RP-HPLC法测定香连胶囊中盐酸小檗碱的含量

徐庆辉

(安徽省黄山市食品药品检验研究所，安徽黄山 245000)

香连胶囊由黄连(吴茱萸制)及木香提取加工制成，用于湿热痢疾，里急后重，腹痛泄泻;菌痢，肠炎。其中黄连清热燥湿，泻火解毒。用于湿热痞满，呕吐吞酸，泻痢，黄疸，高热神昏，心火亢盛，心烦不寐，血热吐衄，目赤，牙痛，消渴，痈肿疔疮;外治湿疹，湿疮，耳道流脓。黄连主要成分为盐酸小檗碱，主要用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感染、眼结膜炎、化脓性中耳炎等有效。我们以盐酸小檗碱为对照品，参照有关文献［1－10］，采用 HPLC法测定了香连胶囊中盐酸小檗碱含量，并以此作为质量控制指标，试验结果表明，该法简便快速，稳定可靠。

1 仪器与材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪，日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪;SPD-10A紫外检测器;N2000色谱工作站;AB135-S十万分之一电子天平;ADVENTURER(AR1140)万分之一电子天平。

1.2 试药 盐酸小檗碱对照品:中国药品生物制品检定所，批号:110713－200911(供含量测定用，含量为86.8%);香连胶囊三批样品:由本公司提供，批号:201202016，201202018，201202020。乙腈为色谱纯，美国天地公司。

2 方法与结果

2.1 色谱条件系统适用性试验

2.1.1 色谱条件 色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱(Shim －Pack VP －ODS，250 L ×4.6);流动相为0.05 mol·L－1磷酸二氢钾溶液 － 乙腈(50∶50，每1 000 mL流动相含十二烷基硫酸钠1.7 g);检测波长:在200～400 nm波长进行扫描对照品溶液，盐酸小檗碱的最大吸收波长在265 nm，选择其为检测波长;柱温:25 ℃，流速:1.0 mL·min－1。

2.1.2 系统适用性试验 在此条件下分别精密吸取下述对照品溶液、阴性对照溶液与供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图1～3。可见分离良好，阴性对照无干扰，供试品溶液的盐酸小檗碱峰与相邻峰达到基线分离。其保留时间为14.7 min，色谱柱理论板数按盐酸小檗碱峰计算约为16 000。

图1 盐酸小檗碱的HPLC图谱

图2 阴性对照的HPLC图谱

2.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品7.35 mg，置25 mL量瓶中，用甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量1 mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，作为对照品溶液。

图3 供试品的HPLC图谱

2.3 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物，碾细，取0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇－盐酸(100∶1)的混合溶液50 mL，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用甲醇－盐酸(100∶1)的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备 按本品的制备工艺，制成不含黄连的阴性对照样品，再按供试品制备方法制成阴性对照溶液。

2.5 标准曲线的制备及线性范围的考察 精密量取盐酸小檗碱对照品浓配液适量加甲醇分别稀释50倍、25倍、10倍、5倍和2倍，摇匀，分别作为供试品溶液。分别吸取上述溶液各20 μL注入液相色谱仪，记录峰面积，以对照品的峰面积(Y)对盐酸小檗碱对照品浓度(X)回归，得回归方程Y=100 147X－16 995，相关系数r=1(n=5)，结果见表1。试验结果表明，盐酸小檗碱对照品在所试浓度5.104 ～127.595 mg·L－1范围内线性关系良好。

表1 盐酸小檗碱对照品线性考察实验结果

图4 盐酸小檗碱对照品标准曲线

2.6 精密度试验

2.6.1 重复性试验 取同一批香连胶囊样品(201202016批)，照含量测定项下的测定方法，测定6次，记录色谱图。含量分别为 48.59、48.46、48.58、48.56、48.69、48.67 mg/粒，SD 为 0.08%，RSD为0.17%。试验结果表明，该方法重复性良好。

2.6.2 中间精密度试验 由两人在不同时间不同仪器进行同一批样品的6次含量测定，数据及结果见表2。试验结果表明，该方法中间精密度良好。

2.7 稳定性试验 取对照品及供试品溶液分别于0、2、4、6、8、10 h 进样，记录峰面积积分值，对照品溶液分别为 2 543 733、2 545 687、2 545 370、2 543 954、2 541 189、2 550 710，RSD 为 0.12%;供照品溶液分别为 3 429 677、3 422 319、3 421 170、3 418 003、3 415 099、3 417 387，RSD 为0.15%。试验结果表明:样品溶液在所试10 h内稳定。

2.8 加样回收率试验 取同一批号(201202016批)样品(含量为48.59 mg/粒)，取6份，每份称取0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入盐酸小檗碱对照品适量置相应的锥形瓶中，精密加甲醇－盐酸(100∶1)的混合溶液50 mL，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用甲醇 －盐酸(100∶1)的混合溶液补足减失的重量，摇匀，精密量取续滤液1 mL置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。分别取供试品溶液20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积计算本法的回收率，结果见表3。平均回收率99.58%，RSD为0.83%，试验结果表明，本法测定盐酸小檗碱含量方法的准确度良好。

表2 中间精密度试验

表3 准确度试验结果

2.9 样品测定及含量限度的确定 按上述确定的色谱条件和测定方法，对香连胶囊三批样品中盐酸小檗碱的含量进行测定，结果见表4。试验结果表明:三批样品的含盐酸小檗碱量符合标准规定的本品每粒含黄连以盐酸小檗碱(C20H18ClNO4)计，应不得少于 40.0 mg。

表4 三批样品含量测定结果

3 讨论

供试品的提取中采用甲醇盐酸溶液，因为盐酸小檗碱为强酸弱碱盐，以含1%盐酸的甲醇溶液进行提取有利于盐酸小檗碱的溶出完全，并可显著减少其他杂质峰的干扰，保证方法的准备性。

本法测定香连胶囊中盐酸小檗碱含量简单迅速、分离度好，可用于香连胶囊盐酸小檗碱含量的测定。

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