu， 2007，29 (1) : 22－28.

［3］Otsuka T，Ibuki C，Suzuki T，et al.Vasodilatory effect of subsequent administration of fasudil a Rho－kinase inhibitor，surpasses that of nitroglycerin at the concentric coronary stenosis in patients with stable angina pectoris［J］.Circ J，2006，70 (4) : 402－408.

［4］宋玉才，吕永超.HPLC法测定盐酸法舒地尔注射液的含量［J］.药学研究，2013，32(3) : 90－91.

［5］牟世芬，刘克纳.离子色谱方法及应用［M］.北京:化学工业出版社，2000: 1－3.

［6］吴燕，米亚娴.离子色谱及其在药物分析中的应用［J］.天津药学，2011，23(4) : 50－53.

［7］张莹.离子色谱的应用及新进展［J］.天津药学，2013，25(2) : 67－70.

［8］张锦梅，王珊珊，杨兰玲.离子色谱法测定盐酸法舒地尔中高哌嗪的含量［J］.化学分析计量，2013，22(5) : 24－26.

［9］陈梅兰，张婷婷，叶明立，等.离子色谱法测定盐酸法舒地尔药物中高哌嗪含量［J］.药物分析杂志，2013，33(6) : 999－1002.

［10］石靖，许真玉.盐酸法舒地尔有机杂质的分析与控制［J］.中国新药杂志，2013，22(16) :1878－1881.

Determination of homopiperazine in Fasudil Hydrochloride Injection by ion chromatographic

SHEN Yan-li，LIU Jian-ping
(Lunan Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，National Engineering and Thecnology Research Center of Chirality Pharmaceutical，Linyi 276006，China)

Abstract:Objective To establish an ion chromatographic method for the determination of homopiperazine in Fasudil Hydrochloride Injection.Methods The samples were analyzed on the IonPac CS12A(4 mm×250 mm) exchange column，and connected the external suppressor，the mobile phase was 20 mmol·L－1mesilate in water－acetonitrile(80∶20)，the regen liquid was 100 mmol·L－1tetrabutyl ammonium hydroxide in water，the flow rate was 1.0 mL·min－1，the injection volumn was 50 μL and the detector temperature was 30℃.Results The linear range of homopiperazine was 0.30～7.56 μg·mL－1，r=0.999 7，The average recovery was 99.99%.Conclusion The established method was senstitive，specific，repeatable and suitable for the determination of homopiperazine in Fasudil Hydrochloride Injection.

Key words:Ion chromatographic; Suppressor; Fasudil Hydrochloride Injection; Homopiperazine

通讯作者:刘建平，男，工程师，研究方向:新药质量研究和新药申报，Tel: 0539－5030526，E－mail: jianpingl2007@163.com

作者简介:沈艳丽，女，研究方向:药品分析方法开发及质量研究，E－mail: shenyanli0103@163.com

中图分类号:R927.11

文献标识码:A

文章编号:2095－5375(2015) 10－0581－003