干扰素释放试验在AIDS合并结核感染患者中的诊断价值

赵 磊，薛 剑，杜君晓，王瑜玲，王 伟

(石家庄市第五医院结核科/石家庄市结核病防治研究所，河北石家庄 050000)

干扰素释放试验在AIDS合并结核感染患者中的诊断价值

赵 磊，薛 剑，杜君晓，王瑜玲，王 伟

(石家庄市第五医院结核科/石家庄市结核病防治研究所，河北石家庄 050000)

目的 评价4种诊断方法对人获得性免疫缺陷综合征(AIDS)合并结核病(TB)患者的诊断价值。方法将52例人类免疫缺陷病毒(HIV)感染合并TB患者作为观察组，100例未感染HIV的TB患者为对照组，对两组患者进行结核菌素(PPD)试验、痰结核菌培养、结核抗体和γ干扰素释放试验(IGRA)进行诊断。结果对照组患者PPD试验、痰结核菌培养和结核抗体阳性率明显高于观察组患者，差异有统计学意义(P<0.01)；而IGRA阳性率两组比较，差异无统计学意义(P>0.05)；观察组IGRA阳性明显高于PPD试验、痰结核菌培养和结核抗体阳性率，均差异有统计学意义(P<0.01)。抗逆转录病毒治疗观察组患者IGRA阴性发生率明显高于阳性率，差异有统计学意义(P<0.05)。结论IGRA是诊断HIV感染合并TB的敏感方法，而抗逆转录病毒治疗可能对结果有一定的影响。

获得性免疫缺陷综合征；HIV；结核；γ干扰素释放试验

结核病(tuberculosis，TB)是全球范围内主要的传染病之一，有研究显示，全世界 60 亿人口中大约有 20 亿人口感染结核杆菌，并且每年新增TB患者 800 万至1 000 万，TB再次成为危害人类健康和生命安全的主要疾病之一[1-2]。研究显示，人感染人免疫缺陷病毒(human immunodificiency virus，HIV)后，TB的发病率增高30%～50%，根据WHO的研究显示，TB是导致获得性免疫缺陷综合征(cquired immunodeficiency syndrome，AIDS)患者死亡的首要原因，大约有25%的AIDS患者死亡原因是TB[3]，其中2010年新增110万例HIV /TB患者，当年有35万HIV感染患者死于TB，并且HIV/TB双重感染的数量与日俱增，研究一种适用于HIV感染合并TB的诊断方法已迫在眉睫，为此本研究对4种TB诊断方法在HIV感染合并TB患者中的诊断价值进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2010 年1月至2013年9月在石家庄市第五医院诊治的HIV感染合并TB患者52例(观察组)，其中男34例，女18例，平均年龄(34.23±11.32)岁。52例患者均经过 HIV 确认试验(Western blot 免疫印迹法)2次确定为阳性，其中T淋巴细胞亚群CD4+≥200 mm341例，CD4+<200 mm311例)；无症状期42例，艾滋病期10例。选取同期在本院住院治疗的TB患者100例为对照组，男65例，女35例，平均年龄(36.34±14.32)岁。两组患者均符合TB的诊断标准，且均排除急性病毒感染，严重肝、肾衰竭等病史。两组患者年龄、性别比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1结核菌素(PPD)试验及痰结核杆菌培养 PPD试验：在前臂内侧注射PPD 5个单位，72 h测量其硬结大小。痰结核杆菌培养：患者入院后连续3 d取清晨痰，由本院细菌室经验丰富的检验科医师进行培养检查。

1.2.2血清结核抗体检测 采用结核分枝杆菌抗体检测试剂盒(上海凯士佰科技有限公司提供)进行分析，具体步骤及判断方法严格按照说明书进行操作。

1.2.3γ干扰素释放试验(interferon gamma release assay,IGRA)方法 (1)血样采集：两组患者于入院次日清晨抽取空腹静脉血3 mL，置于真空肝素抗凝管中。(2)刺激采血后6 h内在生物安全柜内将静脉血加入24孔培养板内(1 mL/孔)，共5孔，每孔依次加入植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)、培养滤过蛋白-10(culture filtrate protein,CFP-10)、早期分泌抗原靶-6(early secretory antigenic target,ESAT-6)、ESAT-6/CFP-10融合抗原和生理盐水，所有操作均按生产供应商要求进行。(3)孵育于5%CO2、37 ℃细胞培养箱孵育过夜16～22 h。(4)每孔收集血浆至少300 μL，于-20 ℃保存不超过28 d。(5)采用海口维瑅瑷生物研究院生产的IFN-γ检测试剂盒检测，严格按照试剂盒要求进行操作。结果判定：当N<0.5 IU/mL时，(T-N)/(P-N) ≥0.06时判为阳性，否则为阴性；当N≥0.5 IU/mL时，(T-N)/(P-N) ≥0.85时判为阳性，否则为阴性。

1.3统计学处理 采用SPSS17.0统计软件进行分析，计数资料采用χ2检验，以P<0.05视为差异有统计学意义。

2 结 果

2.14种诊断方法阳性率观察 对照组PPD实验、痰结核菌培养和结核抗体检测阳性率明显高于观察组(P<0.01)；而IGRA阳性率两组比较，差异无统计学意义(P>0.05)；观察组IGRA阳性明显高于PPD实验、痰结核菌培养和结核分枝杆菌抗原阳性率，均差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。

表1 不同诊断方法阳性率比较[n(%)]

2.2影响IGRA阳性率相关因素分析 不同性别、感染方式及CD4+T淋巴细胞计数在HIV感染合并TB患者的IGRA阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05)，而经过抗逆转录病毒治疗HIV感染合并TB患者IGRA阴性发生率明显高于阳性率(P<0.05)，见表2。

表2 影响IGRA阳性率相关因素调查

续表2 影响IGRA阳性率相关因素调查

3 讨 论

TB是一种严重危害人类身体健康的传染性疾病病，并且21世纪以来全球范围内TB的死灰复燃趋势[4-5]。中国是全球TB高负担国家之一，以往的流行病调查中国已有1/3 以上的人口感染了结核菌，其中活动性肺TB患者450万，每年死于TB的患者约有25万，是其他各类传染性疾病死亡人数总和的2倍[6]。而且，HIV感染逐渐由高危人群向普通人群播散，HIV的感染呈现持续增加的趋势。人体感染HIV后，HIV 主要攻击人的 CD4+T细胞，从而导致机体免疫功能受损，是导致结核菌感染发展成为活动性结核患者最重要的危险因素[7]，并且相对于非HIV感染的TB患者，HIV感染合并TB的诊断和治疗更为困难，并且HIV感染合并TB因为机体免疫功能受损导致TB扩散较为迅速[8]，患者随时有生命危险，因此及时诊断并控制TB对HIV感染患者提高生存率至关重要。但HIV感染合并TB，PPD试验的假阴性、影像学结核病灶表现不典型，因此，寻找一种敏感的检测方法具有重要的临床价值和社会意义。

本研究采用PPD试验、痰结核菌培养、结核抗体及IGRA对HIV感染合并TB患者进行分析，结果显示，PPD试验、痰结核菌培养、结核抗体在单纯TB患者中的阳性率明显高于HIV感染合并TB患者，而IGRA的阳性率两组比较差异无统计学意义(P>0.05)，说明IGRA在HIV感染合并TB的诊断中具有重要的辅助诊断价值。这可能是因为传统的诊断TB方法有痰结核菌培养、PPD试验、结核抗体等检测方法在检测HIV感染合并TB中均存在不同的局限性。痰结核杆菌培养：培养周期较长，培养基2～3周未见结核杆菌，则需观察至45 d才能出最后结果[9]，会延误临床诊断，并且影响培养阳性率的因素较多，培养阳性率相对于IGRA较低。由于中国大面积接种卡介苗导致PPD试验存在假阳性，且对于HIV感染合并TB患者属于免疫低下人群，假阴性率较大[10-11]，郑素华等[12]对HIV感染合并TB患者研究发现，当患者CD4+T淋巴细胞小于200 mm3时，PPD试验无反应，因此此方法只能作为TB的辅助诊断。结核抗原常规检测方法较复杂，并且也受到免疫力的影响，导致HIV合并TB 患者阳性率同样低下。IGRA其原理是TB患者体内存在特异的效应T淋巴细胞，当在体外再次受到结核杆菌特异抗原(ESAT-6与CFP-10)的刺激时，会分泌释放IFN-γ，因此，通过检测IFN-γ的水平可以判断机体是否存在结核感染[13]。Mori等[14]进行的大模多中心实验显示，IGRA在针对TB中敏感性为89.0%，特异性为98.1%，本研究IGRA显示，对于HIV感染合并TB的敏感性80.77%，较对照组有所下降，这可能是因为IFN-γ主要由 CD4+T 细胞分泌产生，HIV感染后导致CD4+T 细胞下降，然而CD8+T 细胞、γδT 细胞也可以少量分泌IFN-γ，从而导致该试验受CD4+T淋巴细胞的影响并不十分明显[15]，因此本研究认为可以应用于HIV感染合并TB的诊断中。

为了分析导致HIV感染合并TB患者IGRA出现假阴性的因素，本研究对HIV感染合并TB患者IGRA阳性和阴性的相关资料进行了对比分析，结果显示性别、感染方式及CD4+T淋巴细胞计数对于IGRA结果影响并不明显，而经过抗逆转录病毒治疗HIV感染合并TB患者IGRA阴性发生率较高，这一结果可能是因为本研究样本量较小有关，也可能是因为经过抗逆转录病毒治疗对机体的免疫功能有影响，有待进一步研究。

综上所述，本研究认为IGRA在诊断HIV感染合并TB患者中敏感度较高，值得临床推广应用，但是本研究存在因为病例资源有限，样本量过少的局限性，导致结果难免存在偏差，因为本研究将进一步扩大样本量进行研究。

[1]Sails AD,Barrett A,Sarginson S,et al.Molecular epidemiology of Mycobacterium tuberculosis in East Lancashire 2001-2009[J].Thorax,2011,66(8):709-713.

[2]Fortún J,Martín-Dávila P,Navas E,et al.Changes in the epidemiology of tuberculosis:the influence of international migration flows[J].Enferm Infect Microbiol Clin,2011,29(9):654-659.

[3]Lawn SD,Bekker LG,Wood R.How effectively does HAART restore immune responses to Mycobacterium tuberculosis? Implications for tuberculosis control[J]AIDS,2005,19(11):1113-1124．

[4]韦海旭,席薇莲,陆利欢,等.γ-干扰素释放分析T-SPOT.TB 在结核性疾病中的诊断价值[J].临床肺科杂志,2012,17(8):1439-1444.

[5]Lalvani A.Diagnosing tuberculosis infection in the 21 st century:new tools to tackle an old enemy[J].Chest,2007,131(6):1898-1906.

[6]于兰,王黎明,唐志荣,等.HIV/AIDS 患者合并活动性结核病的诊断及方法探讨[J].中华检验医学杂志,2009,32(4):377-382．

[7]刘国华,王林,崔为国,等.HIV感染者PPD试验结果及其与CD4细胞计数的关系分析[J].中国防痨杂志,2002,24(4):195-196.

[8]安云庆,高晓明.医学免疫学[M].北京:北京大学医学出版社,2009:157-158.

[9]彭卫生,王英年,肖成志.新编结核病学[M]．2 版.北京:中国医药科技出版社,2003:138-139．

[10]Pai M,Zwerling A,Menzies D.Systematic review:T-cell-based assays for the diagnosis of latent tuberculosis infection an update[J].Ann Intern Med,2008,149(3):177-184.

[11]Chapman AL,Munkanta M,Wikinson KA,et al.Rapid detection of active and latent tuberculosis infection in HIV positive individuals by enumeration of Mycobacteriun tuberculosis specific T cells[J].AIDS,2002,16(17):2285-2293.

[12]郑素华,端木宏瑾,李拉民,等.人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者结核菌素试验反应的研究[J].中国防痨杂志,2002,24(6):320-322.

[13]Kang JY,Rhee CK,Kang NH,et al.Clinical utility of two interferon-gamma release assays on pleural fluid for the diagnosis of tuberculous pleurisy[J].Tuberc Respir Dis (Seoul),2012,73(3):143-150.

[14]Mori T,Sakatani M,Yamagishi F,et al.Specific detection of tuberculosis infection with an interferon-gamma based assay using new antigens[J].Am J Respir Crit Care Med,2004,170(1):59-64.

[15]Aichelburg MC,Rieger A,Breitenecker F,et al.Detection and prediction of active tuberculosis disease by a whole-blood interferon-gamma release assay in HIV-1-infected individuals[J].Clin Infect Dis,2009,48(7):954-962.

Diagnostic value of interferon-γ release test in acquired immune deficiency syndrome complicating tuberculosis infection*

ZhaoLei,XueJian,DuJunxiao,WangYuling,WangWei

(DepartmentofPhymatiosis,ShijiazhuangMunicipalFifthHospital/ShijiazhuangMunicipalInstituteforTuberculosisControl,Shijiazhuang,Hebei050000,China)

Objective To evaluate the value of the four kinds of diagnostic method in acquired immune deficiency syndrome(AIDS) infection complicating tuberculosis (TB).Methods 52 cases of human immunodeficiency virus(HIV) infection complicating TB were taken as the observation group and 100 cases of TB without complicating HIV infection were taken as the control group.The two groups were performed the PPD test,sputum Mycobacterium tuberculosis culture,tuberculosis antibody and interferon gamma release assay(IGRA) for conducting the diagnosis.Results The positive rate of the PPD test,sputum Mycobacterium tuberculosis culture and tuberculosis antibody in the control group were significantly higher than those in the observation group,the differences were statistically significant (P<0.01);the positive rate of the IGRA in the observation group was obviously higher than that of the PPD test,sputum Mycobacterium tuberculosis culture and tuberculosis antibody,the differences had statistical significance (P<0.01).The negative occurrence rate of the IGRA in the observation group treated by the antiretroviral therapy was obviously higher than the positive rate,the difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion The IGRA may be a sensitive method for diagnosing HIV infection complicating TB and the antiretroviral therapy may have a certain impact on the results.

acquired immunodeficiency syndrome;HIV;tuberculosis;interferon gamma release assay

·临床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2015.11.014

石家庄科学技术研究与发展计划基金项目(121461833)；河北省科技技术研究与发展计划项目(12277746)。

赵磊(1982-)，主治医师，硕士研究生，主要从事结核病的诊断与治疗研究。

R521

A

1671-8348(2015)11-1484-03

2014-09-08

2015-01-05)