HPLC-ELSD法测定消癌平注射液中牛奶菜醇和果糖含量*

李迩娜，张文萍，滕再进

南京圣和药业股份有限公司，南京 210038

HPLC-ELSD法测定消癌平注射液中牛奶菜醇和果糖含量*

李迩娜，张文萍，滕再进**

南京圣和药业股份有限公司，南京 210038

目的：建立HPLC-ELSD法测定消癌平注射液中牛奶菜醇和果糖的含量。方法：采用COSMOSIL Sugar-D糖分析专用柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），乙腈-水（80∶20）为流动相，ELSD漂移管温度：100℃，氮气流量：2.5 L·min-1。结果与结论：牛奶菜醇和果糖在标准曲线范围内有较好的线性关系（r＞0.9994）。本法简便、准确，为消癌平注射液中大极性成分的质量控制提供了依据。

HPLC-ELSD法；消癌平；牛奶菜醇；果糖

通关藤系萝藦科（Asclep iadaceae）牛奶菜属植物通关藤[Marsdenia tenacissima（Roxb.）Wight et Arn]的干燥藤茎，始载于《滇南本草》，收载于1974年版《云南省药品标准》、1977年版《中国药典》以及2010年版《中国药典》。以通关藤为主要原料制备的中药消癌平注射液，临床上用于治疗肝癌、胃癌等各种恶性肿瘤，疗效良好。

消癌平注射液中化学成分种类较多，主要为C21甾体皂苷类、有机酸及糖类等[1-2]。目前，国内外报道的通关藤或者消癌平注射液的含量测定主要是以绿原酸以及酚酸类成分为指标[3]，未见注射液中大极性成分HPLC法测定含量的报道。为了更好地控制消癌平注射液的质量，为消癌平注射液再评价提供一定的依据，本文测定了消癌平注射液中含量较高的牛奶菜醇以及果糖的含量。由于常规C18柱不适用于测定糖类成分含量，故选用半井公司生产的适合于分析单糖及低聚糖的COSMOSIL Sugar-D糖分析色谱柱，用HPLC-ELSD测定了消癌平注射液中牛奶菜醇和果糖的含量。

1 材 料

1.1 仪器

Agilent 1200 Series高效液相色谱仪 （含G1312A二元梯度泵、G1322A在线真空脱气机、G1329A自动进样器、G1315D DAD检测器、HP Chem Station化学工作站）；Alltech ELSD 2000ES蒸发光散射检测器；Mettler Toledo电子天平（XS105DU）。

1.2 试药

果糖对照品 （批号：100231-200904，纯度99.6%），牛奶菜醇对照品 （批号：NC-0403，纯度：99.9%），均购于中国药品生物制品检定所；消癌平注射液 （规格：20 mL，24批，2012年、2013年各12批，注射液总酚酸含量为9.0～11.0 mg·mL-1，绿原酸含量为40～80 μg·mL-1）南京圣和药业有限公司生产；乙腈为色谱纯；水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：COSMOSIL Sugar-D糖分析专用柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（80∶20）；柱温：25℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量：20 μL；ELSD漂移管温度：100℃；氮气流量：2.5 L·mL-1。牛奶菜醇、果糖对照品和消癌平注射液 （批号：201306081）色谱图见图1。

图1 对照品（A）和消癌平注射液（B）液相色谱图

2.2 溶液配制

2.2.1 对照品溶液 精密称取牛奶菜醇5.80 mg、果糖8.12 mg，分别置20 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液 精密移取消癌平注射液5 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

2.3 标准曲线的制备

分别量取 “2.2.1”中对照品溶液2.5（Ⅰ）、4（Ⅱ）、5（Ⅲ）、7.5（Ⅳ）mL置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别取上述溶液以及“2.2.1”中对照品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，进样浓度的对数logC为横坐标，以峰面积的对数logA为纵坐标进行线性回归，回归方程分别为：牛奶菜醇logA=1.4084logC+8.2044（r=0.9994），线性范围0.073～0.290 mg·mL-1；果糖 logA=1.6593logC+ 7.8800（r=0.9998），线性范围0.102～0.406 mg·mL-1。

2.4 进样精密度试验

取“2.3”项下Ⅲ号溶液20 μL，注入液相色谱仪，连续测定6次，以峰面积计算，进样精密度较好，牛奶菜醇和果糖的RSD分别为1.89%、1.67%。

2.5 稳定性与重复性试验

分别取供试品溶液（批号：201306081）20 μL于0、2、4、6、8 h进样，考察稳定性，样品在8 h内稳定性较好，牛奶菜醇和果糖的RSD分别为1.85%、2.30%。

分别取供试品溶液 （批号：201306081）20 μL，连续进样测定6次，样品含量结果重复性较好，牛奶菜醇和果糖的RSD分别为1.95%、0.85%。

2.6 加样回收率试验

取消癌平注射液（批号：201306081）1mL，置20mL量瓶中，加入精密称取的牛奶菜醇对照品2.52 mg、果糖对照品2.30 mg，用水溶解稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液A；取消癌平注射液（批号：201306081）1 mL，置20 mL量瓶中，加入精密称取的牛奶菜醇对照品3.29 mg、果糖对照品2.86 mg，用水溶解稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液B；取消癌平注射液（批号：201306081）1 mL，置20 mL量瓶中，加入精密称取的牛奶菜醇对照品3.82mg、果糖对照品3.45mg，用水溶解稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液C。分别取供试品溶液A、B、C各20 μL，连续进样3次，计算加样回收率，牛奶菜醇和果糖的平均回收率分别为：96.8%、97.4%，RSD分别为2.78%、1.82%。

2.7 样品含量测定

取消癌平注射液，依法测定其中牛奶菜醇和果糖含量，由表1可见，2012年与2013年消癌平注射液中牛奶菜醇及果糖含量均值较为接近。

表1 消癌平注射液牛奶菜醇和果糖含量测定结果（mg·mL-1）

3 讨 论

消癌平注射液中牛奶菜醇及果糖含量较高，本实验以COSMOSIL Sugar-D糖柱-HPLC-ELSD法测定其含量，两者与其余成分分离较好，为消癌平注射液的质量控制、安全性再评价及通关藤中糖类成分研究提供进一步实验依据。

[1] 成冠蓝，孔令义，张 仓.通关藤化学成分和药理作用研究进展[J].药学与临床研究，2009，17（2）：135-8.

[2] 杨 梅，王文兰，吴 昊，等.通关藤中的孕甾醇苷类成分[J].中草药，2011，42（8）：1473-6.

[3] 赖玉菡，王 曙.HPLC测定通关藤中绿原酸含量[J].华西药学杂志，2006，21（1）：79-81.

Determination of Condiritul and Fructose in Xiaoaiping Injection by HPLC-ELSD*

LI Er-na,ZHANG Wen-ping,TENG Zai-jin**
Nanjing Sanhome Pharmaceutical Co.,Ltd.,Nanjing 210038,China

Objective:To establish a quantitative HPLC-ELSD method for the determination of condiritul and fructose in Xiaoaiping Injection.Methods:A column of Cosmosil Sugar-D(4.6mm×250mm,5μm)was used with the mobile phase of water and acetonitrile(20∶80),the temperature of drift tube was set at 100℃and the nitrogen fIow rate at 2.5 L·min-1.Results and Conclusion:Calibration curves presented good linear regression(r＞0.9994). The established HPLC-ELSD method is simple and suitable for the quality control of Xiaoaiping Injection.

HPLC-ELSD;Xiaoaiping injection;Condiritul;Fructose

R927.2

A

1673-7806（2015）02-135-02

国家“重大新药创新”科技重大专项资助项目（NO.2011ZX09201-201-02）

李迩娜，女，工程师 E-mail:lien@sanhome.com

* *通讯作者滕再进，男，高级工程师 E-mail:tengzj@sanhome.com

2014-09-09

2014-10-21