复方中药对免疫抑制小鼠的免疫功能的影响研究

代永霞，马记平，高青

郑州澍青医学高等专科学校，河南郑州450064

复方中药对免疫抑制小鼠的免疫功能的影响研究

代永霞，马记平，高青

郑州澍青医学高等专科学校，河南郑州450064

目的 是探索复方中药（黄芪、当归和炙甘草）对免疫功能的影响与作用。方法选择小鼠50只，随机分为5组。按照复方中药的给药剂量依次分为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组、模型对照组。然后环磷酰胺抑制小鼠免疫功能制作免疫抑制模型，对实验及对照组小鼠给药，观察各组小鼠用药后的小鼠IgG、T淋巴细胞亚群CD4+和CD8+的测定、腹腔巨噬细胞吞噬能力的指数。结果对照组和中药组相比小鼠IgG、T淋巴细胞亚群CD4+和CD8+、腹腔巨噬细胞吞噬能力的指数差异有统计学意义（P＜0.01）。结论实验未能证实复方中药可以促进特异性细胞和体液免疫功能，但在复方中药的剂量范围使用下对非特异性和体液免疫具有显著促进作用。

小鼠；免疫促进；复方中药

近几年来免疫学在现代医学中发展较为迅速，然而能够有效地提高免疫功能的药物却较少，在处方研究中利用扶正祛邪的治疗理念在临床治疗中取得了较理想的效果。该实验从细胞分子学水平出发，研究复方中药在免疫功能上表现出的影响效果，从而为免疫学的中药遴选奠定一定的理论与实践支持。

根据中医中的理论与药理研究可知：西洋参的主要活性成分为皂苷类、多糖类、氨基酸等，这些成分对补体、巨噬细胞、T、B淋巴细胞具有激活的影响作用。补体C3是补体激活的三个级联的关键组成部分，故将其作为观察实验补体系统水平的指标。该研究的起止时间为2014年6月25日—9月30日。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 复方中药制备该实验的复方中药主要由西洋参、黄芪、枸杞、当归等中药成分组成。按照复方中药的制定比例，并将原药液浓缩成400 mL，灭菌后保存在4℃冰箱内。

1.1.2 实验动物6 wk龄昆明系小白鼠50只，雌雄各半，体重（18±22）g。

1.1.3 实验试剂与仪器免疫抑制剂环磷酰胺用生理盐水将注射用环磷酰胺（0.2 g）配成浓度为3 g/mL；AL204型电子天平；台式离心机；摇摆式高速粉碎机HK-04B/06B；光学显微镜；分选式流式细胞仪-Aira；电热恒温培养箱。

1.2 实验方法

将50只小鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半。在环磷酰胺造模后第2天分别进行小鼠复方中药应用试验，小鼠的灌量均为0.04 mL/g，其中高、中、低、对照组、模型对照组的复方中药给药剂量分别为0.04 mL/g、配置参半的0.02 mL/g蒸馏水和0.02 mL/g中药、0.01 mL/g中药和0.03 mL/g的蒸馏水、蒸馏水0.04 mL/g、蒸馏水0.04 mL/g，对小鼠喂服14 d。

试验的15 d，于小鼠眼球处取血，经过离心将血清与红细胞分离，分离后的血清严格按照检测方法测量小鼠血清IgG和补体C3水平。在无污染条件下，取小鼠脾脏进行研磨，经筛网过滤后放入ACK瓶皿中，经细胞液裂解后过滤于离心管中离心。

1.3 统计方法

2 结果

对实验小组进行数据搜集与统计见表1所示：模型对照组的IgG含量明显高于正常对照组(P=0.002＜0.01),而C3呈明显降低(正态分布方差不齐t检验，P=0.011＜0.05)，与低剂量中药组相比而言差异有统计学意义(P=0.001＜0.01)，这也说明了低剂量中药组可以有效地抑制小鼠抗体IgG的浓度，且显著地增加免疫抑制小鼠补体C3浓度。

表1 抗体、补体及B淋巴细胞表面抗原CD19结果比较

表1 抗体、补体及B淋巴细胞表面抗原CD19结果比较

注:与模型对照组比较，*P＜0.05,#P＜0.01。

组别IgG(g/L)C3(g/L)CD19(%)正常对照组(n=10)模型对照组(n=10)高剂量中药组(n=10)中剂量中药组(n=10)低剂量中药组(n=10)（125.79±42.02）#184.98±31.02 170.14±35.99 160.20±30.12（176.79±44.86）#（363.0±166.2）*192.0±56.67 186.9±50.4 235.98±62.05（293.78±60.98）#（41.21±10.0）*29.82±6.84 33.21±8.23 32.32±12.91 30.25±12.04

表2 T淋巴细胞表面抗原结果比较

表2 T淋巴细胞表面抗原结果比较

注:与模型对照组比较，*P＜0.05。

组别CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)CD4+/CD8+正常对照组(n=10)模型对照组(n=10)高剂量中药组(n=10)中剂量中药组(n=10)低剂量中药组(n=10) (38.16±8.02)*26.97±8.35 34.08±6.01 32.30±11.05 26.88±7.96 (34.21±10.13)*22.05±7.91 16.96±7.0 21.70±12.29 21.29±8.24 (32.50±4.38)*19.74±7.36 26.06±10.97 21.35±7.41 16.01±6.32 1.02±0.30 1.18±0.39 1.12±1.22 1.61±2.05 1.59±0.86

由表2所示CD3+,CD4+,CDB+,模型组的含量低于正常对照，(P＜0.05),CD3+,CD4+,CDB+,CD4+/CD8+模型对照组与高、中、低3组剂量组相比也较低，差异无统计学意义(P＞0.05)，这说明了实验中复方中药对特异性T淋巴细胞和B淋巴细胞免疫无促进作用。由实验后的补体C3、CD3+,CD4+,CDB+,CD4+/CD8+含量均有所降低，且差异具有统计学意义，这也正表明了实验建立了成功的免疫抑制动物模型。

3 讨论

该实验观察复方中药各剂量组与模型组的对比过程中发现C3、CD3+,CD4+,CDB+,CD4+/CD8+均差异无统计学意义（P＞0.05），因此未能证实其对特异性细胞免疫具有促进作用。机体的免疫功能主要与T淋巴细胞、B淋巴细胞、补体（C3、CD3+等）、免疫细胞因子等相关。由表1所知低剂量中药组明显高于对照组中补体C3的量(P=0.001＜0.01)，这就表明低剂量中药组显著地提升了C3的浓度，有效地促进免疫抑制小鼠补体系统的功能。另外，组别之间的IgG浓度由高到低依次与对照组相比，差异有统计学意义（P=0.001），这也充分说明了低剂量中药可以有效地降低免疫抑制小鼠的IgG浓度,结果表明：复方中药可以增加正常小鼠和免疫抑制小鼠IgM的含量和吞噬细胞的吞噬功能，且存在显著性差异，对免疫抑制组小鼠的增强作用更强。这与刘廷[1]的研究结果相似，说明复方中药可以提升吞噬细胞能力，可以有效地提高非特异性细胞免疫力。

综上所述，复方中药(由西洋参、黄茂、构祀、当归等多味药组成)在一定剂量范围内，虽然还未能证实对机体特异性细胞免疫和体液免疫有促进作用，但对非特异性细胞免疫及体液免疫有显著促进作用。从而为进一步开展复方中药其保健作用及合理开发利用提供理论依据。有关复方中药促进非特异性细胞免疫和体液免疫的作用机理,有待于进一步研究。

[1]刘廷，鞠玉林，等.中药复方连黄对小鼠T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+的影响[J].四川动物，2009，28（1）：115-117.

[2]郭曦，王继宏，肖雪珍，等.4种中药多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响[J].中国兽医杂志，2011,47(8):56-59.

[3]刘仰斌，李启华.小鼠胸腺形态结构的增龄性变化[J].中国组织工程研究与临床康复，2010，14（31）：5805-5808.

[4]于永超，张佳丽，林兵，等.西洋参多糖对钻-60辐照小鼠的免疫调节作用[J].现代预防医学，2012,39(11):2685-2687.

[5]韩洁，岳文鹏，何光志，等.八种中药多糖对小鼠巨噬细胞释放细胞因子的影响[J].现代免疫学，2011,31(6)：495-498.

[6]刘英姿，罗有梁，周铁忠.原花青素A-1调节ConA刺激小鼠脾细胞分泌Th1/Th2细胞因子的影响[J].免疫学杂志，2012,28(11):942-945.

[7]Schwab J,Hammerschmidl C,Richter D,et al.Borreliavalaisiana Resist Complement-Mediated Killing Independenlly of Lhe Recruitment of Immune Regulators and Inactivation of Complement Components[J]. PLoS One，2013,8(1)：e53659.

[8]耿卫朴，徐曼，罗补，等.灵芝多糖和当归多糖促进人外周血T淋巴细胞增殖和分泌IFN-y[J].中国药理学通报，2012,28(5):655-658.

Effect on Immune Function of Mice Immune Suppression of Compound Prescription of Traditional Chinese Medicine

DAI Yong-xia，MA Ji-ping，GAO Qing
Zhengzhou Shuqing Medical College，Zhengzhou，Henan Province,450064 China

The purpose of this study is explore the compound Chinese traditional medicine(Huang Qi,angelica and licorice)influence and effect on immune function of the compound traditional Chinese medicine.Methods:50 mice,were randomly divided into 5 groups.According to the compound traditional Chinese medicine dosage is divided into high dose group,middle dose group, low dose group,control group,model control group.Then cyclophosphamide immunosuppressed mice produce immunosuppression model,the experimental and the control group mice,the mice were observed after administration of mouse IgG,T lymphocyte subsets CD4+and CD8+determination,celiac macrophage phagocytic ability index.The statistical results from the data analysis:the control group and Chinese medicine group than in the phagocytosis of mouse IgG,T lymphocyte subsets,CD4+and CD8+in peritoneal macrophages index has significant difference(P＜0.01).Conclusion:the experiment failed to confirm that the compound Chinese medicine can promote specific cellular and humoral immune function of specific,but has significant promoting effect on nonspecific and humoral immunity in the dose range of compound Chinese medicine use.

Mice；Immune promoting；Compound traditional Chinese Medicine

R28

A

1674-0742（2015）05（a）－0164-02

2015-02-10）

代永霞（1982.1-），女，河南新郑人，中药学硕士，研究生，讲师，现从事基础医学的教学和科学研究工作。