液基薄层细胞学检查在痰液肺癌细胞筛查中的价值

林淑端，陈石桥，潘啟森

（佛山市南海经济开发区人民医院，广东 528234）

液基薄层细胞学检查在痰液肺癌细胞筛查中的价值

林淑端，陈石桥，潘啟森

（佛山市南海经济开发区人民医院，广东 528234）

目的探讨液基薄层细胞学检查（TCT）在痰液癌细胞筛查中的应用及价值。方法选取2011年1月1日至2013年12月30日该院呼吸内科收治的肺癌患者共300例，按照检查方法不同分为观察组（100例）和对照组（200例）。观察组采用TCT法进行检测，对照组采用痰液传统涂片检查进行检测，比较两组患者阳性诊断率。结果对照组阳性诊断率[51.5%（103/200）]低于观察组[74.0%（74/100）]，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论肺癌采用TCT检查诊断率高，且显著优于传统检查方法。

肺肿瘤； 活组织检查； 细胞学技术； 痰； 液基薄层细胞学

痰细胞学检查是临床上肺癌普查及诊断的一种简便有效的方法，相关细胞学研究发现，原发性肺癌患者痰液中存在脱落的癌细胞，通过痰液检查可进行初步诊断并具有较高的诊断率[1]。临床上常见的检查方法为传统涂片检查，但检查中因受到多重因素（如涂片中存在大量血细胞、黏液等杂质，易对检查结果造成干扰）的影响，导致阳性诊断率较低，且检测中需要抛弃大部分的样本细胞，易造成标本浪费[2]。液基薄层细胞学检查（TCT）作为一种新型的细胞学检查方法，已在临床癌细胞检查中广泛应用并取得较好效果。本研究选取本院呼吸内科收治的肺癌患者共300例，重点观察并探讨TCT、传统涂片方法在痰液癌细胞筛查中的应用，现将相关研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011年1月1日至2013年12月30日本院呼吸内科收治的肺癌患者共300例，其中男200例，女100例；年龄25～75岁，平均（44.7±2.7）岁。所有患者均经外科手术切除病理或纤维支气管镜活检诊断证实。其中肺鳞癌104例，肺腺癌102例，小细胞肺癌94例。所有患者均接受痰细胞学检查，按照检查方法不同分为观察组（100例）和对照组（200例）。对照组中男108例，女92例；年龄23～76岁，平均（43.5±2.4）岁。观察组中男54例，女46例；年龄25～75岁，平均（44.7±2.7）岁。两组患者性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法 检测前进行标本采集（住院患者早上进食前咳痰取样），要求所有患者咳痰前清水漱口，清除口腔内的唾液、食物残渣，保持口腔洁净。取受检者咳出痰液1～2口并保存于痰标本瓶中，保存过程中避免“口水样”泡沫痰及鼻吸痰，填写好申请单送检。

1.2.1 传统痰液染色及TCT检查方法 对照组采用传统痰液染色进行检查，检查前将使用的玻璃器具清洗干净、烘干备用，用1支滴管吸取10～20 mL痰液作浓集法用，采用抗酸染色液配制，将痰液制成传统涂片4张（痰涂片时优先选择带有血丝或蛋清样透明黏液痰），巴氏染色，树脂胶封固后显微镜下阅片[3]。观察组采用TCT进行检测，仪器为美国新柏氏超薄细胞检测仪。TCT的制片方法：将痰液的一小部分直接加入40 mL清洗液中，并吸取7～8滴消化液混匀振荡，约10 min后进行2 500 r/min离心处理，时间为5 min。根据标本黏液量加入黏液稀释液，混匀静置30 min，充分震荡，确保黏液完全消化离心后放置进行沉淀，并采集沉淀物进行保存，然后用Thin Prep制成薄层细胞涂片进行检查（过滤黏液丝，通过样本转移机转移样本；2次离心，清洗，收集细胞，然后弃上清液，沉渣涂片）。95%乙醇固定10 min，巴氏染色[4-5]。

1.2.2 免疫细胞化学染色 通过传统涂片及TCT仍不能分型的病例标本进行免疫细胞化学染色，具体方法及流程为：石蜡切片（4 μm）后脱蜡水化。滴加过氧化物酶阻断溶液（试剂A），放置室温孵育10 min后用PBS冲洗；滴加非免疫性动物血清（试剂B），室温孵育10 min；滴加一抗，室温孵育90 min，PBS冲洗；滴加生物素标记的二抗（试剂C），室温孵育20～30 min，PBS冲洗；滴加链霉素抗生物素-过氧化物酶溶液（试剂D），室温孵育20～30min，PBS冲洗；最后二氨基联苯胺（DAB）显色，使用梯度乙醇进行脱水处理，二甲苯透明，中树胶封固[6]。

1.2.3 阅片及分析 2种涂片制备方法均由同一组细胞学专家阅片，对痰涂片细胞进行分级、分型诊断。采用3级分类诊断法将结果分为阴性、可疑、阳性。分析时将可疑、阴性合并为一组。

1.3 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计量资料以±s表示，采用t检验；计数资料以率或构成比表示，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组阳性诊断率比较 对照组200例患者中103例发现癌细胞，细胞学检测结果为阴性76例，可疑21例，阳性诊断率为51.5%；观察组100例患者中74例发现癌细胞，细胞学检测结果为阴性20例，可疑6例，阳性诊断率为74.0%。两组阳性诊断率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 免疫细胞化学染色 两组中共有34例患者无法通过痰液检查进行判断，进一步通过免疫细胞化学染色进行检查，结果显示，30例为阳性，其中鳞癌7例，腺癌5例，小细胞肺癌9例，细胞增生9例，另外4例因细胞含量过少无法进行免疫细胞化学染色。

3 讨 论

痰脱落细胞学检查在临床上的应用至今已有80多年，其在非损伤途径早期诊断肺癌中具有较好的效果，是诊断肺癌的有效手段之一。以往多采用传统方法进行检查，但传统方法痰涂片受标本采集、处理方法，制片等诸多因素影响，因为易导致病变细胞可能未被涂片，同时涂片黏液成分相对较多，一些细胞层不均匀或过厚，使过多的黏液、血液或炎症细胞遮盖了不正常细胞，从而使细胞容易肿胀变性，而且结构不清会直接影响诊断结果。临床调查显示，假阴性率高达40%左右，从而严重地影响了临床治疗，使其临床应用价值降低。

随着医疗技术的不断发展，TCT由美国FDA批准，作为一种改善的制片技术，根据制片原理不同TCT一般可分为液基薄层制片技术和液基离心沉淀式薄层细胞学技术。检查原理是将标本采集到有特殊缓冲固定液的容器中，缓冲固定液中收集的细胞，通过涡轮震荡和混匀后用梯度离心的方法进行处理，有效去除非上皮细胞成分，采集具有诊断价值的细胞集中于试管底部。将采集的试管底部的细胞再次混匀后自动移入沉降管，通过自然重力作用使细胞黏附在载玻片上形成直径1.3 cm的细胞薄层，该方法是目前液基细胞技术中对病变细胞检出率较高的技术之一。

痰液细胞学筛查对于早期肺癌的诊断具有重要意义，并逐渐成为临床诊断的主要方法之一，但常用的传统痰涂片检查因为在标本采集、处理及制片过程中影响因素过多而导致检测结果有效率下降，出现假阴性的情况（因为炎症或血液遮盖住不正常细胞，导致细胞肿胀变性或结构不清）。随着医疗技术的不断发展，TCT作为一种新型的检测方法已在临床广泛应用，并取得较好效果，其工作原理是将采集的痰液标本加入缓冲固定液中，混匀后进行离心处理，然后收集具有诊断价值的细胞并置入沉降管中，进而形成细胞薄层。操作过程中，TCT在痰液制备和染色中易于控制，方便快捷，是当前肺癌普查的有效方式之一，在肺癌早期诊断中具有重要的临床价值[7-9]。对于影像学无法准确判断的患者，联合TCT和传统痰液涂片检查可显著提高临床诊断率。

在传统涂片取材及其检测过程中，临床医生主要凭借经验来挑取少量标本进行制片，但这种情况易出现肿瘤细胞遗漏。相对于传统涂片检测，液基制片能解决传统涂片存在的以上问题。液基细胞学制片主要是将所有痰标本均收集起来，去除其部分杂质成分，然后先混匀和转移。为提高痰液基制片的阳性率，具体检测过程中需要了解患者咳出的痰标本中是否有肿瘤细胞。通过液基制片技术进行痰液肿瘤细胞的筛选，检测中其背景干净、杂质成分少、细胞均匀平铺，有利于更好地进行观察，检测细胞无退变，细胞体积与传统涂片比较稍微缩小，采用沉降式技术，腺癌的三维立体结构非常明显[10-12]。

本次研究对比了TCT和传统痰液涂片2种检测方法的效果，结果显示，TCT的阳性诊断率为74.0%，显著高于传统痰液涂片检查的51.5%。相对于传统痰液涂片检查，TCT法能广泛收集肿瘤细胞并根据需求获取多张图片，同时细胞涂膜面积小，涂片背景干净，阳性细胞不易出现漏诊，检测结果清晰，层次分明，可清楚显示核膜、核仁及染色质等细微结构。

综上所述，在肺癌患者临床检查诊断过程中，采用TCT诊断率高，其在制片、染色等方面具有很多优势，是值得推广的新技术，其应用于肺癌的诊断具有阳性率高、无创伤、简便、安全的优点，在临床上具有较高的应用价值。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.08.038

：B

：1009-5519（2015）08-1215-03

2014-09-16

2014-11-05）

林淑端（1967-），女，广东大埔人，主治医师，主要从事外科病理工作；E-mail：457747794@qq.com。