H P L C定量法基础知识

中屋慎 小谷口美也子等

本文深入浅出地讲解分析实验中的各种问题，如对分析值误差的理解、检量线的意义、高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）定量法、高效阴离子变换色谱（high performance anion exchange chromatography-pulsed amperometric detector，HPAEC-PAD）分析法、高效液相色谱-电喷雾检测器（highperformanceliquid chromatography-charged aerosol detector，HPLC-CAD）分析法、采用HPLC-CAD法进行食品中葡萄糖的定量等。分析方法大致分为两种，第一种是直接定量对象物；第二种是依托与对象物有稳定量化关系的物质，间接求得对象物的量值。分析中有可能出现由各种因素导致的误差，如取样、称量、换算小数点、操作个人之间的习惯等等，总之所得结果往往不是绝对准确的。误差是统计学上的一个重要概念，因此，1993年国际标准化组织等7个机构联名出版了《如何表现检测中误差值之规范》的册子，将误差值定义为“检测结果中出现的附着在检测值上的合理性数值偏差”。由于将检测过程中各操作的误差全部数据化了，因此就能把整个检测过程的误差值统一计算出来，因而可以得到相当准确的检测结果。

HPLC（高效液相色谱）法是检测时间短重复性佳，且所用试样量少的分析法，该设备是由分离试样中的成分和感知溶出成分这两种部分组成，因此该设备必须是能高效检测对象物成分的结构，这样就必须选用很适合的检出器。高效阴离子交换色谱层析（HPAEC-PAD）法可高效检测糖类和氨基酸类化合物，随着试样浓度的变化其出峰面积也会改变，因此每次都应使用标样并制作检量线图。