霉变饲料中添加复合霉菌毒素吸附剂对肉鸡抗氧化和免疫功能的影响

2015-01-21张瑞星宋明明

饲料工业 2015年9期

■张瑞星黄凯宋明明徐丹王赫

（青岛农业大学动物科技学院，山东青岛 266109）

霉菌毒素是霉菌在生长繁殖过程中产生的有毒次级代谢产物，霉菌毒素广泛存在于饲料及饲料原料中，对人和动物健康产生了极大的威胁。霉菌毒素对动物的损害主要是免疫毒性、神经毒性、氧化损伤以及器官毒性等[1]，有些霉菌毒素具有很强的致畸、致癌、致突变作用[2-3]。Cast等[4]的调查结果显示，近几年饲料中黄曲霉毒素B1（aflatoxinB1，AFB1）的污染情况并未减轻，而烟曲霉毒素B1（umitremorginB1，FB1）、呕吐毒素（vomitoxin，DON）、玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）的检出率和超标率均有增高趋势。因此饲料及原料去霉问题亟待解决，吸附剂法是目前去除霉菌毒素最行之有效的一种方法，现在常用的吸附剂有膨润土、酵母细胞壁和酯化葡甘露聚糖（ esterification of glucomannan，EGM）等，但是各种吸附剂都有自己的优点和缺点，复合霉菌毒素吸附剂是把几种吸附剂按比例配合在一起，通过体外吸附试验筛选最优组合来达到理想的吸附效果。本试验旨在利用本实验室研制的复合霉菌毒素吸附剂（主要成分为膨润土、酵母细胞壁、酯化葡甘露聚糖）对肉鸡的保护作用，为其在实际生产中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物与处理

选取60羽1日龄的AA肉公雏鸡，随机分为3组，每组20羽，设4个重复，每个重复5羽。第1组为对照组，饲喂基础日粮；第2组为霉变饲料组，饲喂霉变饲料；第3组为霉变饲料+复方霉菌毒素吸附剂组，在霉变饲料中添加0.2%复合霉菌毒素吸附剂。

1.2 基础日粮和霉变饲料

基础日粮购自某饲料公司。把基础日粮置于阴暗潮湿处使其自然霉变，对照组和霉变饲料饲喂前都添加0.15%的丙酸钙抑制霉菌生长，添加诱食剂促进采食。在正式试验前用酶联免疫吸附法测定霉变饲料中AFB1、FB1、ZEN、DON的含量。见表1。

表1 试验饲料中霉菌毒素含量

1.3 饲养管理

试验鸡均笼养，自由采食、饮水，按照肉鸡饲养标准进行饲养。

7日龄，新城疫Ⅳ系、传支H120二联冻干苗，双倍点眼滴鼻免疫；新城疫、禽流感二联油苗，注射免疫。13日龄，禽传染性法氏囊疫苗，双倍饮水免疫；21日龄，新城疫Ⅳ系疫苗，双倍饮水。预试期7 d，正式试验期35 d。

1.4 试验仪器设备

MK3型酶标仪（赛默飞世尔仪器有限公司）；TDL-5型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）。

1.5 药品和试剂

复合霉菌毒素吸附剂由青岛农业大学动物营养代谢病与中毒病实验室研制；谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）、总抗氧化能力（T-AOC）、羟自由基（·OH）、丙二醛（MDA）、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-12（IL-12）等检测试剂盒购自南京建成生物工程有限公司；ZEN、DON、FB1、和 AFB1、鸡新城疫抗体、鸡传染性法氏囊抗体和禽流感抗体ELISA检测试剂盒购自上海劲马生物科技有限公司。

1.6 检测指标及方法

1.6.1 血浆生化指标检测

试验至42 d，每重复组随机扑杀3羽鸡，翅下采血，3 000 r/min离心取血浆。检测血浆中AST、ALT、SOD活性，MDA、·OH、T-AOC含量。

1.6.2 血浆细胞因子检测

试验至42 d，酶联免疫吸附法检测血浆中干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-12（IL-12）的含量。

1.6.3 血浆中IBDV、H9N1V和NDV抗体水平的检测

试验至42 d，酶联免疫吸附法检测血浆中IBDV、H9N1V和NDV抗体水平。

1.7 数据统计分析

采用SPSS17.0统计软件进行单因素方差分析（one-way ANOVA）和最小显著差异（least significant difference,LSD）检验法对数据进行多重比较，结果用Xˉ±SD表示。

2 结果与分析

2.1 霉变饲料中添加复合霉菌毒素吸附剂对肉鸡血浆生化指标的影响（见表2）

表2 霉变饲料中添加复合霉菌毒素吸附剂对肉鸡血浆生化指标的影响

试验至42 d，第3组SOD活性与第1、第2组差异不显著（P＞0.05），第2组显著低于第1组（P＜0.05）。第3组MDA含量显著低于第2组（P＜0.05），第3组和第1组差异不显著（P＞0.05）。第3组·OH活性显著低于第2组（P＜0.05），第3组显著高于第1组（P＜0.05）。第3组ALT活性显著低于第2组（P＜0.05），第3组和第1组差异不显著（P＞0.05）。第3组AST活性显著低于第2组（P＜0.05），第3组和第1组差异不显著（P＞0.05）。

2.2 霉变饲料中添加复合霉菌毒素吸附剂对肉鸡血浆中细胞因子的影响（见表3）

表3 霉变饲料中添加复合霉菌毒素吸附剂对肉鸡血浆中细胞因子的影响

试验至42 d，第3组IFN-γ的含量显著高于第2组（P＜0.05），第3组显著低于第1组（P＜0.05）。第3组IL-2的含量显著高于第2组（P＜0.05），第3组和第1组差异不显著（P＞0.05）。第3组IL-4的含量和第1、第2组差异不显著（P＞0.05），第2组显著低于第 1组（P＜0.05）。第 3组 IL-12的含量和第 1、第2组差异不显著（P＞0.05），第2组显著低于第1组（P＜0.05）。

2.3 霉变饲料中添加复合霉菌毒素吸附剂对肉鸡血浆中IBDV、H9N1V和NDV抗体水平的影响（见表4）

表4 霉变饲料中添加复合霉菌毒素吸附剂对肉鸡42 d血浆中疫苗免疫抗体的影响

试验至42 d，第3组H9N1-Ab含量和第1、第2组差异不显著（P＞0.05），第2组显著低于第1组（P＜0.05）。第3组IBDV-Ab含量显著低于第2组（P＜0.05），第3组和第1组差异不显著（P＞0.05）。第3组NDV-Ab含量显著高于第1、第2组（P＜0.05），第2组显著低于第1组（P＜0.05）。

3 讨论

霉菌毒素危害动物健康的主要病理学基础为氧化损伤。SOD和MDA是反映机体抗氧化能力的重要指标。Kouadio等[5]报道，DON和ZEN能阻断鞘磷脂代谢，使细胞MDA产生增加，导致脂质过氧化。Abel等[6]报道FB1可以诱导细胞产生自由基，从而导致氧化损伤。本试验结果显示添加复合霉菌毒素吸附剂组MDA含量和·OH、AST、ALT活性显著低于霉变饲料组。李华等[7]、马小明等[8]、付学锋等[9]发现，在添加T-2、DON、ZEN的小鼠饲料中添加0.1%酯化葡甘露聚糖（EGM）可以显著扭转霉菌毒素对小鼠的氧化损伤。王留等[10]报道，在猪的日粮中添加0.1%～0.2%霉菌毒素吸附剂能够消除黄曲霉毒素对生长育肥猪生产性能的影响，使猪血浆丙二醛（MDA）的含量降低，并显著提高血浆超氧化物歧化酶（SOD）活性和总抗氧化能力（T-AOC），从而减轻霉菌毒素对机体的氧化损伤。ALT和AST是反映肝脏有无损伤的重要指标。何学军等[11]研究表明，与霉变饲料组相比，霉变饲料中添加由葡甘露聚糖和膨润土组成的复合吸附剂能显著提高血浆中SOD活性，降低AST和ALT活性。由此可以看出复合霉菌毒素吸附剂可以扭转霉菌毒素对肉鸡的氧化损伤以及对肝脏的损伤。

霉菌毒素对动物的毒性除了氧化损伤外，另一方面就是免疫毒性。本试验发现霉菌毒素能显著降低IFN-γ、IL-2、NDV-Ab的含量，而添加复合霉菌毒素吸附剂则能使其显著升高。李振等[12]发现在霉变饲料中添加0.2%酵母细胞壁吸附剂，可显著提高IL-6和IFN-γ mRNA相对表达量。Ibrahim等[13]研究表明，肉鸡饲料中分别添加钠基膨润土能有效地改善黄曲霉毒素对肉鸡细胞吞噬功能和促进新城疫抗体的形成。李振等[12]发现在霉变饲料中添加0.2%酵母细胞壁吸附剂，能显著提高新城疫抗体滴度水平。付双喜等[14]在肉鸡饲料中分别添加水合硅铝酸钠钙和0.05%的EGM，发现肉鸡NDV抗体滴度增加了27.24%和76.34%。由此可以看出复合霉菌毒素吸附剂可有效缓解霉菌毒素对肉鸡的免疫毒性，维持疫苗抗体水平。