天麻钩藤饮不同剂型对挥发性成分的影响

林 杰， 卢金清， 江汉美， 屠 寒， 许俊洁， 万丽娟， 郭胜男

（湖北中医药大学/湖北省药用植物研发中心，湖北武汉430065）

天麻钩藤饮不同剂型对挥发性成分的影响

林 杰， 卢金清*， 江汉美， 屠 寒， 许俊洁， 万丽娟， 郭胜男

（湖北中医药大学/湖北省药用植物研发中心，湖北武汉430065）

目的研究天麻钩藤饮中的挥发性成分与剂型之间的关系。方法采用顶空固相微萃取和HS-SPME-GC-MS法对天麻钩藤饮的粉剂，颗粒剂和分煎颗粒剂的挥发性成分进行对比分析。结果从粉剂中检测出挥发性成分98种，鉴定出52种，占挥发性成分总量的70.88%，含有量最高的为萜品烯，较高的成分有p-伞花烃、芳樟醇、α-蒎烯和1-石竹烯；从市售颗粒剂中检测出挥发性成分35种，鉴定了22种，占挥发性成分总量的90.82%，含有量较高的成分有棕榈酸、猕猴桃内酯、二十六烷和二十八烷；从分煎颗粒剂中检测出挥发性成分24种，鉴定了17种，占挥发性成分总量的84.85%，含有量较高的成分有邻苯二甲酸、苯乙酮、苄叉丙酮和避蚊酯。结论与粉剂相比，天麻钩藤饮颗粒剂和分煎颗粒剂的挥发性成分有损失，是否影响治疗自闭症的疗效须进一步研究。

天麻钩藤饮；不同剂型；挥发性成分；自闭症；顶空固相微萃取

天麻钩藤饮出自 《中医内科杂病证治新义》 由天麻、钩藤、石决明、山栀、黄芩、川牛膝、杜仲、益母草、桑寄生、首乌藤、茯神等11味中药组成，包括汤剂和颗粒剂。《中国药典》2010年版一部收载有天麻钩藤颗粒 （天麻、钩藤、石决明、栀子、黄芩、牛膝、盐杜仲、益母草、桑寄生、首乌藤、茯苓），具有平肝熄风、清热安神的功效，用于肝阳上亢引起的失眠、头痛等［1］。自闭症又称孤独症，患儿常表现为言语发育障碍、社会交往困难、兴趣范围狭窄和行为重复刻板的典型症状，常伴有睡眠障碍、胃肠道疾病及癫痫等［2-4］。兰生荣［5］用天麻钩藤饮结合足底按摩治疗自闭症合并睡眠障碍，治疗一周后患儿症状得到很好的改善。该复方中的山栀、钩藤、黄芩、牛膝、益母草、桑寄生都含有挥发性成分，且其中有很多对自闭症及相关症状都有较好的疗效。钩藤［6］中含有的石竹烯具有抗焦虑、抗抑郁、抗炎及祛痰的作用。山栀中的芳樟醇对中枢神经系统有重要作用，具有提高睡眠质量、抗惊厥、抗抑郁、提高记忆功能等多种作用［7］。此外，山栀子还可保肝利胆、治疗黄疸型肝炎［8］。但是无论是汤剂还是颗粒剂都不能将复方中的挥发性成分很好的加以利用。因此，研究天麻钩藤饮中的挥发性成分对充分利用这一复方制剂以及选择合理的剂型提供了实验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent6890/5973型气相-质谱联用仪（美国Hewlett-Packard公司）；手动顶空固相微萃取装置（德国IKA公司）；65μMPDMS/DVB萃取纤维头 （美国 Supelco公司）；顶空瓶（5 mL）；电子天平 （北京赛多利斯仪器系统有限公司）；电子调温电热套 （天津市泰斯特仪器有限公司）；RE-52AA旋转蒸发仪 （上海亚荣生化仪器厂）。

1.2 材料 天麻、钩藤、石决明、山栀子、黄芩、川牛膝、杜仲、益母草、桑寄生、首乌藤、茯神（药材均来源于武汉金药堂大药房），以上药材均经过湖北中医药大学生药教研室张秀桥教授鉴定，符合 《中国药典》2010年版项下标准。另购买按《中国药典》方法制得的天麻钩藤颗粒 （以下简称颗粒剂1），及按分煎制得的天麻钩藤颗粒 （以下简称颗粒剂2）。

2 方法与结果

2.1 顶空固相微萃取条件

2.1.1 复方原药材粉末 按照复方比例称取处方量中药，经粉碎后混合均匀。经过对取样量、萃取温度、平衡时间、萃取时间、解吸附时间等因素进行考察，得出了最佳的固相微萃取条件：即取0.3 g复方粉末置于5 ML顶空瓶中，插入装有65μMPDMS/DVB纤维头的手动进样器，90℃下预平衡15 min，萃取15 min，取出，立即插入气相色谱仪进样口中，解吸5 min，进行GC-MS分析。2.1.2 颗粒剂 分别称取颗粒剂1及颗粒剂2各0.3 g，按“2.1.1”项下的HS-SPME条件进行萃取，随后进行GC-MS分析。

2.2 GC-MS条件

2.2.1 GC条件 HP-5MS色谱柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）弹性石英毛细管柱，进样口温度为250℃，载气为高纯氦气 （99.999%），体积流量1.0 mL/min，不分流进样。经过反复摸索最终确定原药材粉末的程序升温为：初始温度为65℃，保留10 min，以5℃/min升温至175℃；颗粒剂的程序升温为：初始温度为65℃，以5℃/min升温至180℃，溶剂延迟3 min。

2.2.2 MS条件 离子源为EI源；离子源温度230℃；四级杆温度150℃；电子能量70 eV；倍增管电压1.2 kV；接口温度280℃；质量范围35～550 m/z。

2.3 结果 采用GC-MS计算机联用仪分析复方中挥发性化学成分，经化学工作站数据处理系统及用面积归一化法从其总离子流图中计算了各组分的相对百分含有量，按各峰的质谱图，并结合NIST05谱库对化学成分进行检索鉴定。

采用HS-SPME法从复方原药材粉末中检测出挥发性成分98种，鉴定出52种，占挥发性成分总量的70.88%，主要包括烯烃类、醇类、醛类、酮类等。其中含有量最高的为萜品烯 （15.54%），含有量较高的成分还有p-伞花烃 （9.86%）、芳樟醇 （4.20%）、蒎 烯 （4.15%）、1-石 竹 烯（4.13%）等。从颗粒剂1中检测出挥发性成分35种，鉴定出22种，占挥发性成分总量的90.82%，其中含有量较高的成分有棕榈酸 （28.41%）、猕猴桃内酯 （9.60%）、三十六烷 （8.77%）、三十八烷 （7.63%）等。颗粒剂2中检测出挥发性成分24种，鉴定出17种，占挥发性成分总量的84.85%，其中含有量较高的成分有邻苯二甲酸（14.56%）、苯乙酮 （11.84%）、苄叉丙酮（9.57%）、避蚊酯 （8.88%）等。经对比发现，不同剂型的挥发性成分有很大差异。具体结果见图1、图2、图3及表1、表2。

图1 HS-SPME-GC-MS分析复方原药材粉末挥发性成分TIC图Fig.1 HS-SPME-GC-MS analysis of volatile coMponents in compound raw material powder

图2 HS-SPME-GC-MS分析颗粒剂1挥发性成分TIC图Fig.2 HS-SPME-GC-MS analysis of volatilecoMponents in granule 1

图3 HS-SPME-GC-MS分析颗粒剂2挥发性成分TIC图Fig.3 HS-SPME-GC-MS analysis of volatilecomponents in granule2

3 讨论

天麻钩藤饮具有平肝潜阳、补益肝肾、清热活血功效，临床应用广泛。近年来，不少医家从辨证论治出发，运用天麻钩藤饮治疗高血压病、癫痫、脑血管意外、颈椎病、美尼尔氏综合征等众多疾病，取得一定疗效［9］。随着人们对儿童自闭症的高度关注，天麻钩藤饮对自闭症及其相关症状的治疗进入人们的视野。西医对自闭症的关注主要集中在免疫功能低下、炎症、神经递质功能紊乱、氧化应激、有毒暴露和受损的排毒、慢性感染、过敏、全身代谢紊乱、营养障碍、感觉异常、植物神经功能紊乱、线粒体功能障碍等。但目前西医尚无有效治疗自闭症的相关药物，主要是一些抗精神病药、抗癫痫药等，且都伴随着一定的不良反应，部分药物还具有依赖性。天麻钩藤饮中含有的挥发性物质大都具有镇静安神、抗惊厥等作用，为其治疗自闭症及其相关症状奠定了物质基础。

表1 复方原药材粉末挥发性成分Tab.1 Volatile components in coMpound raw material powder

天麻钩藤饮中的山栀、钩藤、益母草、桑寄生等含有较多的挥发性成分。研究表明［10］，芳樟醇具有明显的镇静作用，其对中枢神经系统，包括睡眠、抗惊厥、降体温等，有随着剂量而增强的现象。萜品烯［11］具有抗菌、平喘、止咳、祛痰等作用。p-伞花烃［12］具有利胆、抗菌等作用。蒎烯［13］有较强的抗炎和祛痰作用。石竹烯［14］具有很强的镇定、强化免疫调节等功效，还具有平喘、镇咳、消炎作用。

由实验结果可知，按 《中国药典》法生产的颗粒剂1中的有效挥发性成分仅剩棕榈酸和亚油酸，而按分煎法制得的颗粒剂2中的有效挥发性成分全部丢失。由此可知 《中国药典》收载的颗粒剂的制法是有一定的科学依据的，但仍有不足之处。虽然两种颗粒剂相比复方原药材粉末产生了较多其他新的物质，但这些新的物质大多没有药理活性。根据 《中国药典》中天麻钩藤颗粒的制备方法可知，除天麻未经煎煮外，其余挥发性物质均在制备过程中损失，没有得到利用。故在选择剂型时可改变需煎煮过程的汤剂和颗粒剂等剂型。将其制成散剂、丸剂等则能够充分利用其中有效的挥发性化学成分，不仅能够增加药物疗效，还能简化制备工艺，节约成本。

［1］国家药典委员会，中华人民共和国药典：2010年版一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：519.

［2］李小钧，刘 靖，吴宝铮.孤独症谱系障碍共患睡眠障碍研究进展［J］.中国实用儿科杂志，2013，28（2）：147-149.

［3］李素水，王 霞，孙志刚，等.孤独症谱系障碍伴发癫痫的病理假说［J］.国际精神病学杂志，2014，41（1）：38-40.

［4］郭德华，聂云霞，杨广学.自闭症儿童肠胃道问题及护理策略［J］.中国妇幼保健，2013，28（2）：374-379.

［5］兰生荣.孤独症儿童睡眠障碍的中药及足底按摩综合治疗［J］.中国卫生产业，2012，8（1）：167.

［6］谭穗懿，杨旭锐，杨 洁，等.青果挥发油化学成分的GCMS分析［J］.中药材，2008，31（6）：842-844.

［7］潘晓岚.三种芳香植物精油香气对缓解焦虑作用的研究［D］.上海交通大学，2009.

［8］张学兰，孙秀梅，刘玉荣.栀子不同炮制品护肝作用比较研究［J］.中成药，1996，18（2）：18-19.

［9］于 泽，冼绍祥，赵立诚.天麻钩藤饮临床应用研究进展［J］.新中医，2003，35（4）：70-72.

［10］林翔云.天然芳樟醇与合成芳樟醇［J］.化学工程与装备，2008，7（7）：21-26.

［11］孙卫军，林观样.浙江产吴茱萸果实挥发油化学成分研究［J］.医药导报，2010，29（11）：1432-1435.

［12］孙文基，绳金房.天然活性成分简明手册［M］.北京：中国医药科技出版社，1998：410，421.

［13］李 竣，卢金清.金菊花挥发油化学成分的GC-MS分析［J］.中药材，2001，4（9）：642.

［14］李 娟.侧柏和油松挥发物动态变化规律研究［D］.北京：中国林业科学研究院，2009.

Preparations of Tianma Gouteng Prescription affect the contents of volatile constituents

LIN Jie， LU Jin-qing*， JIANG Han-mei， TU Han， XU Jun-jie， WAN Li-juan， GUO Sheng-nan
（Hubei University of Chinese Medicine/Research and Development Center of Medicinal Plant in Hubei Province，Wuhan 430065，China）

AIMTo study the connection between volatile components and preparations in Tianma Gouteng Prescription（TGP）.METHODSHeadspace solid phaseMicro-extraction（HS-SPME）combined with gas chromatography and mass spectrometry（GC-MS）were used to the analysis of volatile components in different preparations.RESULTSNinety constituents were detected in TGP powder by HS-SPME-GC-MS，fifty-two constituents of which were identified and accounted for 70.88%of the total volatile constituents.Among the contents of all constituents，carene occupied first place，p-cymol，linalool，α-pinene，and caryophyllene came the second.Thirty components were detected in commercial TGP granulesmade according to pharmacopoeiamethod，thirty-five constituents of which were identified and accounted for 90.82%of the total volatile components.Among all of the constituents containing higher contents were palmitic acid，dihydroactinolide，hexacosane，and octacosane.Twenty-four components were detected in separated-decocted granules，seventeen ofwhich were identified and accounted for 84.85%of the total volatile components.Among all of the constituents，containing higher contents were o-pathalic acid，acetophenone，trans-benzalacetone，and dimethyl phthalate.CONCLUSIONIn comparison with powder，TGP granules and separated-decocted granules lose the volatile components in part，further study is needed whether itwould affect the treatment for autism.

Tianma Gouteng Prescription（TGP）；preparations；volatile components；autism；HS-SPME

R927.2

：A

：1001-1528（2015）05-1005-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.05.017

2014-07-03

林 杰，女，硕士.主要从事中药及其天然药物活性成分的研究。Tel：18771102776，E-mail：linjiesl@163.com

*通信作者：卢金清，男，教授，主要从事中药及其天然药物活性成分的研究。Tel：（027）68890101，E-mail：ljq59169@sohu.com