IL-23R基因多态性与口腔扁平苔癣的相关研究

和　慧，刘长欢，肖　欣，陈英新

(吉林大学口腔医院 VIP综合科，吉林 长春130021)



IL-23R基因多态性与口腔扁平苔癣的相关研究

和慧，刘长欢，肖欣，陈英新*

(吉林大学口腔医院 VIP综合科，吉林 长春130021)

摘要：目的研究东北地区IL-23R基因多态性与口腔扁平苔癣的相关性。方法采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测66例口腔扁平苔癣患者(其中糜烂型21例)和70例健康健康对照者的IL-23R的两个SNP位点(rs10889677和rs11465817)，分析IL-23R基因多态性与口腔扁平苔癣的相关性。结果 ①rs10889677、 rs11465817位点等位基因、基因型分布频率在病例组和对照组间差异无统计学意义(P>0.05)；② rs10889677位点基因型分布频率在糜烂型与对照组比较差异有统计学意义(P=0.024)， CC+CA基因型个体发生糜烂型的风险是AA基因型的3.115倍(95%CI:1.135~8.548)。结论东北地区OLP人群IL-23R基因rs11465817位点SNP与OLP疾病易感性无明显相关性;rs10889677位点存在多态性变异，可能与 OLP 的疾病易感性和严重程度有关。

(ChinJLabDiagn,2015,19:0722)

口腔扁平苔癣(OLP)是常见的口腔粘膜慢性炎症性疾病。其中0.4%-5.6%病例可发生恶变，被WHO列为癌前病变。IL-23是针对炎症性疾病、自身免疫疾病和肿瘤研究的细胞因子[1]，IL-23R 是调控IL-23 生物活性的关键。相关文献已报道了IL-23R在炎性疾病、自身免疫性疾病的发病机制以及恶性肿瘤的易感性里占重要地位，但其在口腔扁平苔癣的研究几近空白。本研究选取IL-23R基因具有潜在功能性的单核苷酸多态性(rs10889677和rs11465817)为研究位点，以探讨该基因与OLP遗传易感性的关系。

1材料与方法

1.1研究对象病例组为2013年9月～2014年10月到吉林大学口腔医院就诊，临床诊断符合《口腔粘膜病学》(2010 年第 3 版)OLP 诊断标准，且无其他自身免疫性疾病的东北地区居民共66例。对照组为东北地区健康人70例。

1.2DNA样本与引物合成所有患者均抽取静脉血5 mL,EDTA抗凝管低温(-20℃)保存,全血基因组DNA快速提取试剂盒(北京博迈德科技发展有限公司)提取基因组DNA；健康组采用口腔黏膜拭子采取口腔内脱落细胞，口腔拭子基因组DNA提取试剂盒(北京康为世纪生物科技有限公司)提取基因组DNA，备测。引物由上海生物工程，有限公司合成引物序列分别为rs10889677:5’-CTGTGCTCCTACCATCACCA-3’,5’-TGCTGTTTTTGTGCCTGTATG-3’。 rs11465817:5’-CATTAAGTAAGAGATGAAAACTTTGG-3’,5’-CTGTAGTGAGCTGTGACCATG-3’。

1.3PCR与基因测序总反应体系为25μL：PCR扩增条件为94℃预先变性1 min，而后94℃ 30s、62℃ 30 s、72℃ 30s ，5 个循环,然后94℃ 30 s、58℃ 30 s、72℃ 30 s进行30个循环；最后 72℃延伸 5 min。将PCR 产物送上海生工测序部进行基因测序。

1.4统计学分析使用Chromas软件根据IL-23R目的基因位点正常碱基排列序列寻找目的位点的等位基因,并计算等位基因的表现频率。计算各组等位基因频率,确认其是否符合Hardy-Weinberg平衡定律。多态性等位基因频率比较采用SPSS17.0软件进行卡方检验，P<0.05为具有统计学意义。多态性位点与疾病风险的相关性检验用比值比(OR)及其95%可信区间(95%CI)表示，检验水准α=0.05。

2结果

2.1病例组及健康对照组均符合Hardy-Weinberg平衡定律，基因遗传平衡具有群体性。

2.2IL-23R基因2位点病例组与对照组等位基因及基因型分布比较由表1可见,病例组和对照组IL-23R基因2个多态性位点等位基因及基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。

表1　IL-23R基因等位基因、基因型频率在病例组和对照组中的分布〔例数(%)〕

2.3IL-23R基因2位点基因型分布频率在糜烂型、普通型和对照组中的分布比较由表2可看出：rs11465817位点在普通病例组和糜烂型中基因型分布与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)；rs10889677位点基因型分布在普通病例组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，而糜烂型与对照组比较,差异有统计学意义(P=0.024)，危险分析显示CC+CA基因型与纯合突变型AA相比其OR值为3.115(95%CI为1.135-8.548),提示含有C等位基因的CC+CA基因型对OLP的疾病易感性和严重程度风险增加2.115倍。

表2　IL-23R基因rs10889677、rs11465817位点基因型分布频率在糜烂型、普通型和对照组中的分布

注：表中P值为各组与对照组比较结果

3讨论

OLP 为口腔黏膜常见的一种非感染性慢性炎症，多见于女性。主要损害为黏膜表面出现白色网状花纹或斑块，并有部分患者在损害区范围内发生糜烂，临床上根据病损基部黏膜状况分为充血糜烂型或非糜烂型。因口腔扁平苔藓有癌变潜能，故WHO将其列入潜在恶性病范畴。其病因和发病机制尚不明确，为一种多因素(包括遗传、自身免疫、精神神经因素、药物、内分泌与代谢障碍、感染、慢性病灶等)介导的自身免疫反应。近年来对于其发病机制的研究多在T细胞介导的免疫损伤方面。IL-23是2000年发现的，一个拥有异二聚体结构的前炎症因子，可导致人类T细胞的增殖和γ-干扰素(IFN-γ)的产生。IL-23是连接先天性免疫和获得性免疫的细胞因子， IL-23 必须通过与靶细胞表面高亲和力的特异性IL-23R结合后才能发挥其生物学效应。因此,IL-23R是调控IL-23 生物活性的关键。当IL-23 与IL-23R 结合后，诱导幼稚的CD4+ T 淋巴细胞向Th17 细胞分化和增殖，促使Th17细胞分泌大量IL-17，形成IL-23 /IL-23R/Th17 /IL-17通路。该通路是机体炎性反应中的重要组成部分，其功能紊乱是引起自身免疫性疾病的重要原因之一[2，3]。已有研究证实，IL-23R的基因多态性与多种疾病(炎性疾病[4]：如克罗恩病、溃疡性结肠炎，自身免疫性疾病：如银屑病[5]、强直性脊柱炎[6]、白塞病[7]等，恶性肿瘤：如卵巢癌[8]、食管癌[9]等)易感性及严重程度相关联。

本研究结果显示：IL-23R基因rs10889677、rs11465817位点基因型及等位基因频率的分布在病例组和对照组中差异无统计学意义(P>0.05),而在病例组中的糜烂型与普通型分组中发现rs11465817位点基因多态性与OLP的易感性无明显相关性。rs10889677位点在糜烂型与对照组中基因型频率分布差异有统计学意义(P<0.05)。危险分析显示CC+CA基因型与纯合突变型AA相比其OR值为3.115,提示含有C等位基因的CC+CA基因型对OLP的疾病易感性和严重程度风险增加2.115倍。综上，IL-23R基因多态性与OLP的易感性与严重程度有关。

本研究探讨IL-23R基因多态性与OLP的相关性，以期更多对于OLP的基因多态性的研究，为OLP的发病机制提供更多遗传学依据。

参考文献：

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[3]Maloy KJ.The interleukin-23/interleukin-17 axis in intestinal inflammation[J].J Intern Med,2008,263( 6):584.

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[5]Wu Y,Lu Z,Chen Y,et al.Replication of association between inter-leukin-23 receptor(IL-23R) and its ligand(IL-12B) polymorphisms and psoriasis in the Chinese Han population[J].Hum Immunol,2010,71(12):1255.

[6]Sáfrány E,Pazár B,Csöngei V,et al.Variants of the IL23R gene are associated with ankylosing spondylitis but not with Sjögren syndromein Hungarian popula-tion samples[J].Scand J Immunol，2009,70(1):68.

[7]Jiang Z,Yang P,Hou S,et al.IL-23R gene confers susceptibility to Behcet’s disease in a Chinese Han population[J].Ann Rheum Dis,2010,69(7):1325.

[8]梁叆琳,卢俊伟,李钠,等.IL-23R 基因多态性与中国汉族妇女子宫内膜癌的相关性研究[J].四川大学学报:医学版，2010，41(4):706．

[9]肖勇,陈维,曹维克,等.IL23R基因多态与食管癌遗传易感性的关联研究[J].南京医科大学学报:自然科学版,2011,31(4)513-521.

关键词：IL-23R；基因多态性；口腔扁平苔癣

Association between interleukin 23R gene polymorphisms and oral lichen planusHEHui,LIUChang-huan,XIAOXin,etal.(DepartmentofVIP,StomatologyHospitalofJilinUniversity,Changchun130021,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate single nucleotide polymorphisms(SNP)of interleukin 23R gene with oral lichen planus(OLP) in northeast china,and to provide an important genetic basis in exploring the disease susceptibility and diverse clinical manifestation.Methods66 patients with OLP ( 21 erosive OLP patients) and 70 healthy control subjects were recruited.Genomic DNA was extracted and PCR products spanning two SNPs of the IL-23R gene at positions(rs10889677 and rs11465817)were analyzed.The genotype frequencies were calculated and analyzed.Results ①The rs10889677,rs11465817 allele and genotype frequency distribution of the difference in the case group and the control group had no statistical significance (P>0.05).②The rs10889677 genotype frequency distribution in erosive compared with the control group had significant difference (P=0.024),the CC+CA genotype of the individual risk occurrence of erosion type is 3.115 times of the AA genotype (95%CI:1.135~8.548).ConclusionThe Northeast OLP population of IL-23R gene rs11465817 locus SNP had no significant correlation existed in OLP disease susceptibility;polymorphism of rs10889677 point mutation,may be associated with disease susceptibility and severity of OLP.

Key words:interleukin 23R gene ;single nucleotide poly- morphisms;oral lichen planus

(收稿日期：2015-01-07)

作者简介：和慧(1988-)，女，吉林大学口腔医学院研究生；陈英新，教授，硕士生导师，研究方向为口腔粘膜病。

文献标识码：A

中图分类号：R781.5

文章编号：1007-4287(2015)05-0722-03

*通讯作者