UPLC法测定广西莪术、醋莪术及其水提药渣中莪术烯醇含量

梁志毅，梁丽金，曾昭君，魏 梅，雷玉婧，林伟雄

(广东一方制药有限公司 广东省中药配方颗粒企业重点实验室，广东 佛山 528244)

莪术来源于姜科植物蓬莪术(CurcumaphaeocaulisVal.)、广西莪术(CurcumakwangsiensisS. G. Lee et C. F. Liang)或温郁金(习称“温莪术”，CurcumawenyujinY. H. Chen et C. Ling)的干燥根茎[1]。广西莪术是广西的道地药材，辛、苦、温，归肝、脾经，具有行气破血、消积止痛之功效，用于治疗癥瘕痞块、瘀血经闭、胸痹心痛、食积胀痛、早期宫颈癌等[1]。莪术的主要成分为姜黄素类和莪术烯醇、莪术二酮、吉玛酮等，具有活血化瘀、行气活血、消炎止痛、祛腐生肌的作用。莪术经醋炮制后，活血化瘀、止痛作用增强[2-3]。挥发油中莪术烯醇等倍半萜类有效成分是姜科植物抗肿瘤、抗炎、抗菌作用的主要生物活性物质[4-6]，《中华人民共和国药典》中将挥发油含量作为莪术质量的评价指标，但由于莪术烯醇等倍半萜类物质极性较小，使得水提-浓缩-喷雾干燥方式制备的提取物中莪术烯醇转移率较低，表明了莪术烯醇等倍半萜类成分在提取阶段较难挥发收集，且挥发油测定法误差较大，采用一般分析方法不能最大限度地反映药材中莪术烯醇等倍半萜类有效成分的真实含量。因此，作者建立莪术烯醇含量测定的UPLC法，比较广西莪术、醋莪术及其水提药渣中莪术烯醇含量的差异性；同时采用不同方式对水提药渣进行干燥与保存研究，为水提药渣的保存和二次利用提供参考和理论依据。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

莪术药材(批号：YG1905003、YG1905004、YG1905005)，主要采自广西，经广东一方制药有限公司魏梅主任药师鉴定为姜科植物广西莪术的干燥根茎。

莪术烯醇对照品(批号：D-026-170420)，含量98%，成都瑞芬思生物科技有限公司；乙腈(批号：SY21803010)，色谱纯，默克公司；磷酸(批号：20180404)，色谱纯，天津科密欧化学试剂有限公司；其它试剂均为分析纯；水为超纯水。

H-Class型超高效液相色谱仪、TUV检测器、Empower工作站，Waters公司；ME204E型万分之一天平、XP26型百万分之一天平，梅特勒-托利多公司；111B型二两装高速中药粉碎机，浙江瑞安永历制药机械有限公司；数控KQ-500DE型超声清洗器，昆山超声仪器有限公司；MiliQ Direct 8型超纯水机，默克密理博；DHG-9146A型电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司。

1.2 方法

1.2.1 对照溶液的制备

精密称定莪术烯醇对照品适量，置于25 mL容量瓶中，加入甲醇配成422 μg·mL-1莪术烯醇储备液；精密吸取储备液1 mL于10 mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，即得42.2 μg·mL-1莪术烯醇对照溶液。

1.2.2 供试溶液的制备

取样品粉末(过4号筛得到)约1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，称重；超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称重，用70%甲醇补足；摇匀，过滤，即得供试溶液。

1.2.3 色谱条件

Waters ACQUITY UPLC BEH Shield RP C18色谱柱(2.1 mm×150 mm，1.7 μm)；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(44∶56，体积比)，等度洗脱；柱温35 ℃；检测波长262 nm；流速0.3 mL·min-1，进样量1 μL。

2 结果与讨论

2.1 UPLC图谱(图1)

图1 广西莪术及其水提药渣的UPLC图谱Fig.1 UPLC spectra of Curcuma kwangsiensis and water extract residues

2.2 线性关系考察

分别精密吸取莪术烯醇储备液10 μL、50 μL、150 μL、350 μL、600 μL、850 μL，置于1 mL容量瓶中，加入甲醇得到浓度分别为4.22 μg·mL-1、21.10 μg·mL-1、63.30 μg·mL-1、147.70 μg·mL-1、253.20 μg·mL-1、358.70 μg·mL-1的莪术烯醇对照溶液。按色谱条件进样测定，以莪术烯醇浓度(x)为横坐标、峰面积(y)为纵坐标绘制标准曲线，拟合得莪术烯醇的线性回归方程为：y=5370x-20200，R=0.9998。表明，莪术烯醇浓度在4.22～358.70 μg·mL-1范围内与峰面积线性关系良好。

2.3 精密度实验

精密吸取供试溶液，按色谱条件连续进样6次，测定峰面积。计算莪术烯醇峰面积RSD为0.18%，表明该仪器精密度良好。

2.4 重复性实验

取同一批次样品粉末6份，精密称定，按1.2.2方法制备供试溶液，按色谱条件进样测定。计算莪术烯醇含量RSD为0.95%，表明该方法重复性良好。

2.5 稳定性实验

精密吸取同一供试溶液，分别在0 h、1 h、2 h、3 h、5 h、7 h、9 h按色谱条件进样测定。计算莪术烯醇峰面积RSD为0.26%，表明供试溶液中莪术烯醇在9 h内稳定。

2.6 加标回收率实验

取已测定含量的样品粉末约0.5 g，精密称定，精密加入一定量的莪术烯醇对照品，按1.2.2方法制备供试溶液9份，按色谱条件进样测定。计算莪术烯醇平均加标回收率为97.71%，RSD为2.83%(表1)，表明该方法回收率良好。

表1 加标回收率实验结果(n=9)

Tab.1 Results of adding standard recovery experiment(n=9)

序号样品质量g样品中含量mg对照品加量mg测得量mg加标回收率%平均加标回收率%RSD%10.49243.0381.484.41492.9720.50133.0931.484.49995.0030.50043.0871.484.49194.8640.50213.0982.955.97097.3650.50153.0942.956.03299.5997.712.8360.50343.1062.956.04999.7670.50273.1024.427.542100.4580.50413.1104.427.52099.7790.50263.1014.427.50499.62

2.7 样品测定

分别取3批(编号为S1、S2、S3)广西莪术饮片、3批(编号为S4、S5、S6)醋莪术饮片及其水提后经过不同温度干燥所得药渣样品，按1.2.2方法制备供试溶液，按色谱条件进样测定，结果见表2。

表2 广西莪术、醋莪术饮片及其水提药渣中的莪术烯醇含量/%

Tab.2 Curcumenol content in Curcuma kwangsiensis,vinegar-boiled Curcuma kwangsiensis,and water extract residues/%

从表2可知，不同干燥温度下，广西莪术与醋莪术的水提药渣中莪术烯醇含量变化较小，随着干燥温度的升高，莪术烯醇含量仅呈略微上升趋势。说明干燥时间对莪术烯醇等倍半萜类的影响强于干燥温度(≤80 ℃)的影响。采用80 ℃快速烘干药渣可缩短药渣受热时长、快速有效地减少水分，不仅有利于有效成分的保留，而且也有利于水提药渣后期的保存，为水提药渣的更好利用奠定了基础。

不同温度干燥的水提药渣中莪术烯醇含量与饮片中莪术烯醇含量的比值见表3。

表3 不同温度干燥的水提药渣中莪术烯醇含量与饮片中莪术烯醇含量的比值/%

Tab.3 Proportion of curcumenol content between in water extract residues dried at different temperatures and in decoction pieces/%

从表3可知，3批不同温度干燥的广西莪术水提药渣中莪术烯醇含量与对应批次饮片中莪术烯醇含量的比值分别为：53%、48%、50%，均值为50%；3批不同温度干燥的醋莪术水提药渣中莪术烯醇含量与对应批次饮片中莪术烯醇含量的比值分别为：50%、41%、41%，均值为44%。表明，广西莪术与醋莪术经水提后，分别约有50%和44%的莪术烯醇残留在药渣中，含量很高，具有较大利用价值，可进行二次开发利用。

2.8 干燥方式对水提药渣中含水量的影响

取3批广西莪术药材，分别按《中华人民共和国药典》莪术项下醋莪术炮制方法，采用醋煮法煮至透心，炮制醋莪术饮片；同时制备广西莪术饮片。分别在广西莪术和醋莪术饮片中加入饮片投料量14倍量水，采用水提法单煎提取1.5 h；所得药渣分别进行晒干7.9 h、50 ℃烘干8.8 h、60 ℃烘干7.8 h、70 ℃烘干6.2 h、80 ℃烘干5.4 h处理；打粉，过4号筛，装入自封袋中置于干燥器内保存；取样测定含水量，比较干燥方式对水提药渣中含水量的影响，结果见表4。

表4 干燥方式对水提药渣中含水量的影响

Tab.4 Effect of drying method on water content in water extract residues

从表4可知，3批广西莪术及醋莪术的水提药渣含水量在5.36%～13.80%之间，且随着干燥温度的升高、干燥时间的延长，含水量逐渐降低。个别样品由于烘箱不同位置通风效果和实际温度不同，含水量变化趋势出现波动。表明，干燥温度越高，含水量越低，越有利于水提药渣的后期保存和二次利用。

3 结论

建立了莪术烯醇含量测定的UPLC法，比较了广西莪术、醋莪术及其水提药渣中莪术烯醇含量的差异性。结果表明，广西莪术和醋莪术水提药渣中莪术烯醇含量分别是广西莪术和醋莪术饮片中莪术烯醇含量的50%、44%，水提药渣中莪术烯醇含量仍然很高，具有较大利用价值，可根据需求进行二次开发与利用；不同干燥温度对水提药渣中莪术烯醇含量的影响较小，采用80 ℃快速烘干药渣可缩短药渣受热时长、快速有效地减少水分，不仅有利于有效成分的保留，而且也有利于水提药渣后期的保存，为水提药渣的更好利用奠定了基础。UPLC法测定莪术中莪术烯醇含量具有较好的精密度、重复性、稳定性，可用于莪术及炮制品的质量控制，为水提药渣的资源化利用提供科学依据。