中药复方制剂对雏鸡的抗病毒能力及免疫增强作用的研究

■邱淑敏 陈 涛 李龙飞 刘美玲 汉丽梅

（沈阳农业大学，辽宁沈阳 110866）

中药是历史悠久资源丰富的纯天然有机物质，随着饲料工业的发展，中药添加剂也随之进入了快速发展阶段。由于中药内既含有丰富的营养成分，又含有多种生物活性物质，因此，其在为动物补充营养的同时，还具有防治疾病和促进动物健康生长的作用[1]。中药作为饲料添加剂，具有营养性和药物性的双重作用[2]，即可有效抑菌杀菌，有助于改善机体肠道菌群的平衡[3]，对免疫器官的发育、白细胞及单核-巨嗜细胞系统、细胞免疫、体液免疫、细胞因子的产生等方面均有促进作用，并因此提高机体的非特异性免疫能力[4]。有些中药还可以通过有效调节机体生理功能、调节缓和激原、防止免疫器官萎缩等，而起到抗应激的作用[5]。此外，有些中草药还能起到某种维生素的功能作用，如小茴香具有维生素A样作用；川芎、当归等具有维生素E样作用；黄芪、陈皮、荞麦秸等具有维生素P样作用。

研究发现，结合中草药本身的特性，根据中草药配伍原则，在中兽医理论的指导下，将中草药有目的配伍起来进行应用，使其具有药效互补、协同作用、疗效增强、减少不良作用等优点，因此中药复方的研制方面近年来备受重视。有研究表明中药复方制剂可以通过促进肠道有益菌生长和抑制有害菌繁殖，而有效提高肠道健康，促进机体生长，起到提高机体免疫力、抗病毒、抗应激等作用效果[6-11]。本研究应用建立鸡MD肿瘤模型，分别饲喂添加以茯苓、白术等中药为主的不同中药复方制剂，统计不同处理组蛋雏鸡的发病率及死亡率，并观察雏鸡血清中抗氧化指标及各种细胞因子的变化，从而探讨中药复方对雏鸡抗病毒能力及免疫性能的影响，以期为中药复方制剂在动物养殖生产中的应用，生产无毒副作用、无药物残留的动物性食品，避免抗生素滥用带来的严重环境污染等提供方案。

1 材料与方法

1.1 材料

试验动物1日龄海兰褐蛋雏鸡由本校试验场提供，MD-京1株血毒（本研究保存）；白术、茯苓等中药均购自各药房；玉米-豆粕型无抗基础日粮来自禾丰牧业有限公司；总超氧化物歧化酶（T-SOD）测定试剂盒、丙二醛（MDA）测定试剂盒：南京建成试剂公司产品；鸡白细胞介素2（IL-2）酶联免疫分析测试盒、鸡肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析测试盒、鸡干扰素γ（IFN-γ）酶联免疫分析测试盒，IBL分装产品。

1.2 方法

1.2.1 试验动物分组

选1日龄健康雏鸡240只公母各半，在1日龄腹腔注射MD血毒0.5 ml/只。随机分为4组，每组3个重复，其中Ⅰ组为攻毒对照组，饲喂基础日粮，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组为试验组，分别饲喂1%添加的中药复方制剂一、中药复方制剂二和中药复方制剂三的基础日粮。

1.2.2 样品的采集

在雏鸡21日龄、35日龄和42日龄，每组随机选择20只雏鸡，取血分离血清，-80℃冰箱保存备用。

1.2.3 测定方法

血清总超氧化物歧化酶（T-SOD）的测定，采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力，波长550 nm，结果以每毫升反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位（U）。血清丙二醛（MDA）的测定，采用硫代巴比妥（TBA）光电比色法，波长532 nm检测。血清中白细胞介素-2（IL-2）、干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）等水平的测定，采用双抗体夹心ELISA法，标准曲线法计算样品中IL-2、IFN-γ、TNF-α浓度。

1.2.4 数据处理

数据采用SPSS 17.0统计处理软件的One-Way ANOVA法进行方差分析，用DUNCANS法进行多重比较分析。

2 结果与分析

2.1 中药复方制剂对雏鸡发病率和死亡率的影响（见表1）

表1 人工感染MDV雏鸡的发病率与死亡率统计

由表1可知，检测结果表明攻毒对照组雏鸡发病率高达87.9%，死亡率为21.2%。饲料中添加了中药复方制剂，各组雏鸡的发病率和死亡率均比对照组降低了，其中中药复方制剂Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的发病率分别比对照组降低了17.29%、41.41%和55.17%，死亡率分别降低了42.92%、57.07%和71.22%，其中以中药复方制剂三效果最佳。

2.2血清中T-SOD、MDA的检测结果与分析

2.2.1 T-SOD活性的检测结果与分析（见表2）

表2 雏鸡血清中T-SOD活力的测定结果与分析(U/ml)

由表2可知，在21、35、42日龄，各试验组鸡血清T-SOD活力显著（P＜0.05）或极显著高于对照组（P＜0.01）；试验Ⅲ组和Ⅳ组雏鸡血清T-SOD活力显著高于试验Ⅱ组（P＜0.05），而试验Ⅲ组和Ⅳ组间差异不显著（P＞0.05）。研究结果表明中药复方制剂能够通过提高血清中T-SOD的活力，而增强对氧自由基清除能力，保护细胞免受损伤。且中药复方制剂二和三效果显著优于复方制剂一。

2.2.2 MDA指标（见表3）

表3 雏鸡血清中MDA含量测定与分析结果(nmol/ml)

由表3可知，在21、35、42日龄的各试验组雏鸡血清MDA含量均显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）低于对照组，其中各日龄时期试验Ⅳ组雏鸡血清MDA含量显著低于试验Ⅱ组（P＜0.05），而试验Ⅲ组和Ⅳ组间差异不显著（P＞0.05）。添加中药复方各组MDA含量降低，机体内脂质过氧化物的产生量明显降低，说明中药复方制剂不仅促进机体对自由基的清除能力，同时通过减少机体内自由基的产生，发挥良好的抗氧化效应。

2.3 IFN-γ检测结果与分析（见表4）

由表4可知，与对照组相比，各日龄试验组雏鸡血清中IFN-γ含量显著（P＜0.05）或极显著高于对照组（P＜0.01），各日龄的试验Ⅳ组雏鸡血清中IFN-γ含量显著高于其它试验组（P＜0.05）。说明日粮中添加中药复方制剂，可以提高雏鸡血清中IFN-γ含量，从而提高了免疫细胞的活性和抗肿瘤能力，增强了机体免疫功能，且中药复方制剂三作用效果最佳。

表4 雏鸡血清中IFN-γ含量测定结果(pg/ml)

2.4 IL-2检测结果与分析（见表5）

表5 雏鸡血清中IL-2含量测定结果与分析(ng/ml)

由表5可知，各日龄的试验Ⅲ组和Ⅳ组雏鸡血清中IL-2含量显著（P＜0.05）或及极显著高于对照组（P＜0.01），结果表明中药复方制剂在雏鸡育雏阶段能提高雏鸡血清中IL-2含量，增强机体抗病毒感染的细胞免疫功能。且复方中药制剂三组雏鸡血清中IL-2含量随着日龄的增加而逐渐增加，作用效果最优。

2.5 TNF-α检测结果与分析（见表6）

由表6可知，各日龄的试验Ⅲ组及Ⅳ组雏鸡血清中TNF-α含量与对照组相比差异显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）。研究结果表明日粮中添加中药复方制剂二和三均可提高雏鸡血清中TNF-α含量，调节体液免疫与细胞免疫，且在整个实验阶段均具有显著作用效果。

表6 雏鸡血清中TNF-α含量测定结果(ng/ml)

总之，通过日粮中添加中药复方制剂，可通过增强机体的抗氧化功能和调节机体的体液免疫与细胞免疫功能，增强机体的抗病毒感染能力，在一定程度上保护机体组织细胞免受损伤，提高了雏鸡的成活率，且中药复方制剂三作用效果优于其他制剂。

3 讨论

3.1 中药复方制剂对雏鸡抗氧化能力的影响

血清中T-SOD活性代表了机体抗氧化水平，能清除氧自由基等，对组织细胞损伤有一定的保护作用。检测蛋雏鸡血清中MDA含量和T-SOD活性可以反映机体的氧化和抗氧化水平。有研究发现茯苓皮三萜对小鼠肝脂质过氧化产生的丙二醛有较好的清除效果[12]。本试验中药复方制剂中具有茯苓等成分，可提高雏鸡血清中T-SOD活性，降低血清中MDA含量，对提高雏鸡抗氧化水平、保护机体免受损伤具有很好的作用效果。

3.2 中药复方制剂对雏鸡细胞因子水平的影响及其意义

IL-2是白细胞介素家族中的重要成员之一，在体内主要由Th1细胞分泌，是T细胞在体外长期生长所必需的因子，参与炎症反应、抗肿瘤效应和移植排斥反应，是衡量机体免疫功能，尤其是细胞免疫水平的一个重要指标。本试验中饲喂添加中药复方的各组雏鸡血清中IL-2均比单独饲喂基础日粮组的高，提高了机体免疫功能，这与其他人研究结果吻合[13]。

IFN-γ主要由Th1CD4+细胞和吞噬细胞产生，在体内具有一系列的生物学效应，包括抗病毒、抗肿瘤、激活巨噬细胞使其杀伤肿瘤细胞，增强NK细胞活性、诱导B细胞分泌免疫球蛋白并促进B细胞成熟和增殖等，具有重要的免疫学作用[14-15]。TNF-α是由T、B淋巴细胞分泌的具有多种生物活性的多肽细胞因子，具有强大的抗肿瘤作用，并且可以调节机体免疫功能。余建国等[16]研究发现银杏叶多糖促进雏鸡肿瘤坏死因子α和干扰素γ产生，这与本研究结果相一致。

4 结语

综上所述，本研究结果表明在蛋雏鸡日粮中添加以茯苓、白术等中药为主的复方制剂一、复方二和复方三均可以提高机体的抗氧化水平，调节机体免疫机能，提高育雏阶段雏鸡的健康水平，且中药复方二和中药复方三比中药复方一更为有效，以中药复方制剂三作用效果最优。中草药复方作为一类新型功能性饲料添加剂，具有替代或部分饲用抗生素的使用的潜能，其可通过对畜禽生长性能、机体免疫力的提升及对肠道菌群的改善调控作用而备受关注。同时中药作为饲料添加剂使用，取之自然还以自然，具有无毒、无抗性产生、自然环保和提高动物性食品的安全性等优点，值得深入研究和开发。然而中药的成分复杂，作用机制多样，要想有效合理利用在养殖业中，还需要进一步深入的研究。