基于单质细胞成分提取固定技术的血液分析仪校准品制备工艺

秦霄雯，樊 超，任宏伟

(山东省计量科学研究院，山东济南250014)

基于单质细胞成分提取固定技术的血液分析仪校准品制备工艺

秦霄雯，樊 超，任宏伟

(山东省计量科学研究院，山东济南250014)

血液分析仪是临床医疗机构最常用的检验仪器之一，其检测数据的准确性关系临床诊断结论和治疗效果。实验室针对血液分析仪检定校准领域标准物质匮乏的现状，研制了符合国家要求的血液分析仪校准品。本文旨在阐述基于单质细胞成分提取固定技术的血液分析仪校准品的制备工艺，为临床检验领域内其它校准品的制备提供参考。

血液分析仪;溯源;校准品;标准物质

0 引言

血液分析仪(又称血细胞分析仪)用于测量血液中红细胞(Red Blood Cell，RBC)、白细胞(White Blood Cell，WBC)、血小板(Platelet，PLT)的单位体积含量、测定血红蛋白(Hemoglobin，HGB)的浓度，是目前临床医疗机构进行血常规化验的常用仪器。血液分析仪检测数据的准确性直接关系临床诊断结论和治疗效果。《中华人民共和国计量法》明确规定:血细胞分析仪属强制检定的范畴。校准品是保证血液分析仪量值准确可靠的有效手段，本文主要阐述基于单质细胞成分提取固定技术的血液分析仪校准品的制备工艺，为临床检验领域内其它校准品的制备提供参考。

1 制备思路

首先，通过血液细胞基础学和细胞形态计量学的研究，利用生物显微镜、扫描电镜等仪器对国际校准品进行分析，确定血液分析仪校准品采用与人血最类似的动物血(又称类人类血)替代人血作为候选物。其次，以细胞生物学特性为线索，用电脑编程仿真细胞特征，研究国内禽类血和蹄科动物血成分经过技术处理后可达到的仿真效果，并与国际校准品进行对比。最后，通过长期形态学观察和仪器检测，各项目指标能够相互印证，达到设计目的。

2 制备工艺

2.1 候选物、试剂与材料

主要包括:禽类血、蹄科动物血;细胞稀释液、细胞鞘液、溶血素、清洗剂;戊二醛，AR级;甲醛，AR级;多聚甲醛，AR级;PBS缓冲液，pH=7.2;生物防腐剂，AR级;氯化钠，AR级。

2.2 单质细胞成分提取与固定

2.2.1 (假)白细胞制备

(1)取材:无菌操作宰杀，取禽血用3.8%的枸橼酸钠抗凝，混匀。

(2)洗涤:离心去血浆，除掉PLT和WBC，再用基础液－W离心洗涤后，取有核RBC，即(假)白细胞，适当稀释成悬液。

(3)固定:用特定的缓冲液配制适宜浓度的戊二醛固定液，按压积细胞与固定液1:5混匀，振摇两小时，做溶血实验，完全无溶血现象即可。用基础液－W离心洗涤两次并适当稀释后，放入4～8℃冰箱储存备用(有效期一年)。

2.2.2 纯红细胞制备

(1)取材:正常人的鲜(ACD抗凝)。

(2)纯分:离心除去部分血浆、WBC和PLT;加基础液－R离心一次;压积红细胞适当稀释成悬液，加适当浓度高分子试剂溶液静置或离心，吸去上层液体，可除去绝大多数WBC和PLT;用基础液－R离心数次，测RBC悬液，当WBC＜0.5× 109个/L时，表明纯分效果良好。

(3)护膜(半固定):用基础液－R配成适宜浓度戊二醛半固定液倍量混匀，摇匀两小时并放置过夜，基础液洗涤一次并适当稀释后，放入4～8℃冰箱储存备用(有效期半年)。

2.2.3 血小板制备

(1)取材:临宰蹄科动物时收集中段血液加抗凝剂混匀。

(2)将采集血分瓶，分别加适量基础液－P，离心取富PLT血浆，仪器上测试，应满足WBC＜0.3×109个/L。

(3)固定:用基础液－P配成适宜浓度的戊二醛固定液倍量与富PLT浆混合，摇匀两小时并放置过夜，然后用基础液－P离心洗涤1～2次并适当稀释后，放入4～8℃冰箱储存备用(有效期半年)。

2.3 标准物质组配

(1)检测各单质物质的项目参数。

(2)以WBC、RBC、HGB、PLT为计数项目，配置成高、中、低值的标准物质。

(3)组配时根据细胞在单位容积内所含浓度的关系进行计算，确定各项目相应的参数值，再在仪器上进行分析测定，统计处理确定标准偏差和变异系数。

2.4 分装方法

由于标准物质的储存特殊性要求，其包装需使用无菌真空包装以保证血细胞在负压状态下的稳定性。具体而言，采用无任何添加剂的4mL的真空采血管，加入抑菌剂后动态灌装，每批共400瓶，每瓶罐装量约为1.5mL。灌装时需注意保持细胞悬液均匀以避免瓶间差发生。

2.5 保存方法

无菌操作分装后，批内抽样在37℃孵育48h，观察无细菌生长后置于2～8℃密封避光贮存，有效期6个月。开瓶后于2～8℃密封避光保存，有效期7d。

3 结语

标准物质是具有准确量值的测量标准，在化学测量、生物测量、物理测量、工程测量等领域应用十分广泛。临床检验领域标准物质采用的基体和成分极易发生变化、稳定性较差。因此，与其它应用领域标准物质相比，临床检验领域标准物质研制难度较大，成功率较低。血液分析仪校准品制备过程中经过了严格的均匀性检验［1］、稳定性检验［2］，采用国际血液学标准化委员会(ICSH)给定的溯源方法［3］进行定值，符合国家二级标准物质的技术要求［4］，检验参数涵盖红细胞、白细胞、血红蛋白、血小板和红细胞压积，符合临床需求。血液分析仪校准品不仅可用于校准血液分析仪，也可用于测量过程中的质量控制和评价，可为我国建立完善血液分析仪量值溯源体系，为保障人民生命安全提供技术支撑。

［1］秦霄雯，任宏伟.血液分析仪检定用标准物质的均匀性评价［J］.计量技术，2010(2):49－51.

［2］任宏伟，秦霄雯.血液分析仪检定用质控物的稳定性评价［J］.中国计量.2009(11):77－78.

［3］JJG1006－94一级标准物质技术规范［S］.北京:中国计量出版社，1995.

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1002－2376(2015)04－0005－02

2015－01－15