HPLC法测定抗栓胶囊中丹参酮ⅡA的含量

张文琦，王 静

(1.天津市静海县独流分医院，天津 301602； 2.天津市药品检验所，天津 300070)

1.丹参酮ⅡA



HPLC法测定抗栓胶囊中丹参酮ⅡA的含量

张文琦1，王 静2

(1.天津市静海县独流分医院，天津 301602； 2.天津市药品检验所，天津 300070)

目的：建立高效液相色谱法测定抗栓胶囊中丹参酮ⅡA含量。方法：采用色谱柱为Hypersil C18柱，乙腈-0.02%磷酸溶液(63∶37)为流动相，检测波长为270 nm，流速为1.0 ml/min,柱温为35 ℃。结果：丹参酮ⅡA在0.005～0.05 μg/ml浓度范围内具有良好的线性关系，回归方程为Y=6 421 584X-154(r=0.999 9，n=6)，平均回收率为101.2%,RSD为1.5%。结论：该方法快速简便，准确可靠，灵敏度高，可用于抗栓胶囊的质量控制。

抗栓胶囊，丹参酮ⅡA，高效液相色谱，含量测定

抗栓胶囊现收载于《中药成方制剂》第十七册[1]，由当归尾、丹参、僵蚕、土鳖虫等19味药组成，具有活血化瘀、抗栓通脉的作用，用于治疗血栓闭塞性脉管炎瘀血阻络证，对脑血栓、心肌梗塞、血栓性静脉炎等亦有较好的辅助治疗作用。原质量标准仅有显微鉴别，不能有效控制该品的质量。丹参含丹参酮类成分，现代药理研究成果表明，以丹参酮ⅡA为代表的丹参酮类成分具有明显的活血化瘀作用。测定时首先考虑丹参酮ⅡA，其含量测定方法很多，参考《中国药典》丹参药材含量测定方法和有关文献[2，3]，建立了高效液相色谱法测定抗栓胶囊中丹参酮ⅡA的含量，可作为该制剂质量控制的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪(Waters 515)， 紫外检测器(Waters 2487)， 十万分之一天平(Sartorius)， 万分之一天平(精天FA2004A)， 超声清洗仪(Model C3860A)， 隔膜真空泵(天津市津腾实验设备有限公司)。

1.2 试药 丹参酮ⅡA对照品(中国药品生物制品检定所，批号110766-200417)， 抗栓胶囊(哈尔滨大洋制药股份有限公司，批号120103、120715、130408)， 甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、磷酸(分析纯)、水(纯净水)。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)； 流动相：乙腈-0.02%磷酸(63∶37)； 流速：1.0 ml/min； 检测波长：270 nm； 柱温：35 ℃； 进样量：10 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取丹参酮ⅡA对照品10 mg，置100 ml量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取5 ml，转移至10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。即得浓度为0.05 mg/ml的丹参酮ⅡA对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取“装量差异”项下的本品内容物适量，研细，取约5.0 g，精密称定，加甲醇50 ml，加热回流提取2次，每次1 h，取出，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，置25 ml量瓶中定容至刻度，摇匀。经微孔滤膜(0.45 μm)滤过, 取续滤液, 即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方配比称取除丹参以外的其他药材，制备成阴性供试品粉末。精密称取阴性粉末5.0 g，按与供试品溶液相同制备方法处理，作为阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试验 分别吸取丹参酮ⅡA对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl注入高效液相色谱仪。结果表明，依“2.1”项下色谱条件丹参酮ⅡA与其他成分分离较好，阴性对照溶液无干扰，见图1。

1.丹参酮ⅡA

图1 对照品(A)供试品(B)阴性对照(C)HPLC色谱图

2.4 线性关系考查 精密吸取浓度为 0.05 mg/ml丹参酮ⅡA对照品溶液1、2、3、5、8和10 ml，分别置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl注入高效液相色谱仪，记录相应的峰面积值。以进样浓度X为横坐标，以峰面积积分值Y为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=6 421 584X-154(r=0.999 9)。结果表明，在0.005～0.05 μg/ml范围内峰面积与浓度具有良好的线性关系。

2.5 精密度试验 精密量取丹参酮ⅡA对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪, 依“2.1”项下色谱条件进样测定，重复6次，RSD为0.7%，结果表明该方法精密度良好。

2.6 稳定性试验 分别在0、2、4、8和12 h精密吸取供试品溶液10 μl，依“2.1”项下的色谱条件进样测定，RSD为1.1%，结果表明供试品在12 h 内稳定性良好。

2.7 重复性试验 取同一批号样品粉末6份(批号120103)，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备成供试品溶液。精密吸取供试品溶液10 μl，依“2.1”项下色谱条件进样测定，RSD为1.6%。说明该方法的重复性良好。

2.8 回收率试验 精密称取6份已知含量的同一批样品(批号120103)各2.5 g，精密加入丹参酮ⅡA对照品溶液1 ml，再按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算回收率。结果丹参酮ⅡA的平均回收率为101.2%，RSD为1.5%，结果见表1。

表1 回收率试验结果

2.9 样品含量测定 精密称取3批样品各约5.0 g，按“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，依“2.1”项下色谱条件测定。结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 波长的选择 用紫外检测器 Waters 2487对丹参酮ⅡA对照品进行扫描，在269.4 nm的波长处有最大吸收，杂质干扰峰少，再参考《中国药典》中丹参药材的检测波长，最终选择270 nm作为检测波长。

3.2 提取方法和时间 采用甲醇超声(20、30和60 min)和甲醇回流(30 min、1 h和2 h),结果表明相同时间回流比超声提取完全，而回流2 h高于回流1 h的测定结果，因此提取方法采用甲醇回流2 h。

3.3 流动相的选择 比较甲醇-水(62∶38)、乙腈-0.02%磷酸(63∶37)两种不同组分的流动相，发现采用乙腈-0.02%磷酸(63∶37)作为流动相，柱效高，主峰与杂质峰分离效果好，分离度符合要求，故采用此流动相。

1 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂(第十七册)[M].北京：化学工业出版社，1998:119

2 李华荣，孙鑫，高逢喜.高效液相色谱法测定乳舒片中丹参酮ⅡA的含量.中国医院药学杂志，2009，29(17)：1502-1503

3 曾翠梅，林春颖，黄凤婷.高效液相色谱法对枣仁安神颗粒中丹参酮ⅡA含量测定的研究.海峡药学，2012，24(9)：58-60

安全用药

Determination of tanshinoneⅡA in antithrombotic capsules by HPLC

Zhang Wenqi，Wang Jing

(1.Tianjin jinghai county Duliu Hospital Tianjin 301602；2.Tianjin Institute for Drug Control,Tianjin 300070)

Objective： To establish a simple and rapid method for the determination of tanshinoneⅡA in antithrombotic capsule by HPLC. Methods: Hypersil C18chromatographic column was used at an ambient temperature of 35°C with mobile phase consisting of acetonitrile and 0.02% phosphoric acid(63∶37) at a flow rate of 1.0 ml/min.The detection wavelength was at 270 nm. Results: TanshinoneⅡA showed a good linear relationship over the range of 0.005～0.05 μg/ml . The regression equation wasY=6 421 584X-154(r= 0.999 9，n=6).The average recovery was 101.2%，RSD was 1.5%.Conclusions: This method is simple, accurate,sensitive and reliable. It can be applied to quality control of Antithrombotic Capsules.

antithrombotic capsule，tanshinoneⅡA,HPLC，determination

2015-01-19

R927.2

A

1006-5687(2015)05-0027-02