不同产地温郁金药材有效成分含量比较

陶正明，姜 武，吴志刚，任江剑

（1.浙江省亚热带作物研究所，浙江温州 325005；2.浙江省中药研究所有限公司，浙江杭州 310023）

不同产地温郁金药材有效成分含量比较

陶正明1，姜 武1，吴志刚1，任江剑2

（1.浙江省亚热带作物研究所，浙江温州 325005；2.浙江省中药研究所有限公司，浙江杭州 310023）

采用HPLC方法对温州7个产地连续2年的温郁金药材挥发油、吉玛酮和莪术醇的含量进行比较研究。结果表明，各批次温州产温郁金药材均符合中国药典2010年版标准要求，其中2012年各产地温莪术平均挥发油、吉马酮及莪术醇含量分别为4.07%，0.36%和0.07%；片姜黄平均挥发油、吉马酮及莪术醇含量分别为3.02%，0.25%和0.05%，且以瑞安马屿产温郁金药材的有效成分含量最高。2013年各产地温莪术平均挥发油、吉马酮及莪术醇含量分别为5.07%，0.45%和0.09%；片姜黄平均挥发油、吉马酮及莪术醇含量分别为3.33%，0.27%和0.05%，且以文成金星的温莪术药材和瑞安顺泰的片姜黄药材的有效成分含量最高。

温郁金；挥发油；吉马酮；莪术醇

温郁金（Curcuma wenyujin）系姜科姜黄属植物，其块根、根茎供药用，块根加工成的药材温郁金是浙江省著名道地药材“浙八味”之一［1-3］。根据药用部位与加工方法的不同，其地下根茎、块根可分别加工成3种不同药材：块根煮熟晒干称温郁金，侧根茎鲜纵切厚片晒干称片姜黄，主根茎煮熟晒干称温莪术。3种药材均为2010年版《中国药典》收载品种［4］。

早在世界第一部药典《新修草本》（唐）中就有温郁金入药的记载，至宋《重修政和经史证类备用本草》中记载的蓬莪术则在其名前冠以“温州”二字以示道地，预示着温郁金在温州地区的栽培已达1 000多年［5］。吴志刚等［6］基于地理信息（GIS）技术平台，根据生物引种原理对温郁金在温州各县区的种植适宜性进行评价，其结果与本草古籍记载的温郁金产地相一致。现代药理学表明温郁金对子宫颈癌、子宫颈糜烂、皮肤病等有一定疗效，且莪术醇、吉马酮是温郁金药材抗肿瘤的主要活性成分［7-10］。然而，随着温郁金市场价值的不断上升和产区农户良种意识的薄弱，追求一时的经济利益导致部分良种直接用于销售，而将并不适合作为种源的根茎用于留种栽培；加之产业管理混乱，土壤营养贫瘠和工业化带来的污染，使得温州部分县市产区的温郁金种质出现退化，其品质下降，严重影响温郁金药材产业的可持续发展。保证药用植物的品质是生产优质药材的基础，2010年版《中国药典》在莪术、片姜黄项下仅收载挥发油、灰分、浸出物等含量作为评价药材的质量控制指标，较难充分反映药材的质量好坏，且不同产地温郁金药材的品质比较研究尚未见报道。因此，本研究以挥发油、吉马酮和莪术醇的含量作为温郁金药材品质的评价因子，对2012，2013年温州7个不同产地的温郁金药材品质进行比较研究，旨在为道地药材温郁金质量评估提供依据，以更好地满足优质温郁金药材的生产需要。

1 材料与方法

1.1 材料

2012，2013年课题组采集温州7个产地温郁金的新鲜样品，根据不同加工方法分别加工成温莪术、片姜黄药材，材料均经温州大学植物分类学科丁炳扬教授鉴定为温郁金Curcuma wenyujin植物。瑞安陶山、瑞安顺泰、瑞安马屿、乐清石帆、永嘉乌牛、文成金星和苍南桥墩试材编号依次为1～7。

仪器有Agilent 1100高效液相色谱仪，DAD检测器，大连依利特C18柱，Satorius电子分析天平，Millipore纯净水发生器。试剂有甲醇（分析纯），乙腈（色谱纯），莪术醇（批号111665-200401，中国生物制品检定所），吉马酮对照品（批号100185-200506，纯度94.96%，中国生物制品检定所），自制超纯水。

1.2 方法

1.2.1 挥发油的提取

准确称取药材粉末35 g，于1 000 m L烧瓶中，加水600 m L，安装挥发油收集器，在120℃条件下油浴回流提取1 h，读数计量，冷却，收集莪术油备用。

1.2.2 色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶作填充料，C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；以乙腈为流动相A，以甲醇为流动相B，以0.4%磷酸水溶液为流动相C进行梯度洗脱；柱温30℃；流速1.0 m L· min-1；检测波长210 nm。柱后运行10 min，进样量5μL。

1.2.3 供试品溶液制备

取挥发油约0.050 g，精密称定（2～3滴）置于10 mL量瓶中，以流动相（乙腈∶甲醇∶水为50∶22.5∶27.5）溶液溶解定容。

1.2.4 对照品溶液制备

莪术醇。精密称取莪术醇10.68 mg于25 m L容量瓶中，以流动相溶解定容，即得浓度0.427 2 mg· m L-1，备用。

莪术醇、吉马酮混合对照品溶液。精密称取吉马酮6.83 mg于25 mL容量瓶中，准确移入上述莪术醇对照品液5 m L，续以流动相溶解定容，即得莪术醇0.085 4 mg·m L-1、吉马酮0.259 4 mg· m L-1的混合对照品溶液。

2 结果与分析

2.1 线性关系

分别精密吸取混合对照品溶液1，3，5，7和10μL进样，按色谱条件测定，按照莪术醇、吉马酮归属分别计算各自峰面积（表1），并以峰面积y为纵坐标，进样量x（μg）为横坐标，进行线性回归，得莪术醇线性方程y=1 030.403 x+41.349，r=0.999 9；吉马酮线性方程y=3 358.714 x+ 14.866，r=0.999 8。

2.2 精密度

吸取适量的混合对照品溶液，在色谱条件下，连续进样5次，每次5μL，分别测定莪术醇、吉马酮峰面积，计算相对标准偏差。由表2可知，莪术醇、吉马酮的平均峰面积分别为479.690和4 410.072，相对标准误差分别为1.077%和1.159%，精密度良好。

2.3 稳定性

取供试品溶液1份，分别于样品制备后0，1，3，8，16 h依色谱条件进行测定，每次进样5μL，测定结果见表3。莪术醇和吉马酮的相对标准误差分别为1.657%和0.219%，表明被分析成分在16 h稳定。

表1 莪术醇和吉马酮进样量和峰面积的线性关系

表2 莪术醇、吉马酮的精密度试验结果

表3 供试品溶液稳定性试验的结果

2.4 重现性

取精密称取的温郁金药材粉末，依1.2.1节法进行莪术油提取，所得莪术油按1.2.3节法平行制备5份供试品溶液，在色谱条件下，每份供试样品分别进样5μL，测定结果见表4。莪术醇、吉马酮的相对标准误差分别为1.533%和0.484%，表明方法重复性好。

表4 莪术醇、吉马酮重现性试验的结果

2.5 加样回收率

精密称取5份约50 mg已知含量的莪术油样品于10 mL容量瓶中，分别加入1.2.4节方法中的混合对照品溶液1 mL，并用流动相溶液稀释至刻度，即得5份含对照品的供试品溶液。按色谱条件，每次进样5μL，测定结果见表5。莪术醇、吉马酮的平均回收率分别为99.904%和99.669%，相对标准误差分别为0.409%和0.689%。

表5 莪术醇、吉马酮加样回收率

2.6 药材有效成分含量

分别按1.2.1节和1.2.3节方法进行挥发油的测定和供试品溶液的制备，进样5μL测定含量。莪术醇、吉马酮对照品HPLC色谱图如图1所示，片姜黄药材和温莪术药材（乐清石帆产为例）的莪术油HPLC色谱图如图2所示。2012，2013年温郁金药材有效成分含量测定结果分别见表6和7。

图1 莪术醇、吉马酮对照品HPLC的色谱图

由图2可知，莪术醇和吉马酮大约分别在11和16 min。表6显示，2012年温州7个产地温莪术、片姜黄平均挥发油含量分别为4.07%，3.02%，且药材中吉马酮平均含量分别为0.36%，0.25%；莪术醇平均含量分别为0.07%，0.05%。按照2010年版《中国药典》关于莪术、片姜黄挥发油含量分别不得低于1.5%，1.0%的标准要求，2012年温州产温郁金药材符合国家药典标准要求，且以瑞安马屿产的药材有效成分含量最高。

图2 片姜黄药材莪术油（A）和温莪术药材莪术油的HPLC色谱图（B）

表6 2012年药材挥发油及油/药材中莪术醇、吉马酮含量测定结果

表7 2013年药材挥发油及油/药材中莪术醇、吉马酮含量测定结果

表7显示，2013年温州7个产地的温莪术、片姜黄平均挥发油含量分别为5.07%，3.33%，且药材中吉马酮平均含量分别为0.45%，0.27%；莪术醇平均含量分别为0.09%，0.05%。按照2010年版《中国药典》关于莪术、片姜黄挥发油含量分别不得低于1.5%，1.0%的标准要求，2013年温州产温郁金药材均符合国家药典标准要求，且文成金星产药材在温莪术挥发油含量及有效成分含量最高，而瑞安顺泰产片姜黄药材的挥发油含量及有效成分含量最高。

3 小结

通过对吉马酮、莪术醇HPLC试验方法的研究，建立了温莪术、片姜黄药材含量的检测方法，该方法精密度高、重现性较好，一个色谱条件下能同时灵敏检测吉马酮、莪术醇含量，因此该方法可作为温莪术、片姜黄药材的控制技术。

通过2年不同批次温莪术、片姜黄药材检测发现，其最低挥发油含量分别为3.25%和2.00%，温莪术药材中吉马酮和莪术醇含量最低分别为0.31%和0.06%，片姜黄药材中吉马酮和莪术醇含量最低为0.16%和0.03%。综合研究结果，拟定温莪术药材挥发油含量不少于3.0%，吉马酮不少于0.30%，莪术醇不少于0.05%；片姜黄药材挥发油含量不得少于1.5%，吉马酮不少于0.15%，莪术醇不少于0.03%，以期为重新建立温莪术、片姜黄的药材质量控制指标提供依据。

［1］ 陶正明，姜武，郑福勃，等.“温郁金1号”新品种选育［J］.中国中药杂志，2014，39（20）：3910-3914.

［2］ 陶正明，姜武，吴志刚，等.温郁金最佳播种期试验［J］.浙江农业科学，2014（10）：1562-1563.

［3］ 毛春芹，谢辉.莪术炮制品的抗血小板聚集及抗凝血作用［J］.中药材，2000，23（4）：212-213.

［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.1部.北京：中国医药科技出版社，2010.

［5］ 吴志刚，陶正明，冷春鸿，等.温郁金本草考证［J］.中药材，2009，32（3）：455-456.

［6］ 方丽，祝明，郑成，等.温莪术药材指纹图谱的研究［J］.中国试验方剂学杂志，2010，16（12）：37-40.

［7］ 楼燕，何昊，魏星川，等.温郁金倍半萜类成分的分离与鉴定［J］.沈阳药科大学学报，2010，3（25）：195-199.

［8］ Dang Y Y，Li X C，Zhang Q W，et al.Preparative isolation and purification of six volatile compounds from essential oil of Curcuma wenyujin using high-performance centrifugal partition chromatography［J］.Separation Science，2010，33（11）：1658-1664.

［9］ 尹国平，张清哲，安月伟，等.温郁金化学成分及药理活性研究进展［J］.中国中药杂志，2012，37（22）：3354-3357.

［10］ 陶正明，吴志刚，顾雪萍，等.种栽和种植密度对温郁金产量与挥发油含量影响［J］.中药材，2007，30（11）：1353-1355.

（责任编辑：张瑞麟）

S 567.23

：A

：0528-9017（2015）10-1583-04

文献著录格式：陶正明，姜武，吴志刚，等.不同产地温郁金药材有效成分含量比较［J］.浙江农业科学，2015，56（10）：1583-1586.

10.16178/j.issn.0528-9017.20151019

2015-05-11

浙江省“十二五”中药材育种专项（2012C12912-2）；国家中医药管理局中医药行业科研专项（201407002）

陶正明（1970-），男，江苏姜堰人，副研究员，从事中药栽培技术、品种选育与药材质量研究工作。E-mail：312633768 @qq.com。