中药商陆利尿作用的实验研究

贾金萍，邢 婕，秦雪梅(山西大学中医药现代研究中心，太原 030006)

中药商陆(Radix Phytolaccae)为商陆科植物商陆(Phytolacca acinosa Roxb.)或垂序商陆(Phytolacca americana L.)的干燥根，为传统中药，历版中国药典均有收载，具有泻下逐水、解毒散结之功效，用于水肿涨满，大便秘结，小便不利;外治痈肿。临床上常用于肾性、心源性及肝性腹水［1，2］。第二军医大学的易扬华教授发现商陆皂苷及其皂苷元均无利尿作用［3］。目前，有关商陆利尿活性部位系统研究还未见报道。本文研究了商陆不同部位的利尿作用，比较其作用强度，为探讨传统中药商陆的利尿活性部位及机制提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 健康Wistar大鼠，雄性，体重(250±20)g，由山西医科大学实验动物中心提供。

1.1.2 药物与试剂 商陆:采购于河南省禹州市中药材市场，经山西省药品检验所中药室鉴定为商陆科植物垂序商陆(Phytolacca americana L.)的干燥根;氢氯噻嗪(山东鲁南制药厂);生理盐水(山东华鲁制药有限公司);其他试剂均为分析纯。

1.1.3 仪器 5 L超临界萃取装置:江苏华安超临界萃取公司生产;大鼠代谢笼:淮北正华生物仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 商陆不同部位制备 取商陆药材粗粉5 000 g，依次用超临界CO2流体、正丁醇、水提取;收集超临界CO2萃取部位(S-1-1);再将正丁醇、水提取提取液浓缩至膏状，真空干燥后，得到正丁醇部位(S-1-2)及水部位(S-1-3)。另取商陆药材细粉70 g，经炽灼燃烧灰化至恒重，得到商陆灰分(S-1-4)。再将正丁醇提取物(S-1-2)分成两份，分别以溶剂法和酸碱法进行分离。一份采用溶剂法分离，即将正丁醇提取物依次用乙醚、乙酸乙酯超声振荡提取，分别浓缩，干燥，得到乙醚部位(S-2-1)、乙酸乙酯部位(S-2-2)及正丁醇残余部位(S-2-3)。另一份采用酸碱法分离，将正丁醇提取物采用酸、碱及阳离子交换树脂处理，得到两部分，其中一部分经检测主要含生物碱成分，即商陆粗生物碱部位(S-3-1)。另一部分经检测主要含皂苷类成分，即商陆粗皂苷部位(S-3-2)。再将商陆粗生物碱和商陆粗皂苷按商陆生药材量1∶1混合得到商陆粗生物碱和粗皂苷的混合部位(S-3-3)。样品制备流程见图1。

图1 样品制备流程图Figure 1 The process of preparation of different fractions

1.2.2 供试药液的制备 将1.2.1得到的商陆各部位用含0.3%CMC-Na生理盐水配制成相当于商陆原药材17 g/100 ml的混悬液。阳性对照药氢氯噻嗪，配制成 0.4 mg/ml的0.3%CMC-Na 生理盐水液，备用。

1.2.3 筛选合格实验动物 取健康雄性Wistar大鼠，体重(250±20)g，按照随机数表放入已标号的代谢笼(l只/笼)，喂养1-2 d，自由饮水，观察大鼠尿量是否稳定。实验前18 h禁食，自由饮水。用药前按2.5 ml/100 g生理盐水灌胃大鼠，收集2 h的尿量，尿量超过生理盐水灌胃量40%者为合格动物［4，5］。

1.2.4 利尿实验［6-8］经筛选合格的大鼠，随机分组，其中包括空白组(0.3%CMC-Na生理盐水)，阳性对照组(氢氯噻嗪)及商陆各部位组。实验前大鼠18 h禁食不禁水。实验时，先以2.5 ml/100 g灌胃给予生理盐水，30 min后，分别按2.5 ml/100 g灌胃给予0.3%CMC-Na生理盐水、氢氯噻嗪及商陆各部位。给药后压迫大鼠下腹，使膀胱内余尿排尽，置代谢笼中，开始计时，每隔1 h记录1次尿量，记录7 h，分别计算0-2 h尿量，2-7 h及0-7 h累积尿量。

2 结果

2.1 商陆不同极性部位对大鼠尿量的影响

商陆超临界CO2萃取物(S-1-1)、商陆正丁醇提取物(S-1-2)、商陆水提取物(S-1-3)及商陆灰分(S-1-4)对生理盐水负荷大鼠累积排尿量的影响，结果见图2。从0-2 h累积尿量得出，S-1-1不仅没有促进大鼠排泄尿量的作用，还有一定的抑制趋势。S-1-2有一定的利尿作用，但没有氢氯噻嗪强。S-1-3及S-1-4均有一定的利尿趋势，可能与其中含有无机盐成分有关。从2-7 h累积尿量得出，S-1-2与空白对照组、氢氯噻嗪组均有统计学差异(P＜0.05)，说明S-1-2有明显的利尿作用。其他组均与空白对照组比较无统计学差异(P＞0.05)。从0-7 h累积尿量看，S-1-2与氢氯噻嗪作用相当，与空白组有统计学差异(P＜0.05)，说明S-1-2能显著增加生理盐水负荷大鼠的尿量，且与氢氯噻嗪相比利尿作用缓和持久。而S-1-1与空白组比较没有显著性差异(P＞0.05)，与氢氯噻嗪组比较有统计学差异(P＜0.05)，说明S-1-1没有利尿作用;S-1-3及S-1-4均与空白组和氢氯噻嗪组均无统计学差异(P＞0.05)，说明S-1-3和S-1-4对生理盐水负荷大鼠尿量有一定影响。

图2 商陆不同极性部位对大鼠排尿量的影响Figure 2 Effect of different fractions of Phytolacca americana L.on urinary volume in rats

2.2 商陆正丁醇提取物不同萃取部位对大鼠尿量的影响

从图3得出，通过0-2 h，2-7 h及0-7 h大鼠的累积尿量，商陆乙醚提取物(S-2-1)、乙酸乙酯提取物(S-2-2)与空白对照组比较无显著性差异(P＞0.05)，与氢氯噻嗪组相比有统计学差异(P＜0.05)，说明S-2-1、S-2-2无利尿作用。而正丁醇残余物(S-2-3)，在0-2 h与空白对照组相比差异均无显著性(P＞0.05)，与氢氯噻嗪组有显著性差异;在2-7 h，与空白对照组有显著性差异，说明S-2-3具有一定的利尿作用;从0-7 h累计尿量看，S-2-3与空白对照组和氢氯噻嗪组相比差异均无统计学意义(P＞0.05)，说明S-2-3有一定利尿趋势。

图3 商陆正丁醇部位的不同萃取部位对大鼠尿量的影响Figure 3 Effect of different fractions of n-butylalcohol fractions of Phytolacca americana L.on urinary volume in rats

2.3 商陆粗生物碱与粗皂苷对大鼠尿量的影响

从图4 看出，商陆粗皂苷(S-3-1)和商陆粗生物碱(3-3-2)对生理盐水负荷大鼠无利尿作用。而商陆总皂苷和总生物碱混合物(S-3-3)在0-7 h的利尿作用与氢氯噻嗪相当(P＞0.05)，而0-2 h利尿作用比氢氯噻嗪组弱，在2-7 h利尿作用强于氢氯噻嗪(P＜0.05)。说明S-3-3的利尿作用与S-1-2作用一致，能显著增加生理盐水负荷大鼠的尿量，但与氢氯噻嗪相比利尿作用缓和持久。

图4 商陆粗皂苷、粗生物碱对大鼠尿量的影响Figure 4 Effect of crude alkaloids and crude saponins of Phytolacca americana L.on urinary volume in rats

3 讨论

中药商陆国内外自古均用作利尿剂，在临床上广泛用于治疗肾性、心源性及肝性腹水。但目前缺乏对商陆利尿作用物质基础的研究。通过本研究表明，商陆利尿的物质基础可能是商陆正丁醇提取物中商陆粗皂苷和粗生物碱的混合物，而且发现商陆粗皂苷和粗生物碱单独使用对大鼠尿量没有明显的影响，推测可能是商陆粗生物碱和粗皂苷成分之间相互协同、相互促进类似复方的作用，并验证了商陆在临床上用于治疗水肿的合理性。同时，在实验过程中，发现商陆粗皂苷能导致大鼠出现腹泻的现象，而与粗生物碱混合使用后，大鼠粪便正常，说明商陆成分之间存在减毒的作用。并再次验证了商陆皂苷无利尿作用。另外，商陆灰分对大鼠排尿量有一定影响，但作用较弱，说明商陆中无机成分不是商陆利尿的主要物质基础，可能起附加作用，与文献报道［9-11］一致;商陆与氢氯噻嗪相比，商陆利尿作用缓和持久，故可避免西药利尿作用快带来的电解质紊乱等副作用，尤其对于治疗慢性水肿疾病研究具有一定价值。

［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草精选本(上册)［M］.上海:上海科学技术出版社，1998:372-381.

［2］李忠芳，田耀平.中药商陆的研究进展［J］.安徽农学通报，2013，19(5):108-112.

［3］易扬华，王祝禄.商陆有效成分研究［J］.中草药，1984，15(2):7-11.

［4］ 陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社，1993:33.

［5］王蕾，姚东云，马红梅，等.中药利尿药理实验动物筛选方法探讨［J］.中国比较医学杂志，2006，16(11):694-696.

［6］孙艳，张琳，王启隆，等.4种茶叶水提物的利尿作用［J］.沈阳药科大学学报，2011，28(12):973-975.

［7］吴燕，欧阳臻，赵明，等.桂苓神术汤及其有效部位的利尿作用［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18(4):169-172.

［8］武蕾蕾，才玉婷，常乐，等.锦灯笼醇提取物对大鼠的利尿作用研究［J］.牡丹江医学院学报，2012，32(2):2-6.

［9］ 原思通，王祝举，程明.中药商陆的研究进展(Ⅰ)［J］.中药材，1991，14(1):46-49.

［10］原思通，王祝举，程明.中药商陆的研究进展(Ⅱ)［J］.中药材，1991，14(3):46-48.

［11］原思通，王祝举，程明.中药商陆的研究进展(Ⅲ)［J］.中药材，1991，14(4):42-45.