RP－HPLC法测定藤黄果原料中羟基柠檬酸的含量

惠战锋，肖 红，惠玉虎，王新萍，杨军仁（陕西嘉禾植物化工有限责任公司，西安 710086）

RP－HPLC法测定藤黄果原料中羟基柠檬酸的含量

惠战锋，肖 红，惠玉虎，王新萍，杨军仁（陕西嘉禾植物化工有限责任公司，西安 710086）

目的 建立藤黄果原料中羟基柠檬酸的HPLC测定方法。方法 色谱柱Agilent TC－C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为0.05mol·L－1的无水硫酸钠水溶液（用硫酸调节pH为2.3）；检测波长210nm；进样量10μL；体积流量1.0mL·min－1；柱温30℃。结果 羟基柠檬酸的线性范围为0.209 9～2.099 0μg，r＝0.999 9（n＝6），平均回收率99.2%，RSD为0.5%。结论 该方法简单、准确、重复性好，可用于藤黄果原料中羟基柠檬酸的定量测定。

藤黄果；羟基柠檬酸；HPLC

藤黄果（Garcinia cambogia）是双子叶植物纲藤黄科的一种乔木，又名马拉巴罗望子，其果实和植物树种同名，主要分布在印度、马来西亚等东南亚地区［1］。藤黄果主要化学成分是天然的有机酸羟基柠檬酸。羟基柠檬酸在抑制脂肪合成、控制食欲和减肥方面具有良好功效，目前在欧美国家被广泛用于减肥保健食品［2－3］。本文采用RP－HPLC法测定藤黄果原料中羟基柠檬酸的含量［4］，也可以适用于藤黄果提取物中羟基柠檬酸的含量测定，方法简便、准确、重复性好。

1 仪器与试药

1.1 仪器 美国Dionex Ultimate3 000高效液相色谱仪（包括四元梯度泵、自动进样器、紫外检测器）；BP211D电子分析天平（德国Sartorius公司）；KQ250D超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药 羟基柠檬酸钙对照品（和光纯药工业株式会社，质量分数大于98%）；藤黄果原料由陕西嘉禾植物化工有限责任公司研发部提供；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent TC－C18（250mm× 4.6mm，5μm）；流动相：0.05mol·L－1无水硫酸钠水溶液（用硫酸调节pH为2.3）；体积流量为1.0mL·min－1；检测波长：210nm；柱温：30℃；进样量：10μL。在上述色谱条件下，理论板数以羟基柠檬酸峰计不低于3 000，结果见图1。

图1 HPLC图A.对照品；B.藤黄果；1.羟基柠檬酸Fig.1 HPLC chromatogramsA.reference substances；B.Garcinia cambogia；1.hydroxycitric acid

2.2 对照品溶液的制备 精密称取羟基柠檬酸钙对照品适量，置于50mL量瓶中，加30mL·L－1磷酸，超声溶解20min，放置至室温，用30mL·L－1磷酸稀释至刻度，摇匀，制成含羟基柠檬酸0.419 8mg·mL－1的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取藤黄果原料约0.05g，精密称定，置于50mL量瓶中，加30mL·L－1磷酸约40mL，超声提取60min（功率250W，频率40kHz），取出，放冷，用30mL·L－1磷酸稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察 精密吸取2.2项下的对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0和5.0mL，分别置于10mL量瓶中，用30mL·L－1磷酸定容至刻度，摇匀，各取10μL进样，按2.1项下的色谱条件进行测定，以羟基柠檬酸进样量（μg）为横坐标（X），以峰面积积分值为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程：Y＝1.298 X－0.021，r＝0.999 9，结果表明，羟基柠檬酸进样量在0.209 9～2.099μg范围内线性良好。

2.5 精密度实验 精密吸取2.2项下对照品溶液3.0mL，置于10mL量瓶中，用30mL·L－1磷酸定容至刻度，摇匀，连续进样6次，测定羟基柠檬酸峰面积，结果羟基柠檬酸峰面积的RSD为0.12%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性实验 精密称取同一批藤黄果原料样品6份，分别按2.3项下制备供试品溶液，测定羟基柠檬酸的平均质量分数16.28%，RSD为1.32%，表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性实验 取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6和8h进样，测定峰面积，结果羟基柠檬酸峰面积的RSD为0.98%，表明供试品溶液在8h内稳定。

2.8 加样回收率实验 称取已知含量的藤黄果样品（羟基柠檬酸含量为16.28%）9份各0.03g，3份为1组，分别加入羟基柠檬酸对照品5，6和7mg，再照供试品溶液同法制备，按2.1色谱条件进行测定，结果羟基柠檬酸平均回收率为99.2%，RSD为0.5%。

2.9 样品测定 取3批样品，按照2.3项下方法制备供试品溶液，测定峰面积，结果3批样品中羟基柠檬酸的含量分别为16.28%，16.31%和16.68%。

3 结论

在样品提取过程中，比较了3种不同提取溶剂（水、1mL·L－1盐酸［5］、30mL·L－1磷酸），结果表明，30mL·L－1磷酸提取效果远远高于其他2种取溶剂，因此，选择30mL·L－1磷酸作为提取溶剂；以30mL·L－1磷酸为提取溶剂，比较超声提取法［6］和加热回流提取法，因加热回流提取羟基柠檬酸受热分解，导致含量偏低，因此，用超声提取法，且超声提取法简单、实用。

本方法准确、重复性好，适用于藤黄果原料和提取物中羟基柠檬酸的含量测定。

［1］汪开治.减肥食品新秀——藤黄果［J］.植物杂志，1995，10（5）：9.

［2］张波.羟基柠檬酸功能性食品液相色谱检测［D］.天津，天津大学，2012.

［3］袁尔冬.功效活性成分——羟基柠檬酸的研究进展［J］.四川食品与发酵，2006，42（2）：19－23.

［4］李兰英，许丽，丁敏，等.HPLC检测功能食品中羟基柠檬酸主成分和两种非法添加药物［J］.食品安全质量检测学报，2012，3（1）：10－16.

［5］印度药典2010版［S］.三部.2010：2499.

［6］万水昌，王志祥，乐龙，等.超声提取技术在中药及其天然产物提取中的应用［J］.西北药学杂志，2008，23（1）：60－62.

Determination of hydroxycitric acid in Garcinia cambogia by RP－HPLC

HUI Zhanfeng，XIAO Hong，HUI Yuhu，WANG Xinping，YANG Junren（Shaanxi Jiahe Phytochem Limited Company，Xi′an 710086，China）

Objective To establish an HPLC method for the determination of hydroxycitric acid in Garcinia cambogia.Methods The analysis was performed on a Agilent TC－C18（250mm×4.6mm，5μm）column with 0.05mol·L－1sodium sulfate solution（adjusted pH to 2.3with sulfuric acid）as the mobile phase.The flow rate was 1.0mL·min－1，the detection wavelength was 210 nm，the injection volume was 10μL，and the column temperature was 30℃.Results The calibration curve was linear within the range of 0.209 9－2.099 0μg（r＝0.999 9，n＝6），and the average recovery was 99.2%，RSD 0.5%.Conclusion The method was simple，accurate，and with good reproducibility.It could be used for the determination of hydroxycitric acid in Garcinia cambogia.

Garcinia cambogia；hydroxycitric acid；HPLC

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.04.014

R282

A

1004－2407（2015）04－0371－02

2014－11－24）