左旋氨氯地平联合缬沙坦对血管内皮的保护作用

崔逢文，司道远，杨济宁，杨萍

• 论著 •

左旋氨氯地平联合缬沙坦对血管内皮的保护作用

崔逢文，司道远，杨济宁，杨萍

目的探讨左旋氨氯地平与缬沙坦联合应用对血管内皮保护作用的影响。方法纳入共30只实验大鼠，分为五组；其中24只自发性高血压大鼠（SHR），随机分为左旋氨氯地平治疗组（A组），缬沙坦治疗组（B组），左旋氨氯地平+缬沙坦治疗组（C组）及空白对照组（D组），每组6只；6只魏-凯二氏大鼠（WKY）设为正常对照组（E组）。药物治疗及观察8周后测量无创血压及左室射血分数的变化。处死大鼠，分离心肌组织，计算全心重量/体重（HW/BW）、左室重量/体重（LVW/BW）；提取血浆，ELISA方法测定内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、超氧化物歧化酶（SOD）、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）、白介素-6（IL-6)、肿瘤坏死因子-α（THF-α）。结果A、B、C与D组相比，A、B、C三组大鼠血浆NADPH、IL-6、THF-α、HW/BW 、LVW/BW明显下降，SOD、eNOS明显升高，其中C组变化更为显著（177.3±3.8、5.1±0.8、47.9±3.1、83.9±3.9、127.0±9.7、5.2±0.4、3.3 ±0.2），提示两种药物联合具有交互作用；血压前后比较A、B、C三组均不同程度的下降，D组升高明显；左室射血分数差值水平的比较，A、B、C三组的变化无临床意义，D组下降明显。结论左旋氨氯地平、缬沙坦都具有良好的血管内皮保护作用；两者联合在血管内皮的保护上具有协同作用。

高血压；血管内皮；左旋氨氯地平；缬沙坦；大鼠

高血压病作为常见疾病，发病机制尚不完全清楚，其病理生理过程涉及交感神经系统，肾素-血管紧张素系统，血管内皮炎性改变等[1,2]。氧化应激在高血压中导致血管收缩，炎症反应，内皮细胞受损，平滑肌增殖、肥大等靶器官损害。血管舒张过程中内皮同血管平滑肌一样，起重要作用，内皮功能障碍被认为是高血压的后果，同时也伴随着高血压的进展[3]。内皮功能障碍是血管内皮细胞的结构和功能发生改变。其中一氧化氮生物利用度下降是重要的原因之一[4]。左旋氨氯地平和缬沙坦都是临床上应用广泛的降压药物，具有较好的降血压及内皮保护功能。本文的宗旨在观察左旋氨氯地平和缬沙坦对自发性高血压大鼠联合用药后降血压、保护血管内皮的协同效果，并探讨其可能的作用机制。

1 材料和方法

1.1 实验动物SHR大鼠24只（雌、雄各12只），WKY大鼠6只（雌、雄各3只），北京维通利华实验动物技术有限公司提供，体重190～220 g之间。

李霞是在含沙射影地指责景花厂挖大发厂的人。我有点心虚。我想起阿花的狡辩之词，便有了底气。我不卑不亢地说，李课长说得对，到底是自由竞争还是在恶意猎取，谁说了都不算，如果有空，劳课长大驾去景花厂看看便知道了。我站了起来，比画着双手说，大厂有大厂的强势，小厂有小厂的优越，人才流动完全取决于员工的就业取向，决不是可以人为逆转的。李课长既然提到了自由竞争，我不妨说句实话，大发厂的优势在于工资待遇高，景花厂的优势在于工作环境好，团队精神强。如果景花厂没有优势，即使用绳子捆住员工的手脚，他们还是要跑的。

其他学生陆续举手发言，举例说明，汽车匀速行驶时路程随时间的变化，购买苹果时总价随着数量的变化，都是匀速变化。

1.2 实验试剂及药品苯磺酸左旋氨氯地平（施惠达，2.5 mg/片，施慧达药业集团有限公司）；缬沙坦胶囊（代文，80 mg/片，北京诺华制药有限公司）；内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）、B型脑钠肽（BNP）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（THF-α） ELISA试剂盒，都购自美国ADL公司。

1.3 实验器材台式离心机，电子天平，酶标检测仪，恒温水箱，Phillips HD7多普勒彩超仪，ZS-Z无创尾动脉血压测量仪，DJ动物洁净饲养柜等。

B组（SHR、6只）：缬沙坦，100 mg/（kg·d）；

1.5 观察指标

1.4 分组及给药24只SHR大鼠，分为4组，6只WKY为1组。给药时间为8周，8周后将大鼠麻醉处死，取心肌组织用于计算心脏体重/体重（mg/ g）及左室重量/体重（mg/g）。具体分组方案及给药如下：

C组（SHR、6只）：苯磺酸左旋氨氯地平，2.5mg/（kg·d）+ 缬沙坦，50 mg/（kg·d）；

“先服务好月嫂，才能服务好客户”是菩提果独特的服务理念，在菩提果内部的KEEP赋能体系中包括知识赋能（Knowledge）、效率赋能（Efficiency）、情感赋能（Emotion）、模式赋能（Pattern），通过KEEP赋能体系给好月嫂提供帮助，让更多家庭受益！

D组（SHR、6只）：生理盐水，1 ml/（kg·d）；

首先，传播与翻译涉及相似的要素。哈罗德·拉斯韦尔（Harold Dwight Lasswell）在传播学奠基之作《社会传播的结构与功能》中提出著名的5W传播模式：谁（who），说什么（what），通过什么渠道（in which channel），对谁说（to whom），产生什么效果（with what effect）。由此可见，传播涉及的要素包括：传播主体、传播内容、传播媒介、传播对象和传播效果。而翻译涉及的要素则主要包括：作者、原作、译者、译作和译入语读者。

[17]Jerry Norman.A preliminary report on the dialects of Mintung.Monumenta Serica 1977-1988 33.

A组（SHR、6只）：苯磺酸左旋氨氯地平，5mg/（kg·d）；

1.5.4用ELISA法检测血浆SOD、eNOS、NADPH、IL-6、THF-α水平，具体操作方法根据试剂盒提供说明书执行。

E组（WKY、6只）：生理盐水，1 ml/（kg·d）。

1.5.2 心脏左室射血分数（LVEF）应用Phillips HD7多普勒彩超仪。于实验起始和治疗第8周测量LVEF值。具体方法为将大鼠固定与模具上，乙醚麻醉，清理体毛备皮，应用彩超仪及动物彩超探头，以M型法测量心功能，记录LVEF值。

1.5.3 心肌重构指标（HW/BW，LVW/BW）：将大鼠麻醉后称取体重（BW），处死后取心脏后称全心重量（HW），分离左心室并称取重量（LVW），并计算全心肥厚指数（HW/BW）及左心室肥厚指数（LVW/BW）。

1.5.1 大鼠血压的变化测量大鼠尾动脉收缩压（SBP）。应用ZS-Z无创尾动脉血压测量仪测定大鼠治疗前血压，至第8周测量大鼠尾动脉收缩压。具体方法：以5只大鼠为一组，分别放入固定笼中，置于血压测量仪中，尾部穿过连接换能器的测压尾套，36.5℃预热15～20 min，待大鼠平静，尾动脉充分扩张至信号强度达标时加压，至脉搏消失、缓慢放气至脉搏恢复，感知信号变化，得到收缩压数值，重复3次取平均值记录。

1.6 统计方法实验数据以均数±标准差（± s）表示，用SPSS19.0软件进行数据统计，组间的交互性比较，计量指标用单因素方差分析及析因设计方差分析检验法。P＜0.05表示有统计学差异，P＜0.01表示差异极显著。

2 结果

2.1 血压和左室射血分数变化各组大鼠经过不同治疗后SBP下降，其中C组下降较A、B组显著（P＜0.01），与E组相比无统计学差异。LVEF在A、B、C三组间未见统计学差异，D组数值与A、B、C、E四组差异性显著（P＜0.01）（表1）。

对于本超高层建筑项目，同时作业的单元众多、专业间频繁交叉工作多，各专业及施工区域间的协同和搭接是关键。BIM技术以工作面为管理对象，自动统计各专业在同一时间点同一工作面的所有施工活动，以进行后续决策管理，如本工程地下室结构施工阶段流水划分如图22。

2.2 治疗后各组比较对血浆SOD、eNOS、NADPH、IL-6、THF-α水平HW/BW和LVW/BW的影响。由于E组WKY大鼠对实验结论无影响，将A、B、C、D四组比较并进行统计学分析。C组在各项指标中均表现出交互作用（表2）。

3 讨论

目前对降压方案的选择上，降压的幅度已不再是唯一的指标，降压平稳性及更多的靶器官保护作用都成为方案选择的重要考量。药物联合方案不仅能发挥每个药物各自的降压优势，在机制上起到互补，同时能对不良反映进行相互抵消。钙离子拮抗剂与血管紧张素受体阻滞剂的联合用药方案在降压达标性和靶器官保护的有效性上，较单一药物方案具有明确优势。左旋氨氯地平是我国自主产权的第三代钙离子拮抗剂，缬沙坦在上世纪90年代即经过美国FDA批准的高选择性血管紧张素受体阻滞剂，两者都是临床上市多年，证据充足的降压药物，具有较好的降压效果及血管内皮保护功能。然而左旋氨氯地平+缬沙坦，尤其是两者联合后对血管内皮作用的研究目前报道极少。通过对两种药物联合对血管内皮功能影响的深入研究，补充了联合用药理论基础上的实验数据，也为临床用药方案的选择提供依据。

表2 左旋氨氯地平和缬沙坦对各项指标的影响

钙离子拮抗剂（CCB）与血管紧张素受体阻滞剂（ARB）联合用药较单一药物具有明确的优势[5]。①血压波动性大能够通过血管内皮损伤，激活炎症反应，促进细胞凋亡引起心肌重构等靶器官损害[6]，降压平稳性也是评价降压药物的标准之一。氨氯地平与缬沙坦的组合被证实能够有效的降低血压及控制血压变异性（BPV）[7]，且较单独应用氨氯地平效果更好。左旋氨氯地平同样有对BPV的调节作用[8]。②心率加快也是高血压患者心血管事件的独立危险因素。钙离子拮抗剂能够扩张血管，引起交感神经兴奋，使心率反射性加快。过快的心率将使动脉血管壁及血管内皮承担更多的冲击损伤。ARB通过阻断血管紧张素II生成的经典血管紧张素转化酶（ACE）途径和非经典ACE途径，减少肾上腺素释放，降低了交感神经张力，从而降低心率。③CCB对血管的扩张以外周细小动脉为主，可能出现足踝部水肿的副作用。虽然左旋氨氯地平副作用的发生率较其他CCB药物明显降低，但仍有出现水肿的负面报道[10]。ARB可扩张外周静脉血管，增加外周血回流，促进局部血液循环，减少水肿的发生[11]。④缬沙坦与左旋氨氯地平都具有良好的抗炎、抗氧化作用：缬沙坦通过阻断血管紧张素1型受体（AT-1），从而抑制单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达[12]；还能够通过抑制p22phox的表达减少胞内活性氧簇（ROS）水平，进而抑制内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白内皮受体（LOX-1） mRNA转录和蛋白表达[13]。无论是氨氯地平还是左旋氨氯地平，对人内皮细胞的炎性因子MCP-1表达的抑制表现一致[14,15]。实验中左旋氨氯地平和缬沙坦组NADPH 、SOD、 IL-6、THF-α的抑制作用明显，对炎症因子的抑制，联合用药组上述标记物的下降更为明显。⑤对于一氧化氮活性的调节，两种药物通过激肽系统表现出协同性：缬沙坦能够抑制AT1受体、增强血管紧张素2型受体（AT-2）和Ang（1-7）-Mas系统的表达，使之与缓激肽β2受体结合增强，最终提高NO的水平[16-18]。氨氯地平促进NO的释放被证实是缓激肽β2受体介导的[19]，其左旋手性结构-左旋氨氯地平对血管内皮的保护也是通过促进NO的生成及释放[20]。虽然左旋氨氯地平没有相应的右旋结构体，但有研究认为[21]左旋氨氯地平与氨氯地平在血管保护方面并没有显著差异。

本次实验中治疗组eNOS水平的上调以及联合用药组更优的效果，再次证实了药物对NO释放的影响；而多组炎症指标结果的降低，同样验证了联合用药对氧化应激及炎症反应的抑制。证实了左旋氨氯地平和缬沙坦联合用药在血管内皮保护方面确实具有协同作用，为今后进一步的研究提出了部分理论依据。由于实验的规模及条件所限，BPV、心率及足踝部水肿等指标并未纳入检测范围，令实验仍具有一定的局限性，但不能否认药物联合降压的优越性。关于左旋氨氯地平与缬沙坦联合的最佳配比剂量以及氨氯地平与之的差异性有待于进一步探索；而这两种药物联合应用的实际效果，也有待于大规模的临床实验的证实。综上所述，左旋氨氯地平、缬沙坦都具有良好的血管内皮保护作用。左旋氨氯地平联合缬沙坦方案对于血管内皮保护优于单一用药，有协同作用。

[1] Savoia C,Burger D,Nishigaki N,et al. Angiotensin II and the vascular phenotype in hypertension[J]. Expert Rev Mol Med, 2011,13:e11.

[2] Zubcevic J,Waki H,Raizada MK,et al. Autonomic-immune-vascular interaction: an emerging concept for neurogenic hypertension[J]. Hypertension,2011,57(6):1026-33.

[3] Versari D,Daghini E,Virdis A,et al. Endothelium-dependent contractions and endothelial dysfunction in human hypertension[J]. Br J Pharmacol, 2009,157(4):527-36.

[4] Filip M,Maciag J,Nosalski R,et al. Endothelial dysfunction related to oxidative stress and inflammation in perivascular adipose tissue[J]. Postepy Biochem,2012,58(2):186-94.

[5] Sleight P. Clinical evidence from ONTARGET: the value of an angiotensin II receptor blocker and an angiotensin-converting enzyme inhibitor[J]. Hypertens Suppl,2009,27(5):23-9.

[6] Tao X,Zhang SH,Chu ZX,et al. Apoptosis is involved in the cardiac damage induced by sinoaortic denervation in rats. Clin Exp Pharmacol Physiol,2003,30(5-6):362-8.

[7] 李水花,吴农田. 倍博特与络活喜对高血压病患者血压变异性的影响[J]. 陕西医学杂志,2013,9(42):1230-2.

[8] 刘娅,廖礼强. 左旋氨氯地平对中青年高血压患者血压和血压变异性的影响[J]. 中国新药与临床杂志,2014,3(33):196-9.

[9] 王文. 高血压患者目标心率是＜70还是＜80次/min[J]. 中华高血压杂志,2014,22(6):507-10.

[10]易洪刚,黄高忠,刘关键. 苯磺酸左旋氨氯地平治疗原发性高血压有效性和安全性的系统评价[J]. 中国循证医学杂志,2008,7:543-50.

[11] Fogati R,Malamani G,Zoppi A,et al. Effect on the development of ankle edema of adding delapril to manidipine in patipients with mild to modetate essential hypertension:a three-way crossover study[J]. Clin Ther,2007,29(3):413-8.

[12] Bin Liu,Latika Dhawan,Burns C. Blaxall,Mark B.Taubman. Protein kinase Cδ mediates MCP-1 mRNA stabilization in vascular smooth muscle cells[J]. Molecular and Cellular Biochemistry. 2010 (1-2),344:73-9.

[13] 黄婷,唐莉,栗夏连. 缬沙坦抑制非对称二甲基精氨酸诱导的内皮细胞LOX-1的表达[J]. 中国动脉硬化杂志,2013,6(21):513-7.

[14] Yoshii T,Iwai M,Li Z,et al. Regression of atherosclerosis by amlodipine via anti-inflammatory and anti-oxidati[J]. Hypertens Res,2006,29(6):457-66.

[15] 刘福林,刘映峰. 苯磺酸左旋氨氯地平对AGEs诱导内皮细胞MCP-1分泌的影响[D]. 南方医科大学,2012:51-7.

[16] Widdop RE,Vinh A,Henrion D,et al. Vascular angiotensin AT2 receptors in hypertension and ageing[J]. Clin Exp Phamacol Physiol, 2008,35(9):386-90.

[17] Dong B,Yu QT,Dai H Y,et al. Angiotensin-converting enzyme 2 activation protects against hypertension-induced cardiac fibrosis involving extracellular signal-regulated kinases[J]. J Am Coll Cardiol, 2012,59(8):739-47.

[18] 经武,房灿,刘成霞,等. 缬沙坦对自发性高血压大鼠心脏、胸主动脉血管紧张素转换酶2表达的影响[J]. 中华临床医师杂志2012,6(23):7543-6.

[19] Biao Xu,Li Xiao-hong,Gao Lin,et al. Amlodipine, but not verapamil or nifedipine, dilates rabbit femoral artery largely through a nitric oxideand kinin-dependent mechanism[J]. British Journal of Pharmacology, 2002,136:375-82.

[20]王睿,吕吉元,张明升,等. 左旋氨氯地平对自发性高血压大鼠胸主动脉重构及内皮功能的影响[J]. 中国临床药理学杂志.2011,27:283-6.

[21] 龚艳春,陶波,沈捷. 苯磺酸左旋氨氯地平对轻中度高血压患者血管功能的影响[J]. 中国高血压杂志.2014,22(4):336-41.

Protective effect of levamlodipine combining valsartan on vascular endothelial function

CUI Feng-wen, SI Dao-yuan, YANG Ji-ning, YANG Ping. Department of Cardiology, China-Japan Union Hospital, Jilin University, Changchun 130033, China.

YANG Ping, E-mail:pyang@jlu.edu.cn

ObjectiveTo discuss the protective effect of levamlodipine combining valsartan on vascular endothelial function.MethodsTest rats (n=24, with spontaneous hypertension) were divided into 5 groups: group A treated with levamlodipine, group B treated with valsartan, group C treated with levamlodipine combining valsartan, and group D (blank control group, each n=6), and other WKY rats (n=6) were chosen as group E (normal group). After treating and observing for 8 w, the changes of non-invasive blood pressure (NBP) and LVEF were observed. The ratio of heart weight to body weight (HW/BW), left ventricular weight to body weight (LVW/BW) were calculated after executed rats for separating myocardial tissue. The levels of endothelial nitric oxide synthase (eNOS), superoxide dismutase (SOD), reduced nicotinamide adenine dinucleotidephosphate (NADPH), interleukin-6 (L-6) and tumor necrosis factor-α (THF-α) were detected by using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).ResultsThe levels of NADPH, IL-6, THF-α, HW/BW and LVW/BW decreased significantly, and levels of SOD and eNOS increased significantly in group A, group B and group C compared with group D, and these changes were more significant in group C (177.3±3.8, 5.1±0.8, 47.9±3.1, 83.9±3.9, 127.0±9.7, 5.2±0.4, 3.3±0.2), which indicated that levamlodipine and valsartan had an interactive effect. NBP decreased in group A, group B and group C in varying degrees, and increased significantly in group D. LVEF had no significant changes in group A, group B and group C but decreased significantly in group D.ConclusionLevamlodipine and valsartan all have protective effects on vascular endothelial function, and they have an interactive effect when they are combined in clinical application.

Hypertension; Vascular endothelial; Levamlodipine; Valsartan; Rats

R544.1

A

1674-4055(2015)03-0396-04

2015-02-12）

（责任编辑：张灵）

130033 长春，吉林大学中日联谊医院心内科

杨萍,E-mail:pyang@jlu.edu.cn

10.3969/j.1674-4055.2015.03.35