痛风丸中丹皮酚的含量测定

刘传玲刘元昆荣飞

（1威海市药品检验所，山东 威海 264200；2威海市中医院）

痛风丸中丹皮酚的含量测定

刘传玲1刘元昆2荣飞1

（1威海市药品检验所，山东 威海 264200；2威海市中医院）

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定痛风丸中丹皮酚的含量测定方法。方法：色谱条件：紫外检测器Aglient C18柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm），以甲醇-水（40∶60）为流动相，流速为0.8 m L/min，检测波长为274 nm，柱温为30℃。结果：丹皮酚在0.104 7～ 1.047 0 mg/m L范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，回收率为99.78%，RSD=0.39%。结论：本方法简便，快速，准确，灵敏度高，重复性好，可用于痛风丸中丹皮酚含量的测定。

痛风丸；高效液相色谱法；丹皮酚；含量测定

痛风丸是医院制剂，本制剂处方由徐长卿、黄柏、苍术、薏苡仁等 15味中药组成，具有健脾益肾，清宣降浊，活血通络的功效，用于痛风及痛风引起的腰痛、关节痹痛、红肿热痛等症。方中徐长卿为君药，丹皮酚是徐长卿的主要有效成分[1]。为控制质量，以丹皮酚作为本制剂的质量控制指标。目前，丹皮酚的含量测定方法已被《中国药典》2010年版一部收载。本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对本制剂中丹皮酚进行了含量测定方法的研究，通过方法学的系统考察和3批样品的含量测定，建立了本制剂中丹皮酚的HPLC含量测定方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津 LC-20AT色谱泵；紫外检测器，AglientC18（250 mm ×4.6 mm；5μm）色谱柱；日本岛津UV-240 PC紫外分光光度计；1 cm石英吸收池。

1.2 试药

甲醇为色谱纯（天津四友生物医学技术有限公司，批号：20131104）；甲醇（Tediaway Fairfield USA，批号：13075043）；丹皮酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110708-200506）；痛风丸（威海市中医院制剂室，批号：130901，130902，130903，130904）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Aglient C18（250mm ×4.6mm；5μm）；以甲醇-水（40∶60）为流动相，流速为0.8 m L/min，检测波长为274 nm；柱温为30℃；理论板数按丹皮酚峰计算应不低于3 000；外标法测定。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 m L，称定质量，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 m in，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.2 徐长卿对照药材溶液的制备取徐长卿对照药材0.1 g，同供试品溶液制备方法，得对照药材溶液。

2.2.3 对照品溶液的制备精密称取丹皮酚对照品10.47 mg，置50 m L量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密吸取该储备液1 m L，置 10 m L量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，其浓度为20.94μg/m L。

2.2.4 缺徐长卿阴性对照液的制备按处方比例称取除徐长卿以外的其他各味药，按本品的制备工艺及供试液的制备方法制得阴性对照液。

2.3 最大吸收波长选择

吸取丹皮酚对照品溶液、供试品溶液各10μL分别进样，在200～ 400 nm范围内检测，结果对照品和供试品溶液均在274 nm处有最大吸收，而阴性对照品在此处无最大吸收，故检测波长选择274 nm。

2.4 流动相的选择

在流速0.8 m L/m in，检测波长274 nm的条件下，用同一浓度供试品溶液，进样量10μL，分别选择了甲醇-水（60∶40）、甲醇-水（55∶45）、甲醇-水（40∶60）进行研究。最后确定以甲醇-水（40∶60）为流动相，对丹皮酚进行分离效果好。见图1。

2.5 空白干扰试验

精密吸取丹皮酚对照品溶液、供试品溶液、缺徐长卿阴性对照液各10μL进样，流动相选择甲醇-水（40∶60），结果显示阴性对照色谱中在与对照品相应的位置上未见色谱峰出现，表明无干扰。见图2。

2.6 稳定性试验

精密吸取丹皮酚对照品溶液、供试品溶液各10μL，间隔一定时间注入液相色谱仪中，记录色谱峰面积。结果表明，供试品溶液在24小时内具有良好的稳定性，完全可以满足HPLC的时间要求。见表1。

图1 不同比例流动相HPLC图

图2 样品中丹皮酚空白干扰测定图

表1 供试品稳定性试验结果

2.7 精密度试验

分别精密吸取丹皮酚对照品溶液、供试品溶液各10μL，连续进样6次，测定峰面积。结果表明仪器精密度良好。见表2。

表2 供试品精密度试验结果

2.8 线性关系考察

精密吸取上述对照品储备溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 m L，于10 m L量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。吸取上述各溶液，分别进样10μL，注入液相色谱仪，测得峰面积积分值。以峰面积积分值为纵坐标，丹皮酚进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：

Y=5 195 392X＋ 35 115。

r= 1.0，结果表明丹皮酚在0.104 7～1.047 0 mg/m L范围内线性关系良好，见表3。

表3 丹皮酚线性范围考察结果

2.9 重复性试验

取同一批样品5份，按含量测定项下方法，依法测定含量，结果5次测定的平均含量为1.457 9mg/g，RSD为0.59%，表明重现性良好，见表4。

表4 重复性试验结果

2.10 加样回收率试验

取同一批样品0.4 g，共取6份，精密称定，分别精密加入浓度为0.552 0 mg/m L丹皮酚对照品溶液1 m L，按供试品溶液的制备方法制得回收率各试验液，依法测定，并计算回收率，结果见表5。

2.11 样品测定

分别精密吸取对照品溶液与3批供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定并计算各批样品中丹皮酚的含量，结果见表6。

表5 加样回收率试验结果

表6 3批样品中丹皮酚的测定结果

2.12 丹皮酚含量限度的测定

为了制定丹皮酚的含量限度，对市售徐长卿药材中丹皮酚的含量以及用此药材制成的中试样品丹皮酚的含量进行了测定。结果表明，各批徐长卿中丹皮酚的含量均符合药典中不得少于1.3%的规定，3批样品中丹皮酚的含量分别为 1.61%（本试验所用），1.59%和1.53%，并计算其转移率为70%。根据《中国药典》2010年版一部[1]对徐长卿药材中丹皮酚含量的标准规定，徐长卿药材中含丹皮酚不得少于1.3%。按70%转移率计算，其成品含量限度暂定为每1 g含徐长卿以丹皮酚（C9H10O3）计，不得少于1.1 mg。

3 小结与讨论

3.1 提取方法的选择

同一批号（130901）样品，提取丹皮酚的方法分别采用了超声提取、水浴加热回流提取2种方法，提取时间均为 30 m in，结果显示两种方法测定结果没有显著差异，为节约成本，采用超声提取方法。分别采用超声提取方法提取20，30，40 m in，结果30 m in和40 m in效果差别不大，故采用超声提取30 m in作为提取方法。

3.2 本制剂处方中徐长卿为君药,有效活性成分丹皮酚易于测定，故将其作为本制剂含量测定的指标成分。文献中对丹皮酚的含量测定方法主要有溴量法[2]、气相色谱法（GC）[3]等，但方法都比较麻烦。本文采用HPLC测定本制剂中丹皮酚的含量，此法具有样品预处理简单，回收率好，重复性好的特点,可用于痛风丸中丹皮酚的含量测定，并适合制剂室常规检测。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版）一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010.

[2] 吴波.中药牡丹皮的研究——牡丹皮中丹皮酚的含量测定[J].药学学报，1966，13（2）：145.

[3] 房杏春.高分辨GC法测定六味地黄汤中丹皮酚的含量[J].中草药，1990，21（11）：10.

Content Determ ination of Paeonol in Tongfeng Pills

Liu Chuanling1，Liu Yuankun2，Rong Fei1（1 Weihai Institute for Drug Control，Shandong Weihai 264200，China；2 Weihai TCM Hospital）

Objective:To establish a method for the determ ination of paeonol in tongfeng pills by HPLC.M ethods:Aglient C18column（4.6 mm×250 mm,5μm）and UV detector were used for the content determ ination of paeonol w ith a mobile phase of methanol-water（40∶60）at a flow rate of 0.8 m L/m in,the detection wavelength was at 274 nm and the room temperature was at 30℃.Results：A good linear relationship of paeonol and chromatographic peak area was obtained w ithin the range of 0.104 7～1.047 0 mg/m L，and the recovery rate was 99.78%，RSD=0.39%.Conclusion:The method is simple,rapid,accurate and reproducible.It can be used for the content determ ination of paeonol in tongfeng pills.

Tongfeng Pill；HPLC；Paeonol；Content Determ ination

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.05.006

2015-01-14）

刘元昆，女，主管药师。研究方向：中药制剂。通讯作者E-mail：zijingpi123@sina.com