芪参安胃口服液中黄芪甲苷含量测定的研究

王海燕 ，柳庆坤，刘广文(泰安市食品药品检验检测中心，山东 泰安 271000)

芪参安胃口服液是由黄芪、苦参等7 味药材经提取、浓缩、加工而制成的液体制剂，具有补气健脾、消积和胃的功效［1］。黄芪为方中要药，其所含的成分主要为黄芪甲苷等皂苷类成分及毛蕊异黄酮等黄酮类成分［2］。黄芪甲苷含量高、性质稳定，故以黄芪甲苷作为黄芪药材含量测定成分的报道居多［3-5］。芪参安胃口服液方中有山楂等含有大量黄酮类成分，导致毛蕊异黄酮干扰严重，杂质较多，且毛蕊异黄酮对照品较难得到，故试验用高效液相法测定样品中的黄芪甲苷含量。黄芪甲苷的测定方法较成熟，2010 年版《中华人民共和国药典:一部》(以下简称《中国药典:一部》)“黄芪药材含量测定”项下采用高效液相法对黄芪甲苷进行了测定［1］。为更好地控制本品质量，本研究采用高效液相色谱法对芪参安胃口服液中黄芪甲苷的含量进行测定。

周大娘也一定知道金枝赚到钱了，因为每个新来的第一次“赚钱”都是过分的羞恨。羞恨摧毁她，忽然患着传染病一般。

1 材料

1.1 仪器

METTLER TOLEDO AL204 型电子天平(梅特勒-托利多上海公司);KQ-500B 型超声仪(昆山市超声仪器有限公司);高效液相色谱仪(LC-20 AB 泵、SIL-20A 型自动进样器，日本岛津公司);Alltech Grace ELSD 3300 型检测器(上海埃文斯科贸有限公司)。

1.2 药品与试剂

乙腈为色谱纯(美国Sigma 公司);水为超纯水(Millipore超纯水系统);其他试剂均为分析纯。黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号:110781-200903)，供含量测定用，纯度均为100%。

2 方法与结果

2.1 测定条件的考察

2.1.1 检测器的选择:对黄芪甲苷对照品溶液作光谱图测定，结果显示，在204 nm 处有最大吸收，末端吸收，用高效液相检测器难度较大，故本品根据2010 年版《中国药典:一部》“黄芪药材含量测定”项下的方法及文献报道，采用蒸发光散射检测器检测。

在改革之初，农场先后开展了“深化改革、加快发展”解放思想大讨论活动和“解放思想促改革”主题教育活动，制定了教育活动时间表路线图，并把主题教育活动融入到改革具体工作中，把思想发动贯穿于改革的全过程、各环节，做到重点突出、统筹兼顾，同步推进。

2.2 供试品的制备

本品中含有大量的黏液质、多糖等干扰成分，若直接注入液相测定，则杂质峰多且对色谱柱损害大，因此，需经纯化后注入液相色谱仪测定。同时，根据2010 年版《中国药典:一部》测定黄芪甲苷含量的方法，折算应取药液15 ml 为宜，具体制备方法考察如下。

按处方比例，不加黄芪药材，按本品制备工艺制得缺黄芪的空白样品，再按上述方法制备缺黄芪的空白对照溶液，使用高效液相色谱仪测定。结果显示，在黄芪甲苷峰位处无吸收，空白无干扰。最终确定的供试品制备方法为:取本品，摇匀，精密量取15 ml，置离心管中，加乙醇75 ml，摇匀，静置冷藏2 h，离心;残渣再以少量80% 乙醇洗涤，离心，合并乙醇液，水浴蒸干，残渣加水25 ml 使溶解;用水饱和的正丁醇振摇提取4 次，每次20 ml，合并正丁醇液;用氨试液洗涤2 次，每次40 ml，弃去氨液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5 ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。

取黄芪甲苷对照品溶液(1.503 6 mg/ml)，按“2.1”项下方法使用高效液相色谱仪测定，进样10 μl，连续进样6次，测得 峰 面 积 分 别 为89 601、92 284、89 250、93 162、91 047、91 324，平均为91 111.33，RSD为1.66%。结果显示，精密度良好。

2.3 空白试验

2.2.1 提取方法考察:(1)提取方法1:取本品，摇匀，精密量取15 ml，用水饱和正丁醇振摇提取4 次，每次20 ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2 次，每次40 ml，弃去氨液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5 ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得［6-8］。(2)提取方法2:取本品，摇匀，精密量取15 ml，置离心管中，加乙醇75 ml，摇匀，静置冷藏2 h，离心，残渣再以少量80%乙醇洗涤，离心，合并乙醇液，水浴蒸干，残渣加水25 ml 使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4 次，每次20 ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2 次，每次40 ml，弃去氨液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5 ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。分别精密吸取上述2 种供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定，结果显示，提取方法1 的萃取易分层，易分离，峰面积为34 809;提取方法2的萃取易分层，易分离，峰面积为24 339。提取方法2 以乙醇沉淀除杂，易导致成分损失，而提取方法1 提取则较完全，故本品选择提取方法1 的方法提取本品。

2.4 线性关系考察

随着对中国社会的发展，学术界、社会政策界和全社会对儿童境况关注的程度增加，国家对儿童福利的投入增加，政策制定者和学术界都感到有必要整合不同的名词，使用统一的政策术语，指代需要国家福利帮助的儿童，并以此代替上述各种不能准确指代困境儿童的术语。

表1 标准曲线试验结果Tab 1 Results of standard curve test

2.5 精密度考察

2.2.2 供试品精制方法考察:(1)精制方法1:取本品，摇匀，精密量取15 ml，置离心管中，加乙醇75 ml，摇匀，静置冷藏2 h，离心，残渣再以少量80%乙醇洗涤，离心，合并乙醇液，水浴蒸干，残渣加水25 ml 使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4 次，每次20 ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2 次，每次40 ml，弃去氨液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加水5 ml 使溶解，放冷，通过D101 型大孔吸附树脂柱(内径1.5 cm，柱高12 cm)，以水50 ml 洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30 ml 洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80 ml 洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5 ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。(2)精制方法2:取本品(批号:20100801)，摇匀，精密量取15 ml，置离心管中，加乙醇75 ml，摇匀，静置冷藏2 h，离心，残渣再以少量80%乙醇洗涤，离心，合并乙醇液，水浴蒸干，残渣加水25 ml 使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4 次，每次20 ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2 次，每次40 ml，弃去氨液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5 ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。分别精密吸取上述两种溶液各20 μl 注入液相色谱仪，测定，结果显示，精制方法1 的黄芪甲苷峰面积为24 880;精制方法2 为34 352。精制方法2 的黄芪甲苷峰面积明显高于制备方法1，故本品选择制备方法2 的方法制备本品的供试品溶液。

2.1.2 检测参数:(1)高效液相色谱参数:以Shimadzu LC-10A 高效液相色谱色谱仪检测本品中黄芪甲苷的含量，考查不同的流动相、不同的色谱柱对本品的影响。结果显示，流动相为乙腈-水(V∶V=32∶68)时，保留时间约10 min，基线较平;色谱柱为Shimadzu C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)、Kromasil C18柱(150 mm×4.6mm，5 μm)时，黄芪甲苷峰分离度均较好。因此，最终确定以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用Shimadzu 或Kromasil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)为色谱柱，后续试验均用Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)为色谱柱;以乙腈-水(V∶V=32 ∶68)为流动相。(2)蒸发光散射检测器参数:采用ELSD 2000 型蒸发光散射检测器，考查漂移管温度、载气流速对本品的影响。结果显示，漂移管温度为105 ℃时，基线较好，峰分离好;载气流速为2.7 ml/min 时，峰状态较好。由此，最终确定漂移管温度为105 ℃，载气流速为2.7 ml/min。

图1 黄芪甲苷的标准曲线Fig 1 Standard curve of Astragaloside A

2.6 中间精密度考察

取本品，摇匀，精密量取15 ml，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下方法，在同一实验室，考察不同操作者、不同时间、不同仪器的精密度，进样20 μl，各连续进样3 次，测得峰面积，计算含量。结果显示，中间精密度良好，见表2。

2.7 稳定性考察

取对照品(黄芪甲苷含量为0.1240 mg/ml)，摇匀，精密量取7.5 ml，称取6 份，分别精密加入黄芪甲苷对照品水溶液(0.1438 mg/ml)7.5 ml，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，进样，测定，计算回收率:回收率=(测得量-样品含量)/对照品加入量×100%［10］。结果显示，黄芪甲苷的加样回收率较高，方法可行，见表5。

称取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，各取5 份，加甲醇分别制成0.502 4、1.004 0、2.506 0、4.974 0、7.452 0 mg/ml的溶液，作为对照品溶液，按“2.1”项下方法使用高效液相色谱仪测定，分别进样10 μl，测得峰面积［9］，见表1。计算进样量和峰面积的对数，绘制回归方程，以进样量对数(logx)为横坐标，以峰面积对数(lgy)为纵坐标，绘制标准曲线，见图1。回归方程:lgy=1.323 9 lgx+3.382 0，r=0.999 6。结果显示，黄芪甲苷进样量在5.024 0 ～74.520 0 μg 范围内线性关系良好。

2.8 重复性考察

取本品，摇匀，精密量取15 ml，称取6 份，按“2.1”及“2.2”项下方法制备供试品溶液，进样，测定。结果显示，本方法的重复性较好，见表4。

2.9 加样回收考察

取本品，摇匀，精密量取15 ml，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别于放置后的0、2、4、8、12、16 h 使用高效液相色谱仪测定，进样10 μl。结果显示，本品供试品溶液在16 h 内检测稳定性较好，见表3。

表2 中间精密度试验结果Tab 2 Results of precision test

表3 稳定性试验结果Tab 3 Results of stability test

表4 重复性试验结果Tab 4 Results of repeatability test

表5 加样回收试验结果Tab 5 Results of recovery test

2.10 样品含量测定

按“2.1”及“2.2”项下方法，对10 批样品的黄芪甲苷含量进行测定，结果见表6。根据以上10 批样品中黄芪甲苷含量的测定结果，结合工艺研究中的转移率，暂定本品含黄芪以黄芪甲苷计不得少于0.10 mg/ml。以10 批样品均值的80%作为含量低限，确定本品的含量限度，具体计算方法:(0.123 +0.188+0.192+0.106+0.108+0.108+0.107+0.124+0.121+0.176)/10 ×80% =0.108 mg/ml，此限度合理。

3 讨论

以上方法学考察结果显示，该高效液相色谱法能够用于测定芪参安胃口服液中黄芪甲苷的含量。通过几批样品的含量测定，可以确定本品的含量限度。本品的含量测定方法学结果为:色谱条件与系统应用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(V ∶V =32 ∶68)为流动相;使用蒸发光散射检测器检测。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3 000。

对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成1.0 mg/ml 的溶液，即得。

表6 10 批样品中黄芪甲苷的含量Tab 6 Contents of Astragaloside A in 10 batches of Qishen Anwei oral solution samples

供试品溶液的制备:精密量取本品15 ml，用水饱和正丁醇振摇提取4 次，每次20 ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2 次，每次40 ml，弃去氨液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5 ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

对照组纳入标准：①BCVA≥0.8；②视野正常；③眼压正常；④无青光眼等眼病及家族史；⑤无眼部手术及外伤史。排除标准：①双眼SE＜-6 D或＞+6 D；②屈光介质混浊影响扫描图像的清晰度；③其他眼部疾病或全身系统性疾病病史；④其他视神经、视路及中枢神经系统疾病史。

测定法:分别精密吸取对照品溶液5、15 μL，供试品溶液20 μl，注入高效液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。

首先，以团队为单位进行考核是重点。由于沙盘实训课程是以团队形式开展的，每位团队成员在模拟企业中扮演重要角色并承担岗位职责，各成员互相配合，模拟企业才得以正常运转。因此，沙盘实训课程需要以经营团队作为考核的重点，比如以团队成员参与度、团队最终的经营成绩排名为考核依据，对各团队进行评分。将团队作为考核的重点，有利于增强团队凝聚力和集体荣誉感，有利于团队成员之间的相互激励。

西南政法大学毓秀菁英学生骨干培养理念是以校、院两级学生骨干为主体，秉承“博学、笃行、厚德、重法”的西政校训，构筑“一个中心”、落实“两个支点”、贯彻“三个融合”的毓秀菁英学生骨干培养模式，培养中国特色社会主义合格建设者和可靠接班人，探索全员、全方位育人思想政治教育新格局。

本品含黄芪以黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于0.10 mg/ml。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部［M］.2010 年版.北京:化学工业出版社，2010:283-284.

［2］ 张尚智，韩黎明，贺莉萍，等. 中国黄芪专利分析与研究［J］. 中国中医药信息杂志，2012，19(11):19-22.

［3］ 辛颖，宋晓东，刘哲，等. HPLC-ELSD 法测定欣力胶囊中黄芪甲苷的含量［J］.药物分析杂志，2008，28(4):602-604.

［4］ 马玲，王坤，张芦燕，等. HPLC-ELSD 法测定不同生长年限黄芪中黄芪甲苷的含量［J］. 药物分析杂志，2006，26(12):1869-1870.

［5］ 夏爱军，黄贵明.用HPLC 法测定芪归生血胶囊中黄芪甲苷的含量［J］.药学服务与研究，2008，8(4):264-265.

［6］ 刘玫，周晶，张庆伟，等. 氨液水解法用于提高黄芪中黄芪甲苷含量的工艺研究［J］.中国中药杂志，2008，33(6):635-638.

［7］ 张金红，周晶，宋慧琴，等. 碱水解法提高黄芪药材中黄芪甲苷的工艺研究［J］.时珍国医国药，2010，21(11):2935-2937.

［8］ 冯小权，黄可儿，魏刚，等.黄芪总皂苷与黄芪甲苷在酸碱中的含量变化分析［J］.中药新药与临床药理，2010，21(5):533-537.

［9］ 谢委，方建国，杜光，等.高效液相色谱-蒸发光散射法测定扶正强筋片中黄芪甲苷含量［J］.医药导报，2012，31(2):208-210.

［10］ 赵校妍，王永泉.HPLC-ELSD 法测定益气熄风胶囊中黄芪甲苷的含量［J］.内蒙古中医药，2014，33(3):128-129.