脑立清丸中胆酸类成分的HPLC指纹图谱

袁晓芳，张 舒

淮安市食品药品检验所，淮安 223300

脑立清丸中胆酸类成分的HPLC指纹图谱

袁晓芳，张 舒

淮安市食品药品检验所，淮安 223300

目的：建立脑立清丸中胆酸类成分指纹图谱，比较、评价不同企业产品之间、同一企业不同批次产品之间的均一性和稳定性。方法：使用中药色谱指纹图谱相似度评价软件对不同产品的相似度进行评价。结果：检验的101批脑立清丸的相似度大多＞0.9。结论：HPLC指纹图谱技术能有效地监测中药制剂的质量；本次抽取的5个厂家的101批脑立清丸制剂质量稳定。

脑立清丸；指纹图谱；质量控制

脑立清丸的处方由磁石、赭石、薄荷脑、冰片、猪胆汁等中药组成，具有平肝潜阳、醒脑安神之功效[1]。市售的脑立清丸处方相同、生产工艺相似，但是现行标准仅对猪胆汁/猪胆粉中猪去氧胆酸予以鉴别，未对猪胆汁/猪胆粉中的其它成分和处方药材质量加以评鉴，无法全面有效地控制脑立清丸的质量。

HPLC指纹图谱技术不受样品挥发性和热稳定性的限制，分离效能高，分析速度快，可有效地对药材和制剂进行质量控制[2-3]。本文建立脑立清丸指纹图谱，对其质量的均一性、稳定性进行评价。

1 材 料

1.1 仪器

Agilent 1200高效液相色谱仪，Alletch 3300 ELSD检测器；中药色谱指纹图谱相似度评价系统（版本：2004A，国家药典委员会）。

1.2 试药

对照品：胆酸（100078-200414），鹅去氧胆酸（110806-200704），猪去氧胆酸（100087-200610），熊去氧胆酸（110755-9003）；均购自中国药品生物制品检定所。

样品：河北A厂家78批，黑龙江B厂家13批，山西C厂家7批，河北D厂家1批，哈尔滨E厂家2批，共101批；以上各批次样品规格皆为每10丸重1.1克。处方药材均为市售药材，经淮安市食品药品检验所中药室鉴定品种正确。

试剂：甲酸、氢氧化钠、盐酸、乙酸乙酯均为市售分析纯，购自南京化学试剂有限公司。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Thermo C18（250 mm×4.60 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.2%甲酸溶液，梯度洗脱，洗脱程序见表1；柱温：30℃；流速：0.8 mL·min-1；漂移管温度45℃；载气为空气，流量1.5 L·min-1；进样量10 μL。

表1 梯度洗脱程序

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取胆酸、鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸和熊去氧胆酸对照品适量，加乙醇制成每1 mL含4种对照品各0.5 mg的溶液。

2.2.2 供试品溶液 精密称取样品粉末3.2 g（取样量依据处方中猪胆汁含量计算得到），加10%氢氧化钠溶液5 mL，120℃加热4 h，放冷，滴加盐酸调节pH值至2，摇匀。用乙酸乙酯振摇提取4次，每次10 mL，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇溶解，转移至10 mL量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。

2.3 系统适应性

2.3.1 精密度试验 取脑立清丸样品 （A厂家，批号：101101）3.2 g，制备供试品溶液后连续进样5次，测定各共有峰相对峰面积和相对保留时间的RSD均小于3.1%。

2.3.2 稳定性试验 取脑立清丸样品 （A厂家，批号：101101），制备供试品溶液后分别在0、1、4、8、12、24 h进样，测定色谱峰相对峰面积和相对保留时间，RSD分别小于1.2%和1.9%。

2.4 指纹图谱

2.4.1 指纹图谱的建立 取5个厂家样品10批及自制样品，按“2.1”项下色谱条件测定，建立脑立清丸的指纹图谱，共有峰为4个。见图1。

图1 脑立清丸中胆酸类成分指纹图谱的共有模式

2.4.2 主要色谱峰的鉴定 取“2.2.1”项下的4种对照品溶液，按“2.1”色谱条件分别进样，所得色谱峰的保留时间与图1中共有峰相对应，说明1、2、3、4号峰为目标色谱峰。

2.4.3 相似度评价 101批脑立清丸进行指纹图谱比较，结果表明：各厂家自我比较相似度均大于0.95，与生成的共有图谱比较，相似度亦大于0.98。以河北A厂78批产品相似度最好，均大于0.99，表明药材及生产工艺稳定性很好。见表2、3、4。

表2 河北A厂家78批脑立清丸样品指纹图谱相似度

表3 其它厂家脑立清丸样品指纹图谱相似度

表4 各厂家及对照药材、自制样品指纹图谱相似度

3 讨 论

3.1 本实验采用HPLC梯度洗脱的方法对不同省份、不同厂家的101批脑立清丸建立指纹图谱分析得到4个共有峰，方法学考察良好，对制剂的鉴别、质控和产品稳定性的研究，提供了实验依据。

3.2 样品的相似度评价结果表明，市售脑立清丸制剂质量参差不齐，提示目前的药品标准不能全面保障制剂质量，有待进一步提高制剂质控指标。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：1012.

[2] 孙国祥，侯志飞，张春玲，等.色谱指纹图谱定性相似度和定量相似度的比较研究 [J].药学学报，2007，42（1）：75-80.

[3] 王艳伟，宋立言，代雪平，等.双黄连注射液HPLC指纹图谱研究[J].中成药，2011，（9）：1461-3.

HPLC Fingprint of Cholic Acids from Naoliqing Pills

YUAN Xiao-fang,ZHANG Shu
Huaian Institute for Food and Drug Control,Huaian 223300,China

Objective:To establish the HPLC fingerprint of cholic acids from Naoliqing pills,and to use it to compar and evaluate the homogeneity and stability of products from different enterprises or different batches of the same enterprise.Methods:The similarity of the products was evaluated by the chromatographic fingerprint software.Results:HPLC fingerprint technology can effectively monitor the quality of traditional Chinese medicine preparation;all the 101 batches of Naoliqing pills form five enterprises have stable quality of preparation.

Naoliqing pills;HPLC fingerprint;Quality control

R927

A

1673-7806（2015）01-037-02

袁晓芳，女，副主任中药师 E-mail:yuanxiaofangzy@163.com

2014-06-12

2014-06-26