HPLC法测定副鼻窦颗粒中连翘苷的含量
2015-02-27刘彬果
刘彬果,任 涛,张 楠
(解放军第二五四医院,天津 300142)
1.连翘苷
HPLC法测定副鼻窦颗粒中连翘苷的含量
刘彬果,任 涛,张 楠
(解放军第二五四医院,天津 300142)
目的:建立高效液相色谱法测定副鼻窦颗粒中连翘苷的含量。方法:用ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;以乙腈-水(23∶77)为流动相,检测波长为278 nm测定连翘苷的含量。结果:连翘苷在7.35~235.2 μg/ml 范围内线性良好,平均回收率为98.4%,RSD为1.23%(n=9)。结论:该法快速、简便、准确、重复性好,结果可靠,可用于副鼻窦颗粒中连翘苷的含量测定,为全面控制副鼻窦颗粒的质量提供可靠方法。
副鼻窦颗粒,连翘苷,高效液相色谱法
副鼻窦颗粒为解放军第二五四医院多年的临床经验方,由金银藤、连翘、蒲公英等10味中药组成,具有清热解毒的功效,临床适用于急、慢性鼻窦炎,鼻炎,副鼻窦炎,过敏性鼻炎等症状。连翘具有清热解毒、消肿散结的功效,为方中臣药。现有的标准只有中药定性鉴别的方法,没有主要药味的含量测定方法,为了更好地控制副鼻窦颗粒的质量,采用HPLC法以连翘苷作为指标成分进行含量测定,经方法学考查,认为本法简便、准确、无干扰,可用于本品质量控制。
1 仪器与试药
Agilent 1260高效液相色谱仪,OpenLAB CDS色谱工作站,ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;连翘苷对照品(批号120821-201212,购自中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。副鼻窦颗粒由本院制剂室提供(批号14210137,14320115,15070137)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈-水(23∶77);流速:1.0 ml/min;柱温:室温;检测波长:278 nm,进样量:10 μl。理论塔板数按连翘苷峰计算不低于3 000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取连翘苷对照品5.88 mg,置于25 ml量瓶中,加甲醇制成连翘苷标准储备液(0.235 2 mg/ml)。
2.2.2 供试品溶液的制备 取副鼻窦颗粒研细,取约5.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50 ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250 W,频率40 kHz)40 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液20 ml,蒸干,残渣用70%乙醇10 ml使溶解,加在中性氧化铝柱(100~120目,6.0 g,内径1 cm)上,用70%乙醇50 ml洗脱,收集洗脱液,浓缩至干,残渣加适量50%甲醇溶解,转移至5 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液即得连翘苷供试品溶液[1,2]。
2.2.3 阴性对照液的制备 按照处方组成比例,制备不含连翘药材的阴性样品。并按供试品溶液制备方法制备不含连翘的阴性对照液。
2.3 专属性试验 分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液,注入液相色谱仪,按上述色谱条件分别进行测定,记录色谱图。结果显示在与对照品相同保留时间处无色谱峰,说明本品中的其他成分对测定无干扰。见图1。
1.连翘苷
图1 对照品(A)
供试品(B)阴性对照(C)HPLC色谱图
2.4 线性关系的考查 精密称取连翘苷对照品储备液制成浓度为7.35、14.7、29.4、 58.8、117.6和235.2 μg/ml的溶液。按“2.1”项下的色谱条件测定,记录色谱图,以进样量(C)为横坐标,相应的峰面积(A)为纵坐标绘制标准曲线。回归方程为:A=771.2C-1.248 7(r=0.999 7)。结果表明,连翘苷在7.35~235.2 μg/ml范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验 精密吸取连翘苷的同一对照品溶液,按“2.1”项下色谱条件测定,连续进样6次,记录峰面积的RSD值为 0.78%(n=6),表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验 分别取连翘苷的供试品溶液在室温下放置0、1、4、8、10、12和24 h,按“2.1”项下色谱条件分别测定,其峰面积RSD值为1.92%,结果表明样品液在24 h内基本稳定。
2.7 重复性试验 取同一批样品,按“2.2.2”项下方法平行制备样品溶液6份, 按“2.1”项下的色谱条件测定其含量,连翘苷平均含量为1.56 mg/袋。RSD值为1.72%,表明分析方法重复性较好。
2.8 加样回收率试验 取已知含量的同一批号的样品9份,研细,精密称取,精密加入定量的连翘苷对照品溶液,按供试品溶液制备方法制备连翘苷的样品溶液,并按“2.1”项下色谱条件分别测定。结果平均回收率为98.4%,RSD为1.23%。见表1。
表1 连翘苷加样回收率试验结果(n=9)
2.9 样品测定 取样品3批,按“2.2.2”项下方法分别制备供试品溶液,照上述色谱条件测定,外标法定量。计算样品中连翘苷的含量,结果见表2。
表2 样品测定结果(n=3)
3 讨论
副鼻窦颗粒为临床应用多年、疗效确切的颗粒剂,药材品种较多,化学成分复杂,其方中君药为金银藤,连翘为臣药。笔者考查了HPLC法测定方中金银藤活性成分绿原酸的含量,发现阴性干扰严重,专属性差,难以作为定量指标,而采用连翘中连翘苷的含量作为指标成分进行测定,专属性强,可达到质量控制的目的。本研究对副鼻窦颗粒中连翘苷的含量测定色谱条件进行了考查,经过对连翘苷对照品溶液的紫外吸收光谱测定,样品和对照品溶液均在278 nm处有最大吸收,故选择278 nm为检测波长。流动相的选择,采用《中国药典》方法,乙腈-水体系为流动相时,可达到很好分离效果。经考查本文确定色谱条件为乙腈-水(23∶77)为流动相,流速为1 ml/min,检测波长为278 nm。方法学考查结果表明,本方法操作简单,结果准确,重复性好,空白无干扰,可作为副鼻窦颗粒质量标准中含量测定的方法。
1 中国药典[].一部.2010:159-160
2 覃薛文,李志怀. RP-HPLC测定双黄连颗粒中连翘苷的含量[J].中国药师,2008,11(5): 550-551
Determination of forsythin in Fubidou granules by HPLC
Liu Binguo, Ren Tao,Zhang Nan
(No 254 Hospital of PLA , Tianjin 300142)
Objective:To establish an HPLC method to determine the contets of forsythin in Fubidou granules. Methods:Forsythin was determined by HPLC with a ZORBAX SB-C18column(4.6 mm×150 mm,5 μm)at 25 ℃. The mobile phase was composed of acetonitrile and water at a ratio of 23 to 77, and detection wavelength was set at 278 nm. Results:The method was linear for the concentrations of forsythin over the range of 7.35~235.2 μg/ml with the average recovery of 98.4%(n=9). Conclusion:This methods is simple and reliable. It is suitable for the content control of forsythin in Fubidou granules.
Fubidou granules,forsythin,HPLC
2015-07-06
R927.2
A
1006-5687(2015)05-0022-02