参麦注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

李 云，邹佩霞，姚 远，朱克刚，祁 涛

(1.湖北省十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院),湖北 十堰 442000；2.湖北医药学院,湖北 十堰 442000；3.河南省平煤神马医疗集团总医院，河南 平顶山 467099)

参麦注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

李 云1，邹佩霞1，姚 远1，朱克刚2，祁 涛3

(1.湖北省十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院),湖北 十堰 442000；2.湖北医药学院,湖北 十堰 442000；3.河南省平煤神马医疗集团总医院，河南 平顶山 467099)

目的 观察参麦注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法 选取8只健康大鼠为对照组，另16只大鼠采用结扎左侧冠状动脉前降支30min后松解扎扣再灌注60min以制作心肌缺血再灌注损伤模型，并随机分为模型组及参麦组。3组大鼠均经尾静脉分别注射生理盐水或参麦注射液，于给药前及给药后1周、2周分别测定血清肌酸激酶(CK)、血清丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、内皮素-1(ET-1)及一氧化氮(NO)含量，并于治疗2周后测量心肌缺血面积。结果 模型组大鼠造模后MDA、CK及ET-1含量均明显增高(P均<0.05)，T-SOD及NO含量明显下降(P均<0.05)。在应用参麦注射液后，MDA、CK及ET-1含量均有不同程度的降低(P均<0.05)，T-SOD及NO含量均增高(P均<0.05)，且心肌缺血面积低于模型组(P<0.05)。结论 参麦注射液对大鼠缺血再灌注损伤有一定的防治作用，其作用机制可能是提高自由基清除酶活性，促进NO产生以清除氧自由基,减少脂质过氧化，改善再灌注损伤血管内皮功能紊乱。

参麦注射液；心肌缺血再灌注；丙二醛；血清肌酸激酶；总超氧化物歧化酶；一氧化氮

心肌缺血再灌注损伤临床常见于心肌梗死、冠脉搭桥术、冠脉溶栓术、再通术等[1]，临床主要表现为心律失常及血清心肌酶谱升高等[2]。参麦注射液经现代工艺加工而成，由红参和麦冬两味中药组成，主要有效成分为人参皂甙、麦冬皂甙等，方中红参具刚健温燥之性，最能振奋元气;麦冬可养阴润肺，益胃生津，清心除烦[3]。该药具有益气固脱、养阴生津、生脉之功效。临床应用已证实其可改善微循环，扩张冠状动脉，增加冠脉流量，清除氧自由基，降低心肌耗氧量，提高心、脑供血不足等缺血耐受性[4]。本实验采用大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，经尾静脉注射给药，系统观察了该药对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响,旨在为其临床治疗闭塞性血管疾病如冠心病、脑梗死、心肌梗死等提供实验及理论依据。

1 实验资料

1.1实验动物 Wistar大鼠24只，体质量160～200 g，由湖北医药学院实验动物中心提供，实验动物设施使用许可证SYXK(鄂)2011-0031，实验动物生产许可证SCXK(鄂)2011-0008。

1.2 仪器及药品 参麦注射液(杭州正大青春宝药业有限公司，10 mL/支，国药准字Z330220021，批号：010873)。血清肌酸激酶(CK)、血清丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD )检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；内皮素-1(ET-1)及一氧化氮(NO)试剂盒均购自杭州达文生物有限公司。

1.3 分组及大鼠心肌缺血模型制备 选取8只健康大鼠作为对照组，另16只按文献[5]方法分别制备心肌缺血动物模型，并采用随机数字表编号随机分为模型组、参麦组。所有动物在造模前夜停止喂食，不禁水，采用腹腔注射2%戊巴比妥钠(120 mg/kg )方法将已分组的大鼠麻醉，仰卧位固定于手术台，在胸骨左缘第4—5肋间隙开胸暴露心脏，术中保持胸膜完整，接小动物呼吸机，以丝线距心脏根部0.2 cm处结扎左冠状动脉前降支30 min后松解扎扣复灌60 min，反复3次后抽出丝线关闭胸腔，造成大鼠心肌缺血动物模型。对照组仅开胸但不结扎左冠状动脉前降支造模。参麦组再灌注即刻，尾静脉注射参麦注射液4mL/(kg·d)[按成人体表面积换算：大鼠(200 g)/人(70 kg)=0.018/1]，连续给药2周；模型组及对照组术后即刻尾静脉注射0.9%氯化钠注射液4mL/(kg·d)，连续给药2周。

1.4 检测指标 参照文献[6]方法，3组大鼠于再灌注前及给药1周、2周后经耳静脉取血，静置1 h后置于高速离心机，按5 000 r/min离心10 min后, 取上清液，按试剂盒说明书操作检测CK、MDA、T-SOD、ET-1及NO含量。于第2周取血毕后断头处死动物，剪开胸腔暴露心脏找到胸主动脉，用1%伊该文思蓝1 mL经由主动脉行注入左心室，剪下心脏，剔除心房及右室扩蓝染区域，-20 ℃冰冻2 min，经HE染色秤左心室质量并测定梗死范围。

2 结 果

2.1各组血清CK及MDA含量比较 对照组血清CK及MDA含量给药后无明显变化，模型组给药1周和给药2周血清CK及MDA含量均明显高于对照组(P均<0.05)。参麦组给药1周和给药2周血清CK及MDA含量均明显低于模型组(P均<0.05)。见表1。

表1 各组血清MDA及CK含量比较

注：①与对照组比较，P<0.05；②与模型组比较，P<0.05。

2.2 各组血清T-SOD、ET-1及NO含量比较 对照组T-SOD、ET-1及NO含量给药后无明显变化；模型组给药1周和给药2周血清T-SOD及NO含量均明显低于对照组(P均<0.05)， ET-1含量明显高于对照组(P<0.05)。参麦组给药1周和2周后血清T-SOD及NO含量均明显高于模型组(P均<0.05)， ET-1含量显著低于模型组(P<0.05)。见表2。

表2 各组血清T-SOD、ET-1及NO含量比较

注：①与对照组比较，P<0.05；②与模型组比较，P<0.05。

2.3 各组心肌缺血情况比较 2周后测得对照组心肌无梗死现象。参麦组心肌梗死范围及坏死区质量均明显低于模型组(P均<0.05)。见表3。

3 讨 论

氧自由基化学性质极为活泼，正常情况下，氧自由基的生成与清除维持着动态平衡，当心肌缺血再灌注时，常引起氧自由基的爆发产生，氧自由基的毒性反应极其强烈[7]，此时机体会产生大量MAD、CK及 ET-1，由于Ca2+-ATP酶活性降低，造成细胞膜基本特征的改变，引起细胞代谢和功能障碍，甚至死亡，生化指标则反映在T-SOD酶活性及NO合成降低。血管内皮细胞能合成和分泌多种生物活性物质，如NO、ET-1等，它们可维持血管的正常舒缩状态，改善冠心病心肌缺血患者冠状动脉内皮功能,增加冠状动脉血流[8]。CK是一种存在于心肌细胞内的蛋白酶，当心肌细胞损伤或坏死时，CK便可通过受损的细胞膜释放到血液中，因此CK可以作为反映心肌坏死程度的指标。在生理情况下，NO可舒张血管，抑制ET-1收缩血管作用，且相对维持动态平衡，保证了血管正常的舒缩功能。内皮细胞释放的NO对血管内皮本身具有重要的保护作用，在缺血再灌注时血管内皮合成和释放NO不足，使其拮抗ET-1作用减弱，此时循环血中ET-1含量增加，对血管保护作用减弱而造成缺血再灌注损伤。

表3 造模2周后大鼠心肌缺血情况

注：①与模型组比较，P<0.05。

近年来心肌缺血再灌注损伤的防治已取得了明确的成果, 大量中草药被应用到临床防治缺血再灌注损伤，其中参麦注射液在临床上大量应用并取得可靠疗效。参麦注射液不仅能促进Ca2+-ATP酶活性恢复,增强钠钾ATP酶活力,减少细胞内钙超载,还通过Na+，K+-ATP酶调节钠氢交换来抑制钠钙交换,阻止Ca2+内流,改善心肌组织能量代谢[9]；其还具有活血化瘀、改善微循环、增加冠脉灌注和心肌供氧作用[10]。本实验结果显示，模型组大鼠造模后MDA、CK及ET-1含量均明显增高，T-SOD及NO含量明显下降。在应用参麦注射液后，MDA、CK及ET-1含量均有不同程度的降低，T-SOD及NO含量均增高，且心肌缺血面积低于模型组，说明参麦注射液可有效抑制缺血再灌注大鼠MDA、CK的释放产生，并使NO及ET-1达到动态平衡，缩小心肌缺血梗死范围，减轻心肌缺血程度。但缺血再灌注组织损伤的机制是一个多因素参与的复杂过程，参麦注射液如何在各个环节发挥调节和干预并阻断其发生，还有待于深入研究。

[1] 付樱，何娟，卢露，等.参麦注射液对实验动物抗凝抑栓作用的研究[J].世界中医药，2007，2(6)：367-369

[2] 王育珊,张爽,张东,等.联合应用参麦和丹参注射液对急性心肌梗死缺血/再灌注心肌梗死缺血/再灌注心肌的保护作用[J].中国急救医学,2003,12(23):834

[3] 付辛芳,刘晓红.丹参的药理作用与临床应用研究进展[J].中国药物与临床,2006,15(1):76-77

[4] Ozmen S,Ayhan S,Demir Y,et al.Impact of gradual blood flow increase on ischemia-reperfusion injury in the rat cremaster microcirculationmodel[J].J Plast Reconstr Aesthet Surg,2008,61(8):939-948

[5] 李鑫辉,黄政德,葛金文,等.加味丹参饮对心肌IRI 大鼠骨髓干细胞动员作用的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志，2014，12(6)：723-725

[6] 于佳慧，刘谈，郭茂娟，等.参麦注射液对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌缺血的保护作用[J].天津中医药，2014，6(7)：353-357

[7] 林楠，谢庆平，郭恩琪，等.参麦注射液对大鼠肢体缺血再灌注损伤保护作用的实验研究[J].浙江医学，2014，6(11)：504-506

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[9] 贾凤玖,姚卫华,赵青山，等.参麦注射液和参麦注射液联合应用对急性心肌梗死患者肌钙蛋白T的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志，2013，11(11)：1385-1386

[10] 薛摇燕，肖荷妹，王艳飞，等.低分子肝素联合参麦注射液治疗不稳定型心绞痛疗效观察[J].现代中西医结合杂志，2011，20(6)：707-708

Protective effects of Shenmai Injection on myocardial ischemia reperfusion injury in rats

LI Yun1, ZOU Peixia1, YAO Yuan1, ZHU Kegang2, QI Tao3

(1.Taihe Hospital of Shiyan City, Shiyan 442000, Hubei, China; 2.Hubei University of Medicine, Shiyan 442000, Hubei, China; 3.General Hospital of China Pingmei Shenma Medical Group, Pingdingshan 467099, Henan, China)

Objective It is to observe the protective effect of Shenmai Injection on myocardial ischemia reperfusion injury in rats.Methods 8 healthy rats were used as control group, the other 20 rats by ligation of left anterior descending coronary artery for 30 min release buckles reperfusion 60 min to make the model of myocardial ischemia-reperfusion injury, and randomly divided into model group and Shenmai group.Three groups of rats were treated by tail intravenous injection with NS or Shenmai Injection.before and after treatment for 1, 2 weeks, the levels of serum creatine kinase (CK), serum malondialdehyde (MDA), total superoxide dismutase (T-SOD), endothelin-1 (ET-1) and nitric oxide (NO) content were detected, and the myocardial ischemic area was measured in after 2 weeks of treatment.Results After the model of myocardial ischemia-reperfusion injury were established in model group, the levels of serum MDA, CK, ET-1 were markedly increased (allP<0.05), and the T-SOD activity and NO content were markedly decreased (allP<0.05).After treated by Shenmai Injection in Shenmai group, the levels of serum MDA, CK, ET-1 were markedly decreased (allP<0.05), and the T-SOD activity and NO content were markedly increased (allP<0.05), the myocardial ischemic area were reduce significantly compared with model group (P<0.05).Conclusion Shenmai injection has protective effects on myocardial ischemia of rats, and its mechanism may be it can improve the free radical scavenging enzyme activity, promote production of NO to remove oxygen free radical, reduce lipid peroxidation, vascular endothelial dysfunction to improve reperfusion injury.

Shenmai Injection; myocardial ischemia reperfusion; malondialdehyde; serum creatine kinase; superoxide dismutase; nitric oxide

李云，女，主管技师，研究方向为临床药理与儿科诊疗。

祁涛，E-mail：cdscds1226@126.com

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.09.007

R-332

A

1008-8849(2015)09-0933-03

2014-08-10