妇科冲洗粉质量标准研究

周红玲 刘 阳

（湖南中医药高等专科学校附属第一医院 湖南 株洲 412000）

妇科冲洗粉为我院妇科中医医师潜心研制的复方中药制剂，由蛇床子、马鞭草、地肤子等中药所组成。该制剂具有清热燥湿，杀虫止痒。用于皮肤瘙痒，妇女阴痒等治疗。本方为外用药，先用开水适量浸泡30分钟后去渣坐浴。该制剂原质量标准有专属性不强的化学鉴别和重现性差的蛇床子薄层色谱鉴别，因此对其质量标准进行重新研究。本方中马鞭草为马鞭草科植物马鞭草Verbena officinalis L.的干燥地上部分［1］，其主要有效成分为熊果酸，具有抗炎、抗菌和抗病毒的作用；蛇床子为伞形科植物蛇床Cnidium monnieri（L.）Cusson的果实［1］，其主要有效成分蛇床子素具有温肾壮阳，燥湿，祛风，杀虫等作用。为有效对该制剂进行质量控制，本文建立薄层色谱法鉴定马鞭草，并建立HPLC法控制方中主要有效成分蛇床子素的含量。

1 仪器与试药

LC-10ATvp高效液相色谱仪（日本岛津公司），SPD-10Avp紫外检测器（日本岛津公司），N2000色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所），薄层色谱扫描影像系统（瑞士卡玛公司），KQ3200型超声波清洗器（功率300W，频率50kHz，昆山市超声仪器有限公司）。

对照药材：马鞭草（批号：121002-200703，中国药品生物制品鉴定所）；

对照品：熊果酸（批号：110742-200516，中国药品生物制品鉴定所）；蛇床子素（批号：110822-200305，中国药品生物制品鉴定所）；

妇科冲洗粉（湖南中医药高等专科学校附属第一医院，60g／袋，批号：110505、110918、111105）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 薄层色谱方法与结果

取本品5g，加80%甲醇60ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取马鞭草对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸（20∶5∶8∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图1。

3 蛇床子素含量测定方法与结果

3.1 液相色谱条件：色谱柱：Hpersil BDS C18（200mm×4.6mm×5μm）；流动相：乙腈-水（55∶45）；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃；检测波长：322nm；进样量：10μl。

3.2 对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时的蛇床子素对照品10.54mg，置50ml量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.211mg·ml-1蛇床子素对照品溶液，精密吸取上述溶液5ml置25ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度42.2μg·ml-1蛇床子素对照品溶液。

3.3 供试品溶液的制备：取本品粉末约0.7g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300W，频率50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得。

3.4 提取溶剂的选择：分别用乙醇、乙酸乙酯作为提取溶剂照上法平行处理。精密吸取对照品溶液（42.2μg·ml-1）与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，并计算，结果见表1。结果表明，不同的提取溶剂对样品中蛇床子素钠的含量有影响，其中甲醇和乙酸乙酯较高，考虑色谱评价系统中理论塔板数、分离度和对称因子三个参数的结果，故选择甲醇作为最佳提取溶剂。

表1 提取溶剂的选择

3.5 阴性对照溶液的制备：按妇科冲洗粉制法制成缺蛇床子的阴性样品，按3.3项下同法制成阴性对照溶液。

3.6 方法学考察

3.6.1 专属性考察：分别精密吸取3.2项下对照品溶液、3.3项下供试品溶液以及3.5项下阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，结果显示，阴性对照溶液对测定结果无干扰，见图2-4。

3.6.2 线性关系考察：精密吸取对照品溶液（0.211mg·ml-1）1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml置25mL量瓶中，加入乙醇稀释至刻度，摇匀，即得（含蛇床子素）浓度分别为8.4μg·ml-1、16.9μg·ml-1、33.8μg·ml-1、50.6μg·ml-1、67.5μg·ml-1的标准品溶液，分别精密吸取上述各溶液10μl注入液相色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标，浓度为（μg·ml-1）为横坐标，绘制标准曲线。其回归方程为：Y=17102519.02X-6640.20，R=0.9999（n=5）。结果表明：蛇床子素钠对照品在8.4～67.5μg·ml-1范围内线性关系良好。

3.6.3 重复性试验：取同一批号（批号：110505）样品细粉6份，照3.3项下方法平行操作，精密吸取对照品溶液（42.2μg·ml-1）及上述供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，结果蛇床子素平均含量为0.14%（g／g），RSD=0.97%，结果表明该方法的重复性较好。

3.6.4 准确度试验：取已测定含量的同一批号（批号：110505）样品细粉（含蛇床子素1.48mg／g）6份，约0.35g，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入对照品溶液（42.2μg·ml-1）12.5ml，照供3.3项下方法平行操作，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，结果平均回收率为97.88%，RSD=0.94%，表明本方法回收率结果良好，见表2。

3.6.5 稳定性试验：取4.3项下同一供试品溶液（批号：110505），分别于配制后的0、2、4、8、12小时，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，结果RSD为1.45%，表明供试品溶液在配制后12小时内稳定。

3.7 样品含量测定：分别吸取3.2项下对照品溶液和3.3项下供试品溶液注入液相色谱仪，按2项下色谱条件测定，并按外标法计算蛇床子素的含量，结果3批样品含量结果见表3，根据以下结果确定妇科冲洗粉中蛇床子素含量不得低于1.30mg／g。

表2 准确度试验结果表

表3 样品含量测定结果

4 讨论

4.1 蛇床子素（欧芹酚甲醚）为香豆素类化合物，不溶于水和石油醚，易溶于甲醇、丙酮和氯仿等溶剂，为获得最大提取率，并且结合试剂的毒性大小，本文考虑用毒性较小的甲醇、乙醇和乙酸乙酯作为提取溶剂，试验结果表明甲醇和乙酸乙酯提取的蛇床子素含量相近并高于乙醇，但乙酸乙酯因为峰型矮胖，色谱系统评价参数中理论塔板数明显低于甲醇，且对称性较差，因此综合上述考虑，选择甲醇作为最佳提取溶剂。

4.2 原质量标准中化学鉴别专属性较差，蛇床子的薄层色谱鉴别重现性较差，通过本研究改进，用马鞭草对照药材和熊果酸对照品同时对本方中君药马鞭草进行定性鉴别，用高效液相色谱法对君药蛇床子中主要有效成分蛇床子素进行定量控制，且方法简便，准确性和重现性较好，为有效控制妇科冲洗粉的质量提供定性定量的依据。

［1］ 中华人民共和国国家药典委员会，中国药典［S］.一部.中国医药科技出版社，2010

［2］ 董文桑，刘蓉，瞿发林.HPLC法测定镇痛宁胶囊中蛇床子素含量［J］.中国药师，2009，12（6）：829-830

［3］ 唐勇，周春菊.高效液相色谱法测定阴炎净洗液中蛇床子素含量［J］.中国药业，2008，17（21）：36

［4］ 李小安，张军科，史美佳，等.HPLC法同时测定阿娜尔妇洁液中蛇床子素和欧前胡素的含量［J］.西北药学杂志，2008，23（3）：139-141