HPLC法测定盐酸美沙酮口服溶液中盐酸美沙酮的含量

严明娟 钱砚燕

1.云南省药物依赖防治研究所；2.昆明振华制药有限公司，云南昆明650000

盐酸美沙酮（Methadone hydrochloride）属于人工合成的二苯甲烷类麻醉性镇痛药之一，并且是当今许多国家用于戒毒和维持疗法的一种有效药物[1-2]。在当前，国内对阿片类的成瘾者主要采取盐酸美沙酮口服溶液维持治疗的方式。盐酸美沙酮含量的测定选择紫外分光光度法是以国家药品标准WS1-(X-514)-2003Z 为依据；而2010年版《中国药典》（(二部）规定采用HPLC法测定盐酸美沙酮口服溶液中盐酸美沙酮的含量。各取4个批次比较两者含量测定结果，见表1，表2。

表1 紫外分光光度法测盐酸美沙酮含量

表2 HPLC法测盐酸美沙酮含量

试验结果表明：采用不同的方法测定，并不过大影响盐酸美沙酮口服溶液中盐酸美沙酮的含量。但HPLC法较紫外分光光度法却有着简单、快速、准确的优势突出，比较适合推广，因此建立了HPLC法测定盐酸美沙酮口服溶液中盐酸美沙酮的含量，该文结合该我所紫外分光光度法实践，对HPLC法测定盐酸美沙酮口服溶液中盐酸美沙酮的含量进行回顾分析。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

①紫外分光光度法仪器：紫外分光光度计（TU-1800，北京普析通用仪器有限责任公司）；岛津电子分析天平BT25S。②HPLC法仪器：岛津C-R4A型数据处理机；岛津LC-2010A型高效液相色谱仪。

1.2 试药

由中国药品生物制品检验所提供盐酸美沙酮对照品，符合药典规格（含量:100.0%，批号：171243-200602）。

盐酸美沙酮口服溶液：经云南省药物依赖防治研究所生产，批号（紫外分光光度法）：120401、120402、120403、120404、120405、120406、120407、120408、120409、120410；批号（HPLC法）：130401、130402、130403、130404、130405、130406、130407、130408、130409、130410。

规格为1 mL∶1 mg。优级纯的甲醇和纯化水；别的试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 紫外分光光度法测定方法

测定以国家药品标准WS1-(X-514)-2003Z 为依据进行，在353 nm 波长处测定所取对照品溶液、样品溶液的吸光度。

2.2 HPLC法测定方法

测定以《中国药典》2010年版(二部) 附录V A 高效液相色谱谱法为依据进行。

色谱条件及系统适用性试验。Spherisorb C18 色谱柱 （5×200 mm，大连物化所）；流动相：无水甲醇-四氢呋喃-水（24∶16∶60）；流速：0.6 mL/min；柱温：25 ℃；检测波长：λ=270 nm；用2 mol/L磷酸或氢氧化钠溶液作为流动相调节pH 到6.0；灵敏度：0.02AUFS。定量方法：外标峰面积标准曲线法。

含量测定方法。精密量取盐酸美沙酮口服溶液10 μL，注入液相色谱仪进行测定，并对色谱图进行记录；按外标法计算峰面积，经10次测定10批样品，平均含量分别为101.69%，

100.45 %，104.50%，103.00%，99.00%，97.60%，100.20%，98.73%，100.12%，97.92%；并与国家药品标准WS1-(X-514)-2003Z 中紫外分光光度法的测定方法，运用相关仪器进行对比实验，同样测定了10次，其平均结果分别相应为：99.28%，98.56%，98.83%，99.01%和100.45%，100.99%，99.37%，99.19%，99.10%，98.30%。

线性关系。把盐酸美沙酮对照品25 mg 准确称取，溶解是加入甲醇后并对其进行稀释，按照25 mL 定容，进行配置盐酸美沙酮标准溶液的含量为1 mg/mL。将上述色谱作为分析标准，一一分析进标准溶液1、3、5、7、10、12 μl，并做记录行色谱图工作，测算各次的峰面积。盐酸美沙酮含量X 为横坐标，峰面积Y 为纵坐标，做线性回归分析，盐酸美沙酮的浓度在10～100 μg/mL 的范围内与其峰面积呈良好线性关系，线性方程为Y=2.2×102X+4.5×102，相关系数r=0.9998（n=6）。

试验回收率。先取30 mg 空白基质，分别按6份精密称定，再各自放入50 mL 量瓶之中，分别把对照品适量的盐酸美沙酮精密加入并称定，并加入流动相溶解让其含约相当于样品量的80%、100%、120%盐酸美沙酮的量，测定以含量测定法为依据行，计算后获得99.8%的平均回收率，0.85%的RSD。试验没有受到空白基质及溶剂的干扰，见表3。

表3 回收率试验

精密度试验。分别先取6份连续进样的盐酸美沙酮对照溶液以及样品溶液，在同一日内完成日内差试验测定，平均为0.57%（n=6）；测定日间差试验在连续5 d 内进行，平均为0.66%（n=6）。

重复性试验。6份溶液样品做盐酸美沙酮的连续测定，10 μL的进样，0.5%的RSD。

溶的稳定性试验。在室温下取对照溶液及样品溶液放置24 h，接着每隔1 h 进样10 μL，测定其峰面积，得出对照溶液及样品品溶液峰面积稳定性比较好，1.0%RSD。

3 讨论

盐酸美沙酮作为常用的一种麻醉性镇痛临床药物，当前已经其为被很多国家用于有效进行戒毒和维持疗法的一种药物。属于二苯基甲烷类的美沙酮，也属于阿片受体激动剂之一，能在中枢μ 和阿片受体产生激活，同时也能非竞争性拮抗NMDA 受体。对于人体能够产生包括镇痛、缩瞳、呼吸抑制、抗利尿等一系列药理作用效应的美沙酮。所组成的由左旋和右旋异构体混合的消旋体基本都是临床所用的美沙酮。左旋体几乎成为其镇痛作用的主要来源，而阿片受体则主要对中枢神经系统产生作用。在美沙酮与μ 受体的两者之间的亲和力极强。

在研究结果中，笔者还发现，美沙酮这一受体拮抗剂是属于非竞争性的，通过拮抗NMDA 受体还可以产生一种镇痛效果。口服盐酸美沙酮后能完全吸收，有着比较大的脂溶性，能高度结合血浆蛋白（85%），也能很好的与α 酸性糖蛋白融合，遍布于体内，特别是肝、脾脏、肺和肾等部位。利用度高的生物（90%），与3倍的吗啡的大体相当[3]。血药浓度峰值由于胃肠道给药3 h 而达到，其能能维持2～6 h 的血峰浓度。15 h 的t1/2，经过口服后镇痛作用能有效发挥，并能发挥24～32 h 的抑制戒断症状作用。0.48～0.86 mg/L 为治疗的血液质量浓度，2 mg/L 为中毒的血液质量浓度，致死血液有着>4 mg/L 的质量浓度[4-5]。在肝脏进行代谢活动，其中药量没发生变化的比服入量要少于0%可以从尿中和大便中排出来。选用甲醇-水系统作为流动相来进行盐酸美沙酮口服液中盐酸美沙酮含量的测定，对于色谱柱的使用寿命的延长有利，实验经费也可节约，从pH值在5.0～7.0 稳定来考虑，因而调节pH值为6.0。

按国家药品标准WS1-(X-514)-2003Z 中紫外分光光度法进行盐酸美沙酮含量的测定，存在一定的不足。《中国药典》2010年版(二部)采用HPLC法测定盐酸美沙酮的含量。在该研究中用HPLC法对盐酸美沙酮口服溶液中的盐酸美沙酮的含量进行测定，其结果证明这一方法建起的HPLC法不仅非常准确灵敏、操作不复杂，而且有着很高的回收率，是比较好的质量控制盐酸美沙酮口服液的方法。

[1]肖国椿，肖李莉，赖朝东,等.美沙酮与丁丙诺啡联合梯度治疗1028例海洛因依赖者的临床疗效分析[J].赣南医学院学报，2001（21）：136.

[2]何艳，赵幸福，杨荷叶.美沙酮与丁丙诺啡治疗海洛因依赖的对照研究[J].健康心理医学杂志，2001（9）：295.

[3]林彩，代青，刘松青,等.高效液相色谱法测定人血浆中盐酸美沙酮浓度[J].中国药物依赖性杂志，2003，12(2)：126.

[4]王文甫.关于盐酸美沙酮维持治疗应考虑的几个问题[J].中国药物滥用防治杂志，2004(4)：244.

[5]徐本树，率银良，王志强，等.盐酸美沙酮维持治疗临床疗效观察[J].中国药物滥用防治杂志，2005(2):72.