传统藏药“君西”炮制后微量元素的变化对正常小鼠肠推进和胃排空的影响

陈湘宏，童 丽，康文娟，翁裕馨

青海大学医学院，西宁 810001

藏药“君西”为碳酸盐类矿物南寒水石，主含碳酸钙，《四部医典》及《晶珠本草》记载:君西应用，常用于治疗培根病、紫痰病，消化不良，食物积滞，胆石症等［1］，“君西”均须炮制后方能清培根热(相当于中医的水与土)，传统将其分为雌、雄、中、子、女5种［2］，在藏药制剂中被广泛入药。因各种炮制方法中所用辅料种类和量的不同，使得“君西”炮制品药性也不同，因此各种炮制品在药效和治疗作用方面也存在差异［3，4］。现今有关君西炮制方法与药效的研究很少，本研究通过测定比较各种炮制方法中微量元素的含量，结合药理实验的方法，来探讨藏药“君西”经不同炮制后微量元素变化与药效之间的关系，为研究藏药“君西”的治病机理提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 材料

藏药“君西”(购自青海西宁市中藏药药材市场)，经青大医学院藏医药学教研室子巴教授鉴定为“君西”雄品;昆明种小鼠(18～22 g;120 只)，雌雄各半，购自甘肃兰州大学医学院［合格证号;SCXK-(甘)2013-0002］。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器

ZEEnit700P 原子吸收光谱仪及各元素空心阴极灯(德国耶拿分析仪器股份公司);Multiwave 3000型微波消解仪(奥地利安东帕公司);单元素标准溶液(国家标准物质研究中心);电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司);SX-5-13 型箱式电阻炉(天津泰斯特仪器有限公司);TCL-16G 高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂);UV-2550 紫外可见分光光度计(日本岛津);

1.2.2 试剂

互助头曲(青海互助酒厂，酒精度42°);达纳(又名酸酪，是藏族用牛奶做完酥油后剩下的产物);硝酸、氢氟酸、高氯酸、盐酸均为分析纯。枸橼酸莫沙必利:亚宝药业。

1.3 方法

1.3.1 炮制方法［5-8］

统制法(所有君西使用前均用此法)，称取君西2 kg，先将药物研成黄豆大小，倒入容器内用火硝500 g，加热煎煮，煎完用凉水冲洗数遍，反复煎至白色。晾干，研成120 目细粉，结合文献及青海省藏医院”君西”制剂规范，炮制方法如下:

1.3.1.1 传统热制法

君西200 g，倒入铁锅里翻炒至微黄色，加20 mL 青稞酒，凉冷即可。

1.3.1.2 传统凉制法

君西200 g，倒入铁锅里翻炒至微热时，加20 mL 牛黄水(牛黄3 g 溶于20 mL 水中)，凉冷即可。

1.3.1.3 传统滋补制法

君西200 g，倒入铁锅里翻炒至微热时，加20 mL 牛奶搅拌，阴干即可。

1.3.1.4 传统平制法

君西200 g，倒入铁锅里翻炒至微热时，加20 mL 达纳搅拌，阴干即可。

1.3.1.5 传统烈性制法

君西200 g，倒入铁锅内强火爆炒至黄色，泡进青稞酒里(以淹没为度)，阴干即可。

1.3.1.6 传统致“灰”法

君西200 g，同配药(柯子、光明盐、唐古特乌头、荜拨、硫磺(炮制品))一起装人瓦罐内，封好口子，用柴火不间断烧10 d 左右，打开口子，观察颜色变化，以君西变灰白色即达到标准。

1.3.2 样品消解

将藏药“君西”及各种炮制品研磨过200 目筛，准确称取消解样品0.1 g，精确至0.0001 g，置于聚四氟乙烯消解罐中，用水润湿后加入5 mL 盐酸，在通风橱中置于电热板上中温加热1 h 左右，使样品初步分解，待蒸发至约剩3 mL 时取下稍冷，先后加入5 mL 硝酸、氢氟酸、高氯酸，先在恒温电热板上加热至100 ℃，当加热至冒白烟时，加盖，待坩埚壁上的黑色有机物消失后，开盖，驱赶白烟并蒸至内容物呈黏稠状，视消解情况，可再补加3 mL 硝酸;3 mL氢氟酸;1 mL 高氯酸，重复以上消解过程。当白烟冒尽且内容物呈黏稠状时，取下稍冷，去离子水冲洗内壁及坩埚盖，并加入1 mL 硝酸溶液(HNO3-H2O，1∶1)，然后转移至100 mL 容量瓶中，冷却，定容至标线，摇匀，待测，同时做3 个样品空白对照。

1.3.3 仪器工作条件

狭缝宽:1.2 nm;燃烧头高度:7 mm;燃气流量:80 L/h;升温程序:干燥:75 ℃/20 s、90 ℃/20 s、105℃/20 s，干燥:75 ℃/20 s、90 ℃/20 s、105 ℃/20 s;原子化:除残:2000 ℃，灰化:850 ℃/10 s;准确度:99.89%(表明在此条件下火焰原子吸收光谱法测定这些元素稳定性好，结果准确可靠，能够达到检测要求)。

1.3.4 分组与给药

取小鼠110 只，随机分为正常组，阳性组(枸橼酸莫沙必利，1.96 mg/kg)，“君西”药物9 组。共11组，给药组灌服9 种炮制药物(28 mg/kg)，给药体积均为0.2 mL/10 g 体重，对照组灌服等体积蒸馏水，每日一次，连续灌胃3 d。于末次给药前禁食18 h，给药后60 min，每只小鼠灌胃0.04%酚红溶液(含10%明胶)0.25 mL。20 min 后处死动物，同时取出胃及小肠，将小肠平铺于白纸上，胃置于30 mL0.5mol/L NaOH 溶液中，沿胃大弯剪开胃，充分洗下胃内容物，取5 mL 离心(3000 r/10 min)，吸上清液用UV-2550 紫外可见分光度计于560nm 波长比色，测其吸光度。计算胃酚残留率，以胃酚红残留率为指标评价胃排空速度，小肠推进则以酚红在小肠中的移行距离与小肠全长的百分比乘以100%作为小肠推进百分率来评价小肠推进速度。酚红推进百分率=酚红前端与幽门的距离/小肠全长。

另取10 只小鼠，每只小鼠用0.04%的酚红溶液(含10%的明胶)0.25 mL 灌胃，立刻处死，按上述方法处理，测吸光度，取其均值作为标准值(胃酚红排空为零)，按下式计算胃酚红排空率(%)。

2 结果与分析

2.1 藏药“君西”各样品中各元素含量的测定结果

按选定仪器工作参数，对试样溶液进行测定(每份样品液平行测定3 次)，结果见表1。

表1 藏药“君西”各样品中各元素含量的测定结果Table 1 The contents of trace elements in Tibetan medicine "Junxi" with different processing methods

结果显示，各样品不同方法炮制后，传统“灰”制中Ca、Mg、Fe、Zn、Cu 含量均高于其它组，其中Fe元素高于其它组十几倍，Mg、Cu 元素也明显高于其它组，Mn 元素含量大小为传统烈制 ＞传统“灰”制＞传统滋补制＞传统热制＞传统凉制＞传统平制，说明“君西”热制法(传统烈制、传统“灰”制、传统热制)较其它炮制法中微量元素有所增加。

2.2 “君西”各不同炮制法对正常小鼠小肠推进和胃排空的实验结果

结果表明，与正常组相比，用药组(传统热制、传统烈制、传统“灰”制及莫沙必利组)对促进正常小鼠的胃酚红排空、小肠推进率的差异有显著的统计学意义(P＜0.05;P＜0.01)，传统凉制、传统平制、传统滋补制则效果不明显，其中传统平制在小肠推进率上不如正常组，传统滋补制在排空率上与正常组等同，没有统计学意义(结果见表2)。

3 讨论与结论

寒水石作为一种在藏医药体系中举足轻重的药材，在成方制剂占很大比例，在藏医药理论中，不管上述哪一种“君西"，都要进行炮制，未经炮制绝不能入药，矿物药经炮制由质地坚硬变酥脆后，不仅便于调剂及制剂，更有利于有效成分的溶出和吸收，提高其生物利用度。考察药物炮制前后溶出率的变化，对于阐明其物质基础的变化具有重要的参考价值［9］据中华本草(藏药卷)记载，寒水石经过不同炮制方法改变药性，进而治疗不同的病症，若用酒淬，则性热;若用水淬，则性寒;若用酸酪淬，则性平。

表2 藏药“君西”各不同炮制法对正常小鼠小肠推进和胃排空的影响(± s，n=10)Table 2 Effect of Tibetan medicine "Junxi" with different processing methods on the small intestine propulsion and gastric emptying in mice (± s，n=10)

表2 藏药“君西”各不同炮制法对正常小鼠小肠推进和胃排空的影响(± s，n=10)Table 2 Effect of Tibetan medicine "Junxi" with different processing methods on the small intestine propulsion and gastric emptying in mice (± s，n=10)

微量元素与人体健康关系极为密切，这些微量元素是酶和维生素不可缺少的激活剂，对维持核酸的正常代谢有重要作用［10］，缺Mg 可能会使免疫功能降低，Cu 具有合成酶和活化血红蛋白功能，Fe 是组织代谢不可缺少的物质，参与体内多种反应的催化，Mn 在骨骼生长及生殖和内耳的发育等有着密切联系，Zn 与胃病的发生发展有着密切联系，Zn 能减轻炎症促进胃壁粘膜细胞再生，胃癌、胃炎患者血清中Zn 浓度明显低于正常人血清中Zn 浓度［11-14］，说明Zn 含量增加可能具有增强治疗胃病的功效，胃排空实验和小肠推进实验是研究胃肠运动功能的基本实验方法，也是反映胃肠运动功能的基本指标。

实验对藏药“君西”各不同炮制法中微量元素变化对小鼠小肠推进率和胃排空率进行了分析，结果显示，传统“灰”制法、传统热制、传统烈制较其它炮制组表现出较高活性，在藏医炮制理论中属“热”制范畴，这几种传统炮制品中虽然成分相同，但所用的配药不同，其微量元素含量、药性及药效等方面都发生了变化，说明与配药有一定的关系，药效方面的作用可能是配药与成分共同作用的结果，其是否提示其物质基础也发生了变化，有待进一步验证。除传统“灰”制的微量元素含量较高于其它组外，余下各组元素含量均高低不同。药效研究发现，传统“灰”制、传统热制、传统烈制的胃酚红排空率和小肠推进率较其它炮制组高，说明“热制”的藏药“君西”对提高胃排空及加速小肠推进有一定积极的作用，其作用与西药莫沙必利具有可比性，作用可能是影响一些胃肠激素，兴奋胃平滑肌和幽门运动，增强胃窦运动，从而影响胃排空［15］，改善了胃肠血液供应，从而有助于协调胃肠运动［16］，表明“热”法炮制有利于胃排空及小肠推进的提高，但与微量元素含量的多少可能没有必然的联系，提示其治疗胃病机理可能与藏医治疗胃病的理论是相符的，其作用机制有待更进一步研究。

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