探析利用“自上而下”方法对8项特种蛋白指标定量检测不确定度的评估

王雁勇，曹辉彩，蔡会欣，戴冬雪，马雅文

(保定市第一中心医院检验科，河北保定071000)

探析利用“自上而下”方法对8项特种蛋白指标定量检测不确定度的评估

王雁勇，曹辉彩，蔡会欣，戴冬雪，马雅文

(保定市第一中心医院检验科，河北保定071000)

目的通过分析8项特种蛋白指标定量检测不确定的评估，探析其价值与意义。方法收集本实验室2013年4月至9月共6个月的室内质量控制(简称室内质控)数据及2011年至2013年6次参加卫生部临床检验中心特种蛋白室间质量评价(简称室间质评)的结果，参照《医学实验室——测量不确定度的评定与表达》，采用“自上而下”方法评定免疫球蛋白(Ig)A、IgG、IgM、补体C3、补体C4、抗链球菌溶血素O(ASO)、类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)的相对测量不确定度(ucrel)和相对扩展测量不确定度(urel)。结果经统计发现，8项检测指标的urel存在明显的差异，C4的urel最大为16.01%，与美国临床实验室改进修正法案(CLIA'88)的允许总误差比较，除C4外，其它7项指标均处于允许范围之内。结论利用室内和室间质控数据，采用“自上而下”方法对免疫速率散射比浊法测定特种蛋白的测量不确定度的评价，方法简单、方便，能在进行测量不确定度评定的同时充分了解实验室检测系统分析性能，具有很好的临床应用价。

不确定度;评估;室内质量控制;室间质量评价;特种蛋白

测量不确定度是于20世纪60年代提出[1]，直到90年代其评定和表示方式才逐步得到公认[2]。测量不确定度是表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量准确度为负相关[3]。它是测量结果质量的指标。不确定度愈小，所述结果与被测量的真值愈接近，质量越高，水平越高，其使用价值越高;不确定度越大，测量结果的质量越低，水平越低，其使用价值也越低。在ISO17025文件中也明确提出检测实验室需要对结果的不确定度进行评估。

在2005年，王治国等[4]首次介绍了“自上而下”评定不确定度的方法。中国合格评定国家认可委员会(China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS)于2012年发表了以“自上而下”方法评定医学实验室不确定度的技术报告[5]。“自上而下”方法是在控制不确定度来源或程序的前提下评定测量不确定度，即运用统计学原理直接评定特定测量系统的受控结果的测量不确定度。典型方法是依据特定方案(正确度评估和校准方案)的试验数据、QC数据或方法验证试验数据进行评定，正确度/偏移(b)和精密度/实验室内复现性[s(Rw)]是两个主要的分量。“自上而下”方法评定测量不确定度是基于正确度和实验室内测量复现性进行测量不确定度评定的方法。对于常规医学实验室，“自上而下”评定测量不确定度的方法是经济、实用和可接受的方法。我们利用室内质量控制(简称室内质控)和室间质量评价(简称室间质评)数据，采用“自上而下”方法探析测量不确定度评估在8项特种蛋白指标定量检测中的应用。

材料和方法

一、仪器和试剂

IMMAGE 800特种蛋白分析仪及原装试剂、校准品、质控品由美国Beckman-Coulter公司提供。

二、数据来源

1.室内指控数据收集本实验室2013年4月至9月共6个月的室内质控数据，计算其靶值、标准差(s)和变异系数。

2.室间质控数据收集2011年至2013年6次参加卫生部临床检验中心特种蛋白室间质评的结果，取与室内质控中值水平接近的公认值(Ccons)、每个参加实验室的测量值(xi)及由全部能力验证(proficiency testing，PT)数据得出的测量复现性(SR)。

三、方法

1.批内重复性将特种蛋白的室内质控品重复测定20次，和临床标本一起测定，用双侧迪克逊检验法(P=95%)剔除离群值，计算其均值()、标准差(s)及批内变异系数(CVw)。

2.批间重复性统计2013年4月1日至9月30日6个月内每天检测的8项特种蛋白的室内质控数据，利用仪器绘制的质控图分别计算其、s及批间变异系数(CVb)。

3.方法偏倚(CVbias)的计算根据王治国等[4]建议的方法，收集本实验室2011年至2013年参加的卫生部临床检验中心8项特种蛋白6次室间质评结果。根据卫生部临床检验中心提供的靶值和本实验室的测定值，计算6次结果的百分偏差(dn%)及其均值(dm%)和标准差(sdr=，根据如下公式计算出

4.相对测量不确定度(ucrel)的计算(1)ucrel的计算公式为;(2)参照文献[6]建议的以6次PT结果数据作为评定测量不确定度的依据，即用PT数据作为由偏移引入的不确定度进行合成并进行计算，为此Nordtest提出一个新的术语“方法和实验室偏移”，符号为RMSbias。RMSrel(bias)=，公式中bias为单次PT的偏移量值，n为PT次数。urel(Cref)，其中urel(cons，i)=，式中RSDR，i为单次PT的相对测量复现性;m为参加单次PT的实验室数量。ucrel(bias)为偏移引入的相对测量不确定度分量，计算公式为。(3)实验室内测量复现性引入的相对测量不确定度分量urel(Rw)，计算公式为urel(Rw)=[s(Rw)/||]×100%，其中urel(Rw)=RSD(Rw);s(Rw)= u(Rw)。s(Rw)和RSD(Rw)分别为室内质控的标准差和变异系数。

5.相对扩展测量不确定度(urel)的计算对于95%的置信水平，包含因子k=2，urel=2×ucrel。

结果

一、8项特种蛋白室内质控的CVw和CVb见表1。

表1 8项特种蛋白室内质控的CVw和CVb结果

二、偏倚计算

以IgA为例，选择与室内质控最接近的值计算其偏倚，结果见表2。以同样的方法计算其它项目的偏倚。

表2 IgA室间质评信息

三、8项指标测量不确定度结果

以美国临床实验室改进修正案(CLIA'88)允许总误差(TEa)为质量目标，7项特种蛋白指标的不确定度均符合目标不确定度要求，外体C4不符合目标不确定度要求，见表3。

表3 8项特种蛋白指标测量不确定度结果

讨论

误差多数情况下是指测量误差，它的传统定义是测量结果与被测量真值之差。误差是客观存在的，它应该是一个确定的值。但由于在绝大多数情况下，真值是不知道的，所以真误差也无法准确知道。我们只是在特定的条件下寻求最佳的真值近似值，并称之为约定真值。因此可能确定的误差只是其估计值。经典的误差理论并不完全适用于医学检验的实际工作，并具有一定的不确定度。测量不确定度是目前对于误差分析最新的理解和阐述，是误差理论发展到一定程度的产物。测量不确定度无须对随机和系统误差进行分类，提供了一种包括测量真值在内的一组测量结果范围，表征被测量值的分散性，使检验结果质量的衡量成为可能，可行性更高，是与测量水平密切相关的参数。杨振华[7]认为可以考虑将经验方法评定测量不确定度应用到临床化学实验室。张晓红等[8-9]依据Nordtest准则，利用室内质控和室间质评数据评估临床生化检验中的测量不确定度。CNAS的技术报告也对Nordtest准则建议方法进行了详尽的说明。

本研究利用室内和室间数据对8项特种蛋白指标的不确定度进行了评估。结果显示，7项特种蛋白指标的不确定度均符合目标不确定度要求，外体C4不符合目标不确定度要求。分析其原因，外体C4不精密度和偏倚对合成不确定度的构成比分别为59.4%和70.4%。提示引起测量不确定度高的主要原因在于正确度较差，可以通过提高检测项目的准确性来降低RMSbias，减小其扩展不确定度。由此可见，不同的检测项目若要改进其扩展不确定度，需对分量贡献的大小进行质量改进。

本研究利用室内和室间质控数据对免疫速率散射比浊法检测8项特种蛋白指标的测量不确定度。在评估过程中我们发现，因为使用了6个月的室内质控数据和3年6次室间质控数据对各项指标的不确定度进行评定，所以能更真实地反映实验室每日检测的不确定度情况，最大化地找出不确定度潜在来源的概率。

综上所述，我们通过评估8项特种蛋白指标的不确定度，发现了影响扩展不确定度的主要因素，为改善临床检测质量提供科学的依据，确保检测结果的准确性。

[1]International Organization for Standardization.Guide to the expression of uncertainty in measurement[S].ISO，1995.

[2]KRISTIANSEN J.The guide to expression of uncertainty in measurement approach for estimating uncertainty:an appraisal[J].Clin Chem，2003，49 (11):1822-1829.

[3]FUENTEN-ARDERIU X.Uncertainty of measurement in clinical laboratory sciences[J].Clin Chem，2000，46(9):1437-1438.

[4]王治国，王薇，李小鹏.测量不确定度及其在临床检验中应用[J].中国卫生统计，2005，22(2):85-86.

[5]中国合格评定国家认可委员会.医学实验室-测量不确定度的评定与表达[S].2012.

[6]Nordtest.Handbook for calculation of measurement uncertainty in environmental laboratories[R].Espoo: Nordtest，2011.

[7]杨振华.用“经验办法”评定测量不确定度[J].中华检验医学杂志，2011，34(3):278-230.

[8]张晓红，鲁辛辛.依据Nordtest准则评估测量不确定度更适合于临床实验室[J].中华检验医学杂志，2012，35(5):404-406.

[9]张晓红，刘向炜，文江平，等.利用“室内质控和室间质评”数据评估临床生化检验中的测量不确定度[J].中华检验医学杂志，2012，35(5):457-462.

1673-8640(2015)07-0747-03

R446.1

A

10.3969/j.issn.1673-8640.2015.07.018

2014-12-26)

(本文编辑:龚晓霖)

王雁勇，1970年生，男，学士，副主任技师，从事临床生化、微生物检验工作。

蔡会欣，联系电话:0312-5976674。