MIF-173G／C多态性与恩施地区土家族胃溃疡的关联性研究

邓银芝 吴明珠 罗和生 贺建华

胃溃疡是一种消化系统较为常见的疾病，其临床特征表现为多数患者与幽门螺杆菌（Hp）感染有关，病情易反复发作，甚至发生上消化道大出血、幽门梗阻、穿孔等并发症。近年来随着根除Hp、抑制胃酸及胃黏膜保护药物的综合利用，胃溃疡治疗取得令人满意的临床效果；然而少数患者的临床疗效较差，患者胃黏膜上皮细胞发生肠上皮化生和非典型增生，最终演变为胃癌［1］。目前已明确胃溃疡的发病与机体免疫紊乱、遗传、感染等因素密切相关。临床上胃溃疡呈现出一定的家族聚集性，提示它是一种与遗传因素密切相关的疾病［2-4］。鉴于炎性反应和遗传因素在胃溃疡发病中的作用，本文探讨恩施地区土家族胃溃疡患者的巨噬细胞移动抑制因子（MIF）表达水平，分析 MIF173-G／C多态性与胃溃疡易感性的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2013年2月至2014年2月本院消化内科收治的胃溃疡患者145例，男71例，女74例，年龄19～85岁，平均年龄（45.6±12.6）岁。选择120名健康体检者为对照组，男55例，女65例，年龄20～80岁，平均年龄（47.1±10.9）岁。所有纳入对象均为恩施地区土家族，对本研究均已知情同意。排除标准：有明显免疫风湿性疾病、高血压、糖尿病、严重肝肾疾病、恶性肿瘤、慢性消耗性疾病以及严重感染性疾病，近3个月内有服用免疫抑制剂及激素史，有其他胃镜检查禁忌证。

1.2 试验方法

1.2.1 胃溃疡的诊断和Hp检测 电子胃镜夹取胃窦黏膜，病理检查诊断胃溃疡；Hp感染通过胃黏膜组织快速尿素酶试验、13C或14C尿素呼气试验检测，任一项阳性为Hp感染阳性。1.2.2 MIF-173位点单核苷酸多态性的检测 取患者肘静脉血2 mL，采用DNA提取试剂盒（上海泛柯生化试剂公司）提取DNA，并置于-2 0℃保存。按照文献设计 MIF-1 7 3 G／C引物 及 基 因 型 分 析［5-6］：PCR 上 游 引 物 5′-ACTAAGAAAGACCCGAGG-3′，下 游 引 物 5′-TGGCAGAAGGACCAGGAGAC-3′，PCR 产 物 为330 bp。扩增条件为变性95℃5 min、变性95℃30 s、退火54℃40 s、延伸72℃45 s，共34个循环。利用Snapshot单核苷酸多态性（SNP）分型技术对MIF-173G／C位点进行分型。

1.3 统计学分析

基因型与等位基因型频率采用频率计数法计算，研究对象基因型与Hardy-Weinberg平衡检验、组间基因型与等位基因频率的比较均采用χ2检验。并以比数比（OR）及其95%可信区间（CI）表示相对风险度。logistic回归分析MIF-173G／C多态性位点和胃溃疡之间的相关性，MIF血清水平作为计量资料以均数±标准差（ˉx±s）表示，两组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MIF-173G／C多态性的分布与比较

经过预扩增、预扩增产物纯化，最终延伸反应及延伸产物纯化，胃溃疡组GG、GC、CC基因型频率分别为42.75%、40.00%、17.24%，对照组基因型频率为61.67%、31.67%、6.54%；两组之间对应基因型比较发现，GG、GC、CC基因型在对照组和胃溃疡组分布的差异有统计学意义；两组之间对应等位基因比较发现，G、C在对照组和胃溃疡组分布的差异有统计学意义（见表1）。Hardy-Weinberg平衡定律的吻合度检验结果显示，胃溃疡组（χ2＝3.02，P＝0.08），对照组（χ2＝1.02，P＝0.31），提示基因检测结果可靠。以GG基因型为对照，暴露于CG、CC基因型的OR分别2.46（95%CI：2.01～3.10，P＝0.002）和5.19（95%CI：1.69～15.89，P＝0.000）。

表1 MIF-173G／C多态性频率在胃溃疡组与对照组的分布比较

2.2 胃溃疡组不同临床特征的基因型分析

采用logistic回归分析胃溃疡组145例患者MIF-173G／C多态性位点与临床资料之间的相关性，发现男女患者的基因型差异无统计学意义（χ2＝0.888，P＞0.05）；是否有胃溃疡家族史（χ2＝26.798，P＜0.01）、是否为寻常型胃溃疡（χ2＝0.786，P＞0.05）、是否处于活动期（χ2＝12.426，P＜0.05）的基因型分布差异均有统计学意义。见表2。

表2 不同临床特征胃溃疡患者的MIF-173G／C基因分型情况（n＝145）

3 讨论

研究表明，炎性介质相关基因及其表达的蛋白在炎性疾病的发生发展过程中起着至关重要的作用。MIF是一个关键的前炎性反应因子，一级结构为115个氨基酸残基，其相对分子质量约为125 000，其编码基因位于22号染色体长臂的保守区（22q11.2）［7］。正常情况下垂体及单核巨噬细胞也会分泌少量的MIF［8-9］。MIF具有许多生物学效应，其主要效应为免疫调节功能、促进血管新生及酶学活性［10］。近年来随着对 MIF研究的深入，国内外学者发现MIF在细胞增殖及分化调节方面发挥着重要的作用，它还参与恶性肿瘤的发生［11-12］。

基于MIF分子的主要生物学效应可能在胃溃疡的发生发展中起着潜在的作用，本研究旨在探讨恩施地区土家族胃溃疡患者的MIF-173G／C多态性与胃溃疡发病的相关性。MIF-173G／C基因型和等位基因频率在两组间分布差异有统计学意义，胃溃疡组CC基因型和C等位基因频率均显著高于对照组（P＝0.012）；相对于GG基因型，暴露于CG、CC基因型的OR分别为2.46（95%CI：2.01～3.10，P＝0.002）和5.19（95%CI：1.69～15.89，P＝0.000），这一结果提示 MIF-173G／C可能是恩施地区土家族胃溃疡的易感基因。迄今为止尚不明确MIF-173G／C多态性影响胃溃疡等疾病发病的分子机制，可能与影响其表达水平有关［13-14］。基因多态性与疾病的相关性近年来成为基础医学领域的一个研究热点，MIF基因存在多个位点的基因多态性，其中MIF的cDNA序列中第173位碱基SNP的研究较为广泛。国外学者发现MIF-173G／C多态性与系统性红斑狼疮、炎性反应性肠道疾病等免疫系统疾病有关［15-16］。

目前已明确Hp感染和遗传因素是引起胃溃疡发病的重要因素之一，本研究对MIF-173G／C多态性3种基因型GG、GC、CC的胃溃疡患者进行比较时发现，Hp感染与其多态性密切相关。张双霞等［17］研究慢性胃炎和胃溃疡组织中MIF蛋白表达的影响，发现慢性胃炎和胃溃疡组织中MIF阳性率明显高于正常组织，且Hp感染阳性患者在Hp根除后MIF阳性表达率明显下降，这一结果提示MIF在胃溃疡发生发展中发挥着重要作用，且Hp感染是导致MIF表达升高的重要因素。

本研究结果提示，MIF基因变异可能参与了胃溃疡的发生发展，其对胃溃疡的早期筛查、基因型诊断、早期治疗可能会有一定的辅助作用，但确切的分子机制尚需进一步研究。流行病学研究发现，发病年龄、职业与环境因子是影响胃溃疡发病的相关因素，本研究的对象在发病年龄、环境因子及职业等方面的资料不全，且样本量较小，需进一步扩大样本量，完善相关背景资料，以进一步深入探讨MIF基因的遗传多态性在胃溃疡发生发展过程中作用机制。

1 Tanaka R，Kosugi S，Sakamoto K，et al.Treatment for perforated gastric ulcer：a multi-institutional retrospective review.J Gastrointest Surg，2013，17：2074-2081.

2 Shiotani A，Sakakibara T，Nomura M，et al.Aspirin-induced peptic ulcer and genetic polymorphisms.J Gastroenterol Hepatol，2010，25（Suppl 1）：S31-S34.

3 Arisawa T，Hirata I.Genetic polymorphism of COX-1 gene and NSAID-induced ulcer.Nihon Rinsho，2007，65：1885-1889.

4 Sugimoto M，Yamaoka Y，Furuta T.Influence of interleukin polymorphisms on development of gastric cancer and peptic ulcer.World J Gastroenterol，2010，16：1188-1200.

5 Lao W，Xiang Y，Fang M，et al.Polymorphism and expression of macrophage migration inhibitory factor does not contribute to glucocorticoid resistance in idiopathic thrombocytopenic purpura.Pharmazie，2013，68：846-849.

6 Assis DN，Leng L，Du X，et al.The role of macrophage migration inhibitory factor in autoimmune liver disease.Hepatology，2014，59：580-591.

7 Donn RP，Plant D，Jury F，et al.Macrophage migration inhibitory factor gene polymorphism is associated withpsoriasis.J Invest Dermatol，2004，123：484-487.

8 Denkinger CM，Metz C，Fingerle-Rowson G，et al.Macrophage migration inhibitory factor and its role in autoimmune diseases.Arch Immunol Ther Exp（Warsz），2004，52：389-400.

9 Calandra T，Roger T.Macrophage migration inhibitory factor：a regulator of innate immunity.Nat Rev Immunol，2003，3：791-800.

10 Nishihira J.Molecular function of macrophage migration inhibitory factor and a novel therapy for inflammatory bowel disease.Ann N Y Acad Sci，2012，1271：53-57.

11 Mitchell RA，Bucala R.Tumor growth-promoting properties of macrophage migration inhibitory factor（MIF）.Semin Cancer Biol，2000，10：359-366.

12 Meyer-Siegler KL，Icakowski KA，Leng L，et al.Inhibition of macrophage migration inhibitory factor or its receptor（CD74）attenuates growth and invasion of DU-145 prostat cancer cells.J Immunol，2006，177：8730-8739.

13 Lao W，Xiang Y，Fang M，et al.Polymorphism and expression of macrophage migration inhibitory factor does not contribute to glucocorticoid resistance in idiopathic thrombocytopenic purpura.Pharmazie，2013，68：846-849.

14 Akyildiz M，Gunsar F，Nart D，et al.Macrophage migration inhibitory factor expression and MIF gene-173 G／C polymorphism in nonalcoholic fatty liver disease.Eur J Gastroenterol Hepatol，2010，22：192-198.

15 Sánchez E，Gómez LM，Lopez-Nevot MA，et al.Evidence of association of macrophage migration inhibitory factor gene polymorphisms with systemic lupus erythematosus.Genes Immun，2006，7：433-436.

16 Núñez C，Rueda B， Martínez A，et al.Involvement of macrophage migration inhibitory factor gene in celiac disease susceptibility.Genes Immun，2007，8：168-170.

17 张双霞，李光迪，于晓辉，等.根除Hp对慢性胃炎和胃溃疡组织中MIF蛋白表达的影响.西安交通大学学报，2009，30：724-726.