血清Hepcidin 和白介素6 在胆道闭锁合并贫血患儿中的临床意义及其关系

高 飞，郑 浩，赵学芹，顾晓琼，邱先桃，王洁琳，陈小娟，郭彩娇

胆道闭锁是由于肝脏内外胆管纤维化导致胆汁排出障碍所致，该病在亚洲发病率较高。虽然Kasai 手术能够解决部分胆道闭锁患儿胆管梗阻及胆汁引流问题，且可获得较好的短期疗效，但日后患儿肝脏、胆管炎症和纤维化仍会持续进行，大多数胆道闭锁行Kasai 手术患儿最终因为严重的肝硬化和门静脉高压威胁生命而需要进行肝移植手术［1］。因此，探讨胆道闭锁的病因对预防和治疗该病显得尤为重要。目前胆道闭锁病因尚不清楚，但多倾向于大量细胞因子尤其是炎性因子。Hepcidin 是一种分子量较小的多肽，由肝脏生成并分泌，其与炎性反应、体内铁代谢及贫血存在密切关系，近年来已引起人们广泛关注［2］。白介素6 (IL－6)作为具有代表性的炎性细胞因子，在胆道闭锁形成的两个病理过程中(胆管炎性反应和肝纤维化过程)均发挥了重要作用。本研究采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测胆道闭锁合并贫血患儿血清Hepcidin 和IL－6 水平，旨在探讨Hepcidin 和IL－6 在胆道闭锁合并贫血患儿中的临床意义及其关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012 年5 月—2014 年2 月我院收治的50 例胆道闭锁合并贫血患儿作为观察组，以Hb ＜120 g/L 作为贫血的诊断标准，排除肝硬化〔天门冬氨酸氨基转移酶(AST)/血小板(PLT)比值指数(APRI) ＜0.945［3］〕、肿瘤及其他原因导致的贫血。选择同期50 例体检健康者作为对照组，均无贫血、肝胆疾病病史。两组受检者男女比例均为1∶1。

1.2 方法 两组受检者均于清晨空腹抽血，采用Sysmex－5000 血细胞分析仪检测患者Hb、PLT，剩余全血3 000 r/min离心10 min，分离血清，采用HITACH 7600 生化分析仪检测血清AST 水平，确保观察组纳入患者的APRI ＜0.945。剩余血清置－80 ℃冰箱保存，采用ELISA 检测两组受检者血清Hepcidin 和IL－6 水平，Hepcidin 试剂盒购自美国DRG 公司，IL－6 试剂盒购自R＆D 公司，操作严格按照说明书进行。

1.3 统计学方法 应用SPSS 13.0 统计学软件进行数据处理，计量资料以(x ±s)表示，采用两独立样本t 检验;变量间相关性采用Spearman 相关性分析。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清Hepcidin 及IL－6 水平 观察组血清Hepcidin 及IL－6水平均高于对照组，差异有统计学意义 (P ＜0.05，见表1)。

表1 两组血清Hepcidin 和IL－6 水平比较Table 1 Comparison of the levels of serum Hepcidin and IL－6 between the two groups

2.2 相关性分析 将观察组患儿Hb 分别与血清Hepcidin、IL－6进行相关性分析，结果显示胆道闭锁合并贫血患儿的Hb与Hepcidin、IL－6 均无直线相关关系(P ＞0.05);观察组患儿血清Hepcidin 与IL－6 进行相关性分析，结果显示胆道闭锁合并贫血患儿血清Hepcidin 与IL－6 呈正相关(r =0.385，P＜0.05)。

3 讨论

胆道闭锁病因不同，但临床表现相同。贫血作为该病的伴随症状，可能参与胆道闭锁的整个发病过程。多数研究者认为，炎症状态下体内巨噬细胞等产生的IL－6、IL－1 等细胞因子刺激肝细胞合成Hepcidin，促使Hepcidin 表达升高。过度表达的Hepcidin 可与小肠上皮基底面和肝细胞、巨噬细胞表面的特定蛋白结合，使之内化降解，导致肠道吸收铁减少，巨噬细胞与干细胞释放铁受阻导致铁利用障碍，临床上出现贫血及肝脏内铁过度负荷［4］。过度负荷的铁作为一种强力催化剂，可以启动或催化Haber－Weiss 反应［5］，促进氧自由基的产生，导致肝细胞亚细胞膜磷脂过氧化反应，特别是对线粒体和微粒体膜的过氧化损伤，而其反应产物可加重炎性反应及刺激肝星形细胞，促进胶原的合成，形成肝纤维化，进而可发展为肝硬化。与此同时，Hepcidin 是由肝脏合成并分泌的，肝细胞的病变可能会影响Hepcidin 的合成，该结论得到多数研究的支持，Detivaud 等［6］首先发现随着肝硬化程度加重，肝脏Hepcidin 的mRNA 和尿Hepcidin 水平均明显下降。因此，本研究中入选的研究对象以APRI ＜0.945 作为肝纤维化的排除标准。另外，IL－6作为炎性因子，除了导致肝细胞大量坏死外，还可促进成纤维细胞增生和I、Ⅲ型胶原mRNA 表达，引起细胞外基质增多［7］;参与转化生长因子(TGF)、肿瘤坏死因子(TNF)相互作用并形成正反馈循环，加剧肝纤维化的进程［8］。

国内外大量文献显示，贫血与Hepcidin 及IL－6 存在相关性，如Detivaud 等［6］的研究结果显示，Hepcidin mRNA 合成水平 与 血Hb 水 平 呈 正 相 关;Sharma 等［9］研 究 结 果 显 示，Hepcidin与Hb 呈负相关;而本研究结果显示，Hb 与Hepcidin、IL－6均无直线相关关系。这可能与研究对象不同有关，本研究入选的研究对象包含铁储备显著减少的典型缺铁性贫血患儿，另外与样本量小也有关。综上所述，胆道闭锁合并贫血患儿Hepcidin 的异常增多引起铁代谢、炎性因子的异常变化，无论是通过内分泌机制还是体循环均对肝脏纤维化的进程起到了重要作用，为胆道闭锁的病因学研究提供了一条新的思路。

1 曹志清，汤绍涛，阮庆兰. 胆道闭锁治疗研究现状［J］. 中华小儿外科杂志，2005，26 (6):326－328.

2 Luukkonen S，Punnonen K. Serum pro－hepcidin concentrations andtheir responses to oral iron supplementation in healthy subjeets manliest considerable inter－individual variation ［J］. Clin Chem Lab Med，2006，44 (11):1361－1362.

3 贺小张，张明满，李英存，等. 天冬氨酸转氨酶和血小板比值对胆道闭锁肝纤维化预测价值的研究［J］. 中华小儿外科杂志，2013，34 (3):176－179.

4 Martinelli AL，Ramalho LN，Zucoloto AS. Hepatic stellate cells in hepatitis C patients:Relationship with liver iron deposits and severity of liver disease ［J］. J Gastroenteml Hepatol，2004，19 (1):91－98.

5 Hunter HN，Fulton DB，Ganz T，et al. The solution structure of human hepcidin，a peptide hormone with antimicrobial activity that is involved in iron uptake and hereditary hemochromatosis ［J］. J Biol Chem，2002，277 (40):37597－37603.

6 Detivaud L，Nemeth E，Boudjema K，et al. Hepcidin 1evels in humans are correlated with hepatic iron stores，hemoglobin 1evels，and hepatic function ［J］. Blood，2005，106 (2):746－748.

7 Novobrantseva TI，Majeau GR，Amatucci A，et al. Attenuated liver fibrosis in the absence of B cells ［J］. J Clin Invest，2005，115(11):3072－3082.

8 陈晓红，何有成，周元平，等. TGF－β1、TNF－α 及IL－6 与肝纤维化的关系［J］. 上海免疫学杂志，2001，21 (6):364－365.

9 Sharma S，Nemeth E，Chen YH，et al. Involvement of hepcidin in the anemia of multiple myeloma ［J］. Clin Cancer Res，2008，14 (11):3262－3267.