正交设计法优选黄连总生物碱提取测定方法

赵梓辰，杨丽，李雪莲，陈鸿平，刘友平

·炮制制剂·

正交设计法优选黄连总生物碱提取测定方法

赵梓辰，杨丽，李雪莲，陈鸿平，刘友平

目的：考察黄连总生物碱的提取测定方法。方法：采用正交实验设计法，以总生物碱得率为考察指标，研究甲醇浓度、加醇量、超声时间3个因素对黄连总生物碱提取的影响。结果：黄连总生物碱的最佳提取方法为加入50倍量的1%盐酸甲醇液，其中甲醇为75%的甲醇，超声提取1h。结论：优选的黄连总生物碱提取测定方法稳定可行。

黄连；总生物碱；正交设计

黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y. Cheng et Hsiao或云连Coptis teeta Wall.的干燥根茎[1]。具有清热燥湿，泻火解毒等功效。黄连的主要有效化学成分为多种生物碱，现已分离出的生物碱有小檗碱、黄连碱、巴马丁、甲基黄连碱、木蓝碱、药根碱等[2]。黄连中所含生物碱属于异喹啉类碱，具有抗菌、抗病毒、抗血栓、抗肿瘤、抗胃癌等作用[3]。目前多有文献报道采用高效液相色谱法测定小檗碱含量，但高效液相色谱法具有操作繁琐、耗费大等缺点。而采用紫外分光光度法测定黄连总生物碱的文献报道较少，故本文采用正交设计法优选黄连总生物碱的提取测定方法，为研究和生产提供一定的参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UV1100紫外-可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；FA2004N电子分析天平（万分之一，上海民桥精密科学仪器有限公司），电子分析天平BP211D（十万分之一，德国Sartouris股份有限公司）；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；BUG25-12超声波清洗机（上海必能信公司）

1.2 试药

黄连药材购于四川千方中药饮片有限公司（批号：20140101）；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110713-200609，含量测定用）；所有试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取盐酸小檗碱对照品21.11 mg，置25 mL容量瓶中，加入适量甲醇液溶解，稀释至刻度，摇匀。精密量取0.7 mL至25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得。

2.2 标准曲线的制备

分别精密吸取上述对照品溶液1、2、3、4、5

mL至10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。以甲醇溶液为空白对照，在349 nm波长处测定其吸光度。以对照品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，进行线性回归，回归方程为:Y=0.066X-0.0083，r=0.9994。盐酸小檗碱的浓度在2.364～11.822 μg/mL的范围内线性关系良好。

2.3 样品提取测定方法

精密称取黄连粉末1.0 g，置100 mL锥形瓶中，精密加入1%盐酸甲醇液50 mL，称定重量，超声处理1 h，取出并放冷。再称定其重量，用1%盐酸甲醇溶液补足重量，滤过，精密量取续滤液0.1 mL，置25mL容量瓶中， 加甲醇液至刻度，摇匀。以1%盐酸甲醇溶液为空白对照，在349 nm波长下测定其吸光度，然后根据回归方程计算出样品黄连的总生物碱含量。

2.4 正交实验

根据黄连总生物碱的性质和文献报道，本实验选取甲醇浓度(A)、加醇量(B)、超声时间(C)为考察因素，每个因素取3个水平，按照L9(33)正交表进行正交实验，以黄连总生物碱含量为评价指标，优选其提取工艺。各因素水平表见表1，结果见表2，总生物碱含量测定结果方差表见表3，效应曲线见图1。

表1 正交实验的因素水平

表2 正交实验设计与结果

表3 正交实验总生物碱含量测定结果方差表

图1 效应曲线图

由直观分析可知，影响黄连总生物碱提取的各因素顺序为B＞A＞C，即加醇量＞甲醇浓度＞超声时间；经过方差分析可知，甲醇浓度和加醇量对总生物碱的提取效果有显著性影响，而提取时间对提取效果没有显著性影响。结合效应曲线图，可得黄连总生物碱的提取方法为A2B2C1，即取黄连药材粉末1.0 g，加入50 mL的1%盐酸甲醇液，其中甲醇为75%的甲醇，超声1 h。

3 结果与讨论

3.1 本实验所优选出的黄连总生物碱提取方法适用于实验室分析研究，不适合于工厂大生产提取黄连总生物碱。

3.2 黄连总生物碱含量随受热时间的延长而降低，故提示总生物碱不适宜在高温条件下长时间提取。

3.3 黄连生物碱多为季铵碱，溶媒中增加水含量有利于生物碱的提出，但50%甲醇的生物碱提取率比75%甲醇的提取率低，原因有待进一步研究。

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:285.

[2] 柳永青.黄连的研究概况[J].中国中医药咨询,2009,1(2):29.

[3] 王瑞瑞,陈倩倩,孙阿惠,等.微波辅助提取黄连生物碱及其含量测定[J].农产品加工业,2011:39.

(责任编辑：李芸霞)

Optimize the extraction determination of total alkaloids in Huanglian by orthogonal design/

ZHAO Zi-chen, YANG Li, LI Xue-lian, CHEN Hong-ping, LIU You-ping//(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137,China)

Objective:To study the method for determination of extraction and total alkaloid in Huanglian.Method:According to the yield of total alkaloid, the orthogonal experimental design was used to study the effect of extract factors on total alkaloid including methanol concentration, the amount of methanol and ultrasonic time.Result:The optimum condition for the total alkaloid extraction was added 50 times 1% hydrochloric acid in 75% methanol solution and ultrasonic extraction 1h.Conclusion:The preferred method of total alkaloid extraction and determination of Huanglian is stable and feasible.

Huanglian; total alkaloids; orthogonal design

R 284.2

A

1674-926X(2015)02-008-02

国家中医药管理局中医药行业科研专项(No.201007011)

成都中医药大学药学院，四川 成都 611137

赵梓辰(1989-)，女，在读硕士研究生，从事中药化学成分与质量标准化研究

Tel:15208256409 Email:783562633@qq.com

刘友平，女，研究员，博士生导师，从事中药质量标准化及药效物质基础研究

Tel:028-61800158 Email:lyp@cdutcm.edu.cn

2014-06-19