LC-MS/MS同时测定降压类中成药中3种非法添加化学物质

LC-MS/MS同时测定降压类中成药中3种非法添加化学物质

★张勋1池文杰2金鸣2林羽1*(1.福建中医药大学药学院福州 350122；2.福建省药品检验所福州 350001)

摘要：目的:建立LC-MS/MS方法测定降压类中成药中非法添加氢氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平3种化学物质。方法:采用液相色谱-三重四级杆串联质谱法，多反应监测模式(MRM)对降压类中成药中非法添加的3种化学物质进行定量、定性分析。结果:建立了同时测定降压类中成药非法添加3种化学物质的方法，检测限均小于0.05 ng。结论:所建立的方法简便、快速、准确，可作为降压类中成药中非法添加尼莫地平、尼群地平和氢氯噻嗪的快速筛查并定量的方法。

关键词：LC-MS/MS；氢氯噻嗪;尼群地平;尼莫地平；降压药

高血压是常见的心血管疾病，患病率高。使用毒副作用小的中药复方制剂简化治疗方案，备受广大患者的欢迎。但目前国家食品药品监督管理局尚未颁布降压类中成药非法添加化学物质有效甄别方法的标准，一些违法厂家避开检验标准，针对性地在中成药中添加功效相似的抗高血压物质，危害患者的身心健康，因此对该类非法添加现象的检测技术进行研究十分必要。

本文以降压类中成药为研究对象，选取疗效明显、应用广泛、价格便宜的氢氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平作为检测物质，建立了同时测定这3种物质的方法，以保证临床用药安全。

1材料与仪器

1.1材料甲醇、乙腈(德国默克公司，色谱纯)； 尼莫地平对照品(供含测用，中国药品生物制品检定所，批号：100270-200002)；尼群地平对照品(供含测用，中国药品生物制品检定所，批号：100585-200602)；氢氯噻嗪对照品(供含测用，中国药品生物制品检定所，批号：100309-200702)；实验用降压类中成药样品来源于2009年福建省药品检验所全国评价性抽样品种，共735批，涉及26个品种，其中3个品种处方中明确含有氢氯噻嗪。品种信息如表1所示。

表1　26个品种信息

注：*表示处方中含有氢氯噻嗪。

1.2仪器Aglient 1200 Series-6410 Triple Quad高效液相色谱质谱联用仪(安捷伦公司)；电子天平XS205DU(上海梅特勒公司)；电子天平AL204-IC(上海梅特勒公司)；Millipore 超纯水机(法国Milllipore 公司)；KQ-300型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；离心机(上海安亭科学仪器厂)。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Welch XB-C18分析柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱温：30℃；流动相：乙腈-水(70∶30)；流速：0.5 mL/min；进样量：5μL。

2.2质谱条件电离方式：ESI负离子检测模式；扫描模式:多反应监测(MRM)；毛细管电压：4000 V；气体流速:6 L/min；雾化器压力:30 psi;其他质谱条件参数详见表2。

2.3对照品溶液的配制精密称取氢氯噻嗪对照品5.0mg、尼莫地平对照品10.0mg和尼群地平对照品12.0mg,置于25 mL 棕色容量瓶中，加乙腈溶解，稀释至刻度，摇匀，配制成混合溶液，使用时用乙腈稀释成不同浓度的标准工作溶液。

2.4供试品溶液的配制片剂、丸剂，取一次服用剂量，研细，精密称定；胶囊剂，取一次服用剂量，倾出内容物，研细，并剪碎囊壳，精密称定；将样品粉末置于50 mL棕色量瓶中，加入45 mL乙腈超声10min，放冷至室温，乙腈定容至刻度，摇匀；离心机离心15 min(4000 r/min)；精密吸取上清液100 μL至250 mL棕色容量瓶中，乙腈稀释至刻度，0.2 μm 滤膜滤过，即得。

表2　质谱MRM参数

注：＊为定量用离子。

2.5方法学考察

2.5.1线性关系考察精密吸取对照品混合液置棕色容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀。按 2.1项和2.2项下条件进行检测，绘制各物质定量离子的峰面积Y对其质量浓度的标准曲线,结果如表3所示。

2.5.2精密度实验配制对照品混合溶液按2.1和2.2项下条件重复连续进样6次，测定三个成分峰面积，测得的氢氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平的RSD分别为1.6%，1.59%、2.26% 。

表3　3种物质的线性方程、线性范围及相关系数

2.5.3稳定性实验取对照品混合溶液放置0,4,10,12,18,24h，按2.1和2.2项下条件测定峰面积，氢氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平的RSD分别为1.87%、1.76%、1.77%，结果表明三种对照品溶液24 h内稳定性良好。

2.5.4加样回收实验在样品(不含所测成分)中精密加入对照品混合溶液5 mL，平行6份，按2.4项下处理后，进样分析，氢氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平平均回收率分别为99.05%、99.92%、98.95% ，RSD分别为1.07%、1.11%、1.89%。

2.5.5检测限和定量限取对照品混合溶液，以不同比例稀释，按2.1和2.2项下条件测定，氢氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平最低检测限分别为0.0045,0.04,0.0168ng，最低定量限分别为0.009,0.068,0.0504ng。

2.6对照品溶液分析精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液，按2.1和2.2项下条件进样，记录总离子流图,三者在乙腈—水(70∶30)的流动相条件下得到良好的分离。对照品溶液的总离子流图及提取离子流图如下图1所示。

2.7供试品溶液分析对样品进行分析，发现25批次处方中含氢氯噻嗪样品均检出含氢氯噻嗪，并对其定量，其他样品均未检出含有氢氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平。

3讨论

3.1质谱条件的优化分别制备单一对照品溶液，以0.5 mL/min流速直接注入离子源，在全扫描方式下选择三个对照的电离模式。[M+Na]+不稳定，不适合用于定量用离子，选择负离子模式。优化后质谱条件如表2所示。各成分优化质谱条件后质谱图如图2所示。

3.2色谱条件的优化实验中，曾尝试使用甲醇-水作为流动相，三个组分均可得到分离，发现用乙腈—水作为流动相，三个组分的峰形好，而且响应值高，故选择乙腈—水。在样品提取溶剂中，考察无水乙醇、甲醇和乙腈提取效率，结果发现用甲醇和无水

图1　对照品总离子及提取离子流图

编号名称标示量检出量(mg/片)1珍菊降压片-12珍菊降压片-23珍菊降压片-34珍菊降压片-45珍菊降压片-56珍菊降压片-67珍菊降压片-78珍菊降压片-89珍菊降压片-910珍菊降压片-1011珍菊降压片-1112珍菊降压片-1213珍菊降压片-1314珍菊降压片-1415珍菊降压片-1516脉君安片-117脉君安片-218脉君安片-319脉君安片-420脉君安片-521脉君安片-622脉君安片-723脉君安片-824降压避风片-125降压避风片-25mg/片1.5mg/片2.5mg/片5.975.845.204.494.183.833.713.673.623.583.543.212.942.902.831.671.581.391.370.940.820.810.702.672.30

当进样量过大时，氢氯噻嗪色谱峰出现叉峰现象，故将进样量定为5μL。

图2　优化质谱条件后质谱图

4小结

在收集样品中，珍菊降压片和脉君安片处方明确含有氢氯噻嗪，标示量分别为5 mg/片和 1.25mg/片，由于2010版《中华人民共和国药典》中没有检测氢氯噻嗪项目，有些厂家避开处方标准，少投料，有些批次的标示量达不到标准要求，产品质量难以保证。本文建立了同时检测氢氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平的LC-MS/MS法，通过保留时间、母离子和子离子对目标成分进行定量和定性分析，该方法简便、灵敏、稳定，适用范围广。除处方标识中含有氢氯噻嗪样品检出含有化学物质外，其余均未检出含有非法添加的化学药物，笔者认为抽样过程中具有较大盲目性，在日后的抽检过程中，可以采用本文建立的LC-MS/MS分析方法进行针对性抽样，节省实验资源消耗。

Simultaneous Determination of 3 Chemicals Illegally Added into Anti-hypertensive Chinese Medicines by LC-MS/MS

LIN Yu1,ZHANG Xun1, CHI Wen-jie2, JIN Ming2

1.PharmacyCollegeofFujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122，China;

2.FujianProvincialInstituteforDrugControl,Fuzhou350001,China.

Abstract:To establish a liquid chromatography-tandem mass chromatography method for screening hydrochlorothiazide, nitrendipine and nimodipine in Traditional Chinese Patent Medicines. Methods: The target compounds were analyzed by LC-MS/MS-ESI-MRM. Results: Established a method for determination of 3 compounds illegally added into Traditional Chinese Patent Medicines simultaneously and the detection limits were less than 0.05 ng. Conclusion: The method is simple, rapid and accurate and it could be used for rapidly screening and quantitatively analyzing hydrochlorothiazide, nitrendipine and nimodipine in Traditional Chinese Patent Medicines.

Key words:LC-MS/MS; hydrochlorothiazide; nitrendipine; nimodipine；hypotensor

收稿日期：(2015-02-06)编辑：曾文雪

中图分类号：R286.0

文献标识码：A

通信作者：*林羽(1966—)，主任药师。研究方向：中药质量标准。E-mail:yulam@163.com。