IL-17在系统性硬皮病患者中的表达及与结缔组织生长因子的相关性

刘孟庄，王 娟，阿克木江·阿西木

(1. 新疆维吾尔自治区人民医院，新疆 乌鲁木齐 830001；2解放军第23医院，新疆 乌鲁木齐 830000)

IL-17在系统性硬皮病患者中的表达及与结缔组织生长因子的相关性

刘孟庄1，王 娟1，阿克木江·阿西木2

(1. 新疆维吾尔自治区人民医院，新疆 乌鲁木齐 830001；2解放军第23医院，新疆 乌鲁木齐 830000)

目的 探讨白细胞介素-17(IL-17)在系统性硬皮病(SSc)患者中的表达水平，及其与结缔组织生长因子(CTGF)的相关性。方法 选择68例SSc患者和同期整形外科收治的30例非SSc患者，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血浆IL-17水平，采用免疫组化SABC法检测皮肤CTGF含量。比较各组IL-17和CTGF表达水平的差异，及二者的相关性。结果 与对照组比较，SSc患者IL-17、CTGF蛋白表达水平较对照组显著升高，且活动组IL-17、CTGF蛋白表达水平显著高于非活动组(P<0.05)；弥漫型SSc组IL-17、CTGF蛋白表达水平较局限型SSc组明显增高(P<0.05)；SSc患者IL-17、CTGF蛋白与改良Rodman总皮肤厚度评分(MRSS)均呈线性正相关(r=0.712,0.738,P<0.05)；血浆IL-17与皮损组织CTGF蛋白亦呈线性正相关(r=0.680,P<0.05)。结论 IL-17在SSc患者外周血中表达增高，与CTGF具有较好相关性，共同参与了SSc的发病过程，阻断Th17细胞活化、分泌IL-17，有望为SSc的治疗提供新的靶点。

系统性硬皮病；白细胞介素-17；结缔组织生长因子

系统性硬皮病(SSc)又称硬化症，是一种自身免疫性弥漫性结缔组织疾病，发病高峰年龄是30～50岁，以手、足皮肤发硬为突出表现，严重者可出现全身皮肤僵硬和内脏器官纤维化[1]。研究认为，免疫性疾病患者组织和外周血中的Th17/Treg细胞体系处于失衡状态，而由Th17分泌的白细胞介素-17(IL-17)对固有免疫及获得性免疫炎症均有促进作用[2]。目前，结缔组织生长因子(CTGF)对SSc的作用已得到证实[3]，但其与IL-17的相关性，是否共同作用于SSc的发病，国内尚未见报道。本研究通过联合检测SSc患者IL-17和CTGF的表达水平，并分析其相关性，旨在为SSc的发病机制研究提供新的思路。

1 临床资料

1.1一般资料 选择2009年1月—2013年12月新疆维吾尔自治区人民医院皮肤科收治的SSc患者共68例，均符合1980年美国风湿协会制订的SSc分类标准[4]，并经组织病理检查确诊。其中男25例，女43例；年龄34～67(46.1±5.7)岁；病程3～105(39.4±8.6)个月；按照Valentini评分标准：活动组(≥3分)29例，非活动组(<3分)39例；改良Rodnan总皮肤厚度评分(MRSS)为4.4～7.3(6.1±0.7)分；弥漫型SSc 37例，局限型SSc 31例。同时选择我院整形外科收治的非SSc患者30例，其中男13例，女17例；年龄33～69(45.8±6.1)岁。本研究经我院伦理学委员会审核通过，所有研究对象均签署知情同意书。2组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 标本采集及检测

1.2.1 IL-17 所有研究对象均于清晨抽取空腹静脉血2 mL，置于EDTA抗凝管中，充分混匀，3 000 r/min离心10 min，留取上层血浆。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血浆IL-17水平，试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司，所有操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.2.2 CTGF 破损标本取自前臂伸侧或胫前部皮损患处，未经任何药物治疗。对照标本取自整形外科手术切除的正常皮肤组织。将标本组织通过10%甲醛固定、石蜡包埋，4 μm厚连续切片后进行免疫组化SABC法染色。每例标本组织均取相连的3张切片，常规脱蜡、水化、0.01 mol/L枸橼酸盐缓冲液(pH 6.0)作抗原热修复。兔抗人CTGF免疫组化单克隆抗体购自美国Santa Cruz生物技术公司，S-P免疫组化试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司，均采用试剂盒已知阳性组织作为阳性对照，以PBS代替一抗体作为阴性对照。

1.3 CTGF蛋白表达定量方法 采用Nikon Eclipss E600型全自动图像分析仪及Image-proplus图像分析软件进行定量分析，每张切片选取四周及中央5个区域(10×40倍)，均取该区域阳性反应最多的视野。测阳性反应面积比(阳性面积/组织面积×100%)，即吸光度值(A)，再取平均值。

2 结 果

2.1SSc患者疾病活动度与IL-17、CTGF表达的关系 与对照组比较，SSc患者IL-17、CTGF蛋白表达水平均显著升高，且活动组IL-17、CTGF蛋白表达水平显著高于非活动组(P<0.05)。见表1。

表1 SSc患者疾病活动度与IL-17、CTGF表达的关系

注：①与对照组比较，P<0.05；②与非活动组比较，P<0.05。

2.2 不同亚型的SSc患者IL-17、CTGF表达比较 与对照组比较，弥漫型和局限型SSc患者IL-17、CTGF蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)，且弥漫型SSc组IL-17、CTGF蛋白表达水平明显高于局限型SSc组(P<0.05)。见表2。

表2 不同亚型SSc患者IL-17、CTGF表达比较

注：①与对照组比较，P<0.05；②与非活动组比较，P<0.05。

2.3SSc患者IL-17、CTGF蛋白表达水平与MRSS的相关性分析 经Pearson相关性分析显示，SSc患者IL-17、CTGF蛋白与MRSS均呈线性正相关(r=0.712,0.738,P<0.05)；血浆IL-17与皮损组织CTGF蛋白亦呈线性正相关(r=0.680,P<0.05)。

3 讨 论

SSc的发病机制复杂，目前尚不十分清楚，临床上缺乏有效的药物，但免疫功能紊乱作为发病的重要原因已达成共识[5]。大量文献证实CTGF作为转化生长因子β(TGF-β)的下游效应因子，具有极强的致纤维化作用，在多种肺、肝等器官的纤维化疾病中高表达。近年来，研究发现SSc组织纤维化与CD4+T细胞的活化密切相关[6]，且血浆IL-17水平和TGF-β在不同亚型的SSc患者体内选择性增高，但关于IL-17与CTGF之间的相互关系，以及二者在SSc发病机制中的作用尚未见相关报道。

IL-17作为新近发现的一种致炎细胞因子，是由不同于Th1、Th2的CD4+T细胞亚群所分泌，该亚群细胞被命名为Th17细胞[7]。本组研究显示，与对照组比较，SSc患者IL-17、CTGF蛋白表达水平较对照组有不同程度显著升高，且活动组IL-17、CTGF蛋白表达水平显著高于非活动组(P<0.05)，推测IL-17在SSc发病机制中起一定的作用，一方面IL-17可诱导其他炎症细胞的活化、聚集，促进炎症反应；另一方面IL-17还可促进成纤维细胞的增生，影响机体纤维化的形成。同时弥漫型SSc组IL-17、CTGF蛋白表达水平较局限型SSc组明显增高(P<0.05)，说明IL-17水平与病情严重程度相关，高水平IL-17提示病情较重，预后较差。

皮肤增厚是SSc纤维化进展的重要表现，MRSS是目前最常用的临床评价标准。相关性分析发现，SSc患者IL-17、CTGF蛋白与MRSS均呈线性正相关，进一步说明IL-17与CTGF在SSc参与了SSc致病的整个过程，而并非只在炎症反应阶段发挥作用。有学者研究认为，在SSc疾病的后期，随着炎症反应逐渐被抑制，干扰素-γ(IFN-γ)、IL-4等因子水平不断降低，对Th17细胞的抑制作用也随之减弱，从而促进IL-17对成纤维细胞的活化，加速纤维化的进展[8-9]。此外，血浆IL-17与皮损组织CTGF蛋白亦呈线性正相关，说明存在较好的相关性和协同性，但二者在SSc发病中的相互作用机制尚需进一步研究证实。

综上所述，IL-17在SSc患者外周血中表达增高，与CTGF具有较好相关性，共同参与了SSc的发病过程，且可作为SSc病情严重程度的判断指标之一。阻断Th17细胞活化、分泌IL-17有望为SSc的治疗提供新的靶点。

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10.3969/j.issn.1008-8849.2015.24.032

R593.25

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1008-8849(2015)24-2703-02

2014-06-15