不同澄清剂对复方安神片水提液精制效果的影响

★　金杨巧　颜晓玲　戴娟　彭亮　季巧遇　(.江西中医药大学　南昌 330004；.江中药业股份有限公司　南昌 330096)

不同澄清剂对复方安神片水提液精制效果的影响

★金杨巧1颜晓玲1戴娟1彭亮1季巧遇2(1.江西中医药大学南昌 330004；2.江中药业股份有限公司南昌 330096)

摘要：目的：考察甲壳素和ZTC1+1-II型澄清剂法对复方安神片水提液的精制效果。方法：以固形物去除率、总皂苷保留率为考察指标，采用单因素考察法，优选最佳精制方法并作对比研究。结果：甲壳素澄清剂处理后的溶液固形物去除率54.57%，总皂苷保留率为81.21%，ZTC1+1-II型澄清剂处理后的溶液固形物去除率42.75%，总皂苷保留率为83.73%，两组总皂苷保留率无明显差异，但前者固形物去除率明显高于后者。结论：本实验选择甲壳素澄清法精制复方安神片水提液。

关键词：复方安神片；甲壳素；ZTC1+1-II型；精制

复方安神片由酸枣仁等多味中药组成，具有补益心脾、益气养血、宁心安神的功效，其主要药效成分是皂苷类成分。本制剂以水提取有效成分，因其提取液含有蛋白质、淀粉、药渣、纤维、树脂、油脂等杂质，且本品日服用生药量大，会导致制剂日服用剂量较大，并可能造成制剂成型困难，因此需要对其提取液进行精制。目前常采用醇沉法，但存在耗醇量大、成本高、易燃易爆等缺点[1]，在实际生产中受到限制。吸附澄清法利用吸附、凝聚和絮凝等作用除去药物中的杂质，具有操作简单、成本低、安全无毒、可生物降解[2]等优点，近年来已广泛应用于精制中药水提液中。本文对甲壳素和ZTC1+1-II型澄清剂法进行了对比研究，为确定复方安神片水提液中除杂工艺提供实验依据。

1仪器与试药

1.1仪器TD5M型高速离心机(长沙湘智离心机仪器有限公司)；METTLER AE240电子天平(梅特勒托利多仪器有限公司)；AB204-N精密分析天平(METTLER TOLEDO上海衡器有限公司)；HH-4数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)；UV-1206紫外分光光度计(日本SHIMADZU)。

1.2试剂复方安神片水提液(本室自制)；酸枣仁皂苷A对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110734-200509)；甲壳素(青岛海维康生物制品有限公司)；正丁醇、甲醇、香草醛、冰醋酸、高氯酸(均为分析纯)。

2方法和结果

2.1总皂苷含量测定

2.1.1对照品溶液配制精密称取酸枣仁皂苷A 9.38mg于5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得(酸枣仁皂苷A对照品溶液浓度为1.8760mg/mL)。

2.1.2供试品溶液的制备精密吸取浓缩液10mL，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇溶液提取4次，每次10 mL，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加适量甲醇溶解，移至10mL量瓶，用甲醇稀释并定容至刻度，作为供试品溶液。

2.1.3最大吸收波长的确定精密吸取上述供试品溶液0.4mL、酸枣仁皂苷A对照品溶液50μL于10 mL具塞试管中，于60℃恒温水浴蒸干溶剂，依次加5%香草醛冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，摇匀，密塞，置60℃水浴加热15min，流水冷却至室温，摇匀，以相应试剂为空白对照，按照《中国药典》2010版一部紫外可见分光光度法(附录VA)，于200～700nm处进行光谱扫描，结果供试品溶液在450nm处有最大吸收峰，而对照品溶液则在607nm，同时在470nm有一个较大吸收峰，综合考虑，本实验选择检测波长为470nm。

2.1.4标准曲线的绘制分别精密吸取上述酸枣仁皂苷A对照品溶液20，30，50，75，100，125μL，于10mL具塞试管中，水浴蒸干溶剂，依次加5%香草醛冰醋酸溶液0.2 mL，高氯酸0.8mL，摇匀，密塞，置60℃水浴加热15min，冷却至室温，各加冰醋酸5.0mL，摇匀，以相应试剂为空白对照，按照分光光度法(中华人民共和国药典[3]2010版I部，附录VA)，于470nm测吸光度。以酸枣仁皂苷A为横坐标，吸光度为纵坐标，得标准曲线Y=1.9146X(R2=0.9995)，表明酸枣仁皂苷A在0.0375～0.2345mg与吸光度呈良好线性关系。

2.1.5样品溶液的测定精密吸取上述供试品溶液100μL于10mL具塞试管中，按2.1.4项下自“水浴挥干溶剂”起操作，依法测定吸光度，根据标准曲线计算总皂苷含量，再按下式进一步计算总皂苷保留率。(总皂苷保留率%=精制后总皂苷含量/精前总皂苷含量×100%)

2.2固形物去除率的测定精密量取精制前后药液10mL，至已干燥恒重的蒸发皿中，置水浴锅挥干水分，于105℃烘箱中干燥3h，取出，置干燥器中冷却，30min后精密称重，计算固形物去除率。计算公式：固形物去除率=(精制前固形物质量-精制后固形物质量)/精制前固形物质量×100%。

2.3澄清剂的配制

2.3.1甲壳素醋酸溶液称取甲壳素1.00g，溶于1%的冰醋酸溶液中，磁力搅拌后静置24h，制备成浓度为1%的甲壳素冰醋酸溶液，备用。

2.3.2ZTC1+1-II型澄清剂称取A组分1.00g加适量蒸馏水搅拌成糊状，然后加蒸馏水至100mL，磁力搅拌并溶胀24h，配成1%的粘胶液，备用。称取B组分1.00g加少量1%醋酸溶液搅拌成糊状，然后加足够量1%醋酸液至100mL，磁力搅拌并溶胀24h，配成1%的粘胶液，备用。

2.4甲壳素精制工艺考察

2.4.1甲壳素加入量考察取浓度(生药量与药液体积之比)1∶10(g/mL)复方安神片水提液5份，加热至50℃，按2%,4%,6%,8%,10%的体积量分别加入甲壳素醋酸液，搅拌5min，于50℃水浴保温3h，取出常温静置12h，离心15min(3500r/min)，取上清液测定各项指标，结果结果表明5组用量对总皂苷保留率均较好，4%用量组固形物除杂率最高，故甲壳素醋酸液以4%用量为佳，见下图1。

图1　甲壳素加入量考察结果

2.4.2絮凝时间考察取浓度1∶10(g/mL)水提液6份，加热至50℃，加入4%体积量的甲壳素醋酸液，搅拌5min，于50℃下分别水浴保温1,2,3,4,5,6h，其余操作同“2.4.1”项，结果表明第5组固形物除杂率、总皂苷保留率均最高，故选择5h为絮凝时间，见下图2。

2.4.3絮凝温度考察取浓度1∶10(g/mL)水提液5份，加热至40,50,60,70,80℃，加入4%体积量的甲壳素醋酸液，其余操作同“2.4.1”项，结果表明，絮凝温度为50℃组固形物去除率、总皂苷保留率均最高，故选择50℃为絮凝温度，见下图3。

2.4.4药液浓度考察分别取浓度1∶4,1∶6,1∶8,1∶10,1∶12(g/mL)水提液5份，加热至50℃，加入4%体积量的甲壳素醋酸液,其余操作同“2.4.1”项，结果表明，药液浓度1∶12(g/mL)组固形物除杂率最高，但总皂苷保留率较低，综合考虑，选择药液浓度1∶10(g/mL)，见下图4。

图2　絮凝时间考察结果

图3　絮凝温度考察结果

图4　药液浓度考察结果

2.5ZTC1+1-II型澄清剂工艺考察

2.5.1澄清剂加入量考察取浓度1∶10(g/mL)水提液5份，50℃保温，搅拌分散加入4%,6%,8%,10%,12%体积量的B组分，每30min间隔搅拌1次，2h后，同法加入A组分(用量B：A=2∶1)，保温30min，取出常温静置12h，离心15min(3500r/min)，取上清液测定各项指标，结果表明B组分为6%用量组固形物去除最高，总皂苷保留率较好，本实验澄清剂加入量选择6%B+3%A，见下图5。

图5　澄清剂加入量考察结果

2.5.2絮凝温度考察取浓度1∶10(g/mL)水提液5份，加热至40,50,60,70,80℃，加入6%B+3%A体积量的澄清剂，其余操作同“2.5.1”项，结果表明絮凝温度自50℃起，随着温度的升高，固形物去除率无明显变化，且50℃时总皂苷保留率也较好，综合考虑，选择50℃为絮凝温度，见下图6。

图6　絮凝温度考察结果

2.5.3药液浓度考察分别取浓度1∶4,1∶6,1∶8,1∶10,1∶12(g/mL)水提液5份，加热至50℃，加入6%B+3%A体积量的澄清剂，其余操作同“2.5.1”项，结果表明，浓度1∶10(g/mL)组固形物除杂率最高，且总皂苷保留率较好，故本实验选择药液浓度1∶10(g/mL)，见下图7。

2.6两种澄清法对比研究根据以上考察结果可知，甲壳素澄清法最佳精制工艺：药液浓度1∶10(g/mL)，加入4%药液体积量的甲壳素，絮凝温度50℃，絮凝时间5h；ZTC1+1-II型澄清法最佳精制工艺：药液浓度1∶10(g/mL)，加入药液体积6%B+3%A体积量的澄清剂，絮凝温度50℃。分别采用上述两种最佳精制工艺对复方安神片水进行处理，结果见表1。

图7　药液浓度考察结果

澄清剂固形物去除率(%)总皂苷保留率(%)甲壳素54.5781.21ZTC1+1-II型42.7583.73

由表1可知，两种方法总皂苷保留率均好且无明显差异，但甲壳素组固形物去除率明显高于ZTC1+1-II型吸附澄清法，故本实验可采用甲壳素澄清剂对复方安神片水提液进行精制处理。

3讨论

甲壳素及ZTC1+1天然澄清剂是近年来出现的新型絮凝剂，因其成本低、应用方便，越来越受到人们的亲睐。ZTC1+1天然澄清剂目前有I、II、III、IV四种型号，其中II型适用于固体制剂和颗粒剂型。现代研究表明[4-5]，甲壳素澄清剂和ZTC1+1-II型澄清剂均能在除杂的同时高效保留皂苷类、多糖类成分，对此，本实验优选采用上述两种澄清法

精制复方安神片水提液。

以上2种澄清剂均利用吸附等原理起作用，但它们各有特点：从组成看，甲壳素是单组分澄清剂，ZTC1+1澄清剂是复合成分，由A、B两组分组成；从澄清剂加入量看，甲壳素较少，价格便宜，ZTC1+1澄清剂用量相对较大，相比之下，显得价格较贵；从除杂效果看，ZTC1+1-II型在总皂苷保留率略优于甲壳素，但甲壳素除杂效果略好于ZTC1+1-II型，但均未见显著性差异。

本实验甲壳素的加入量较少，几乎全用于起絮凝作用，故采用高速离心法将絮凝沉淀物去除即可，而ZTC1+1-II型澄清剂则采用A与B组分用量比为1∶2，使B组分的再“架桥”作用可以保证游离或结合的A组分从溶液中分离而除去，均可达到提取液中无澄清剂残留的目的。

根据实验结果，本品选择采用甲壳素澄清剂对复方安神片水提液进行精制处理，在最大化保留有效成分的同时，降低了固形物，为本品制剂成型和降低日服用量奠定了基础。

参考文献

[1]王海宁,谢印芝,樊飞跃. 壳聚糖及ZTC1+1-II澄清剂对大青叶提取液的澄清工艺研究[J].中国药房, 2008, 19 (21): 1625-1628.

[2]任杰. 可降解与吸收材料[M].北京: 化学工业出版社, 2003: 10.

[3]国家药典委员会. 中华人民共和国药典[M].一部. 北京:化学工业出版社, 2010: 附录30.

[4]张洪,罗毅,彭燕.壳聚糖用作澄清剂制备黄芪口服液[J].华西药学杂志, 2002,17(16):478.

Study on Refining Effect of Different Clarifying Agents on Water Extract of Compound Sedative Tablets

JIN Yang-qiao1,YAN Xiao-ling1,DAI Juan1,PENG Liang1,JI Qiao-Yu2

1.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004,China.

2.JiangZhongPharmaceuticalCo. ,LTD,Nanchang330096,China.

Abstract:Objective: To investigate chitin and ZTC1 + 1-II-type clarifier sedative tablets of compound purification effect of water extracts. Methods: solids removal, retention rate of total saponins investigation index, using single factor method, the preferred method for purifying the best and make a comparative study. Results: After the solid solution treated chitin clarify removal 54.57%, 81.21% retention rate of total saponins, solid solution ZTC1 + 1-II-type clarifying agent treatment removal 42.75%, total saponins retention rate 83.73 % respectively of total saponins retention rate was no significant difference, but the former solids removal was significantly higher than the latter. Conclusion: This experiment selected chitin method refining water extract of sedative tablets.

Key words:Compound sedative tablets; chitin; ZTC1+1-II-type; refining

收稿日期：(2015-01-29)编辑：曾文雪

中图分类号：R286

文献标识码：A