小儿薄荷酚洗剂的薄层色谱及HPLC鉴别研究
2015-02-27范永春曾白林何丹丹
范永春,孙 晶,曾白林,何丹丹
(1.江苏省中医药研究院,南京 210028; 2江苏海智生物医药有限公司,南京 210061)
1.樟脑
1-3.样品 4-5.薄荷脑对照品 6.阴性对照
1-3.样品 4.阴性对照 5.苯酚对照品
小儿薄荷酚洗剂的薄层色谱及HPLC鉴别研究
范永春1,孙 晶2,曾白林1,何丹丹1
(1.江苏省中医药研究院,南京 210028; 2江苏海智生物医药有限公司,南京 210061)
目的:建立小儿薄荷酚洗剂的薄层色谱及HPLC鉴别方法,为制定其质量控制标准提供依据。方法:采用薄层色谱法鉴别制剂中薄荷脑、苯酚,采用HPLC鉴别制剂中樟脑。结果:薄荷脑、苯酚的薄层色谱具有鉴别特征,斑点清晰,阴性无干扰,樟脑的HPLC图谱分离度好,阴性无干扰。结论:本方法操作简单,具有良好的重现性和专属性,可用于该制剂的质量控制。
小儿薄荷酚洗剂,薄层色谱鉴别,HPLC鉴别,质量控制
小儿薄荷酚洗剂是本院自制的医院制剂,由樟脑、薄荷脑和苯酚组成,具有清凉止痒作用,临床上用于小儿痱子及汗疹。原制剂标准中仅有简单的理化鉴别,且重现性不是太好,为了更好地控制该制剂质量,笔者采用薄层色谱和HPLC法对其中的薄荷脑、苯酚和樟脑进行定性鉴别。现报道如下。
1 仪器与试药
202-O型电热恒温干燥箱(上海浦东跃欣科学仪器厂);BS 124S万分之一电子分析天平(Sartorius,德国);waters高效液相色谱仪(Waters2996型PDA检测器,美国Waters公司);玻璃点样毛细管(华西医科大学仪器厂)。硅胶G(薄层层析用,青岛海洋化工有限公司);薄荷脑对照品(含量测定用,批号110728-200508)、苯酚对照品(含量测定用,批号100509-201203)、樟脑对照品(含量测定用,批号110747-201409),均购自中国食品药品检定研究院;小儿薄荷酚洗剂(江苏省中医药研究院制剂室生产,批号14029);薄层色谱所用试剂均为分析纯,HPLC所用试剂均为色谱纯,水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 樟脑的鉴别[1]
2.1.1 液相色谱条件 仪器:waters2996型高效液相色谱仪,PDA检测器,色谱柱:waters symmetry C18(150 mm×3.9 mm,5 μm),甲醇-水(70∶30)为流动相,检测波长为288 nm,流速:1 ml/min,柱温:30 ℃。
2.1.2 供试品溶液的制备 取本品1 ml,加入10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液作为供试品溶液。
2.1.3 阴性对照液的制备 取未加樟脑的阴性制剂,按“2.1.2”项下方法制成阴性对照溶液。
2.1.4 对照品溶液的制备 取樟脑对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 ml含0.6 mg的溶液, 作为对照品溶液。
2.1.5 HPLC法鉴别 照高效液相色谱法[《中国药典》2010年版(二部)附录ⅤD]试验,分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl,注入液相色谱仪。供试品呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。阴性对照无干扰。见图1。
1.樟脑
图1 对照品(A)
供试品(B)阴性对照(C)HPLC色谱图
2.2 薄荷脑鉴别[2-3]
2.2.1 供试品溶液的制备 取本品40 ml,放入500 ml圆底烧瓶中,加水100 ml,连接挥发油提取器,自提取器上端加水至刻度,再加入石油醚(60~90 ℃)4 ml,连接冷凝管回流40 min,放冷,取挥发油提取器中石油醚上清液,作为供试品溶液。
2.2.2 阴性对照液的制备 取未加薄荷脑的阴性制剂40 ml,按“2.2.1”项下方法制成阴性对照溶液。
2.2.3 对照品溶液的制备 取薄荷脑对照品适量,精密称定,加石油醚制成每1 ml约含8.0 mg的溶液,作为对照品溶液。
2.2.4 薄层色谱 照薄层色谱法[《中国药典》2010年版(二部)附录ⅤB]试验,吸取上述三种溶液各5 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以苯-乙酸乙酯(9∶2)为展开剂,预饱和20 min,展开,取出并晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液显色,90 ℃加热到斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝色斑点。见图2。
1-3.样品 4-5.薄荷脑对照品 6.阴性对照
图2 薄荷脑的薄层色谱图谱
2.3 苯酚的鉴别[4]
2.3.1 供试品溶液的制备 取本品30 ml,置分液漏斗中,加石油醚(60~90 ℃)30 ml,振摇提取,取下层水液作为供试品溶液。
2.3.2 阴性对照液的制备 取未加苯酚的阴性制剂30 ml,按“2.3.1”项下方法制备阴性对照溶液。
2.3.3 对照品溶液的制备 取苯酚对照品适量,精密称定,加三氯甲烷制成每1 ml约含12.0 mg的溶液,作为对照品溶液。
2.3.4 薄层色谱 照薄层色谱法[《中国药典》2010年版(二部)附录ⅤB]试验,吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液各10 μl,对照品溶液5 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90 ℃)-乙酸乙酯(17∶3)为展开剂,预饱和20 min,展开,取出并晾干,喷以2%对二甲氨基苯甲醛40%硫酸乙醇溶液显色,90 ℃加热到斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同的红色斑点。见图3。
1-3.样品 4.阴性对照 5.苯酚对照品
图3 苯酚的薄层色谱图
3 讨论
樟脑的鉴别中,以苯-乙酸乙酯(9∶2)为展开剂展开,用5%香草醛硫酸溶液显色,则樟脑斑点未能看到,用10%磷钼酸乙醇溶液显色,樟脑斑点呈微弱的浅黄色,几乎看不到,没有看到文献中报道的蓝色及其他颜色的斑点。而气相色谱法鉴别较为复杂[5],故改用高效液相色谱法,方法简便可靠,有利于樟脑的定性鉴别。
薄荷脑的鉴别中,先后以苯-乙酸乙酯(9∶2)和正己烷-乙酸乙酯(85∶15)为展开剂,苯酚和薄荷脑分离度较差,后改用不同比例和不同试剂的展开剂,均未得到理想的分离效果。笔者改变提取方法,利用薄荷脑较易挥发,而苯酚沸点(182 ℃)较高的特性,采用挥发油提取器提取薄荷脑,取挥发油提取器中石油醚上清液作为供试液,从而使其得到分离。若用圆底烧瓶中的水液进行苯酚的薄层色谱鉴别,仍有部分的薄荷脑产生干扰。在进行加热显色时,加热时间较长(7~10 min)才会出现薄荷脑的斑点。
对于苯酚的鉴别,利用苯酚在水中溶解,在石油醚中几乎不溶解,而薄荷脑在石油醚中溶解,在水中不溶解的性质,以石油醚加以萃取,取下层水液作为供试液加以分离。
1 宗永辉,余佳.高效液相色谱法测定硫樟脑涂剂中樟脑含量[J].中国医院药学杂志,2008,28(15):1316-1317
2 张锦. 复方滴鼻液中薄荷脑与樟脑的鉴别[J].中国医院药学杂志,2006,26(5):635
3 余昶,蒋仁发,黄文进.复方软膏中薄荷脑和樟脑鉴别方法的改进[J].海峡药学,2007,19(3):55-56
4 陈祥胜,张长滨. 祛瘀止痛酊的薄层定性鉴别[J].湖北中医学院学报,2005,7(3):30-31
5 管中玉,赵吉平.跌伤灵贴膏质量标准研究[J].湖北中医杂志,2011,33(4):74
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A
1006-5687(2015)05-0020-02