HPLC法测定糠酸莫米松乳膏含量

李 蔚，马 嘉，吴 静，阮菁菁

(中国人民解放军第105医院，安徽合肥 230031)

糠酸莫米松(Mometasone Furoate)是人工合成的糖皮质激素类药，具有疗效强、肾上腺皮质功能抑制低等特点［1］。其外用制剂常用于对糖皮质激素有效的皮肤病，对皮炎(接触性皮炎、脂溢性皮炎、异位性皮炎、神经性皮炎)，急性、亚急性、慢性湿疹及皮肤瘙痒症有显著疗效。本品临床用于湿疹、神经性皮炎、异位性皮炎及皮肤瘙痒症。外用制剂临床使用方便、安全，较口服药起效迅速。此外，乳膏剂为水包油型基质，与皮肤亲和力强，透皮速度快，性质温和，且易于洗涤。临床用药顺应性良好［2］。本文采用高效液相色谱法测定糠酸莫米松乳膏有关物质及含量［3－4］，可有效控制该制剂产品质量，操作简便，灵敏度高，专属性强，结果准确。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(岛津LC-10Avp，苏州岛津公司)，C8(5 μm，150 mm × 4.6 mm;Amethyst)，离心机(江苏金坛市环宇科学仪器厂)，水浴锅(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)，抽滤装置，AB135-S电子天平，超声仪，试管、量瓶等玻璃仪器。

甲醇，乙腈，纯化水，糠酸莫米松乳膏(上海仙灵保雅制药有限公司，批号:121103)，糠酸莫米松乳膏工作对照品(批号:120305供含量测定用以99.5%计算)。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Amethyst C8(5 μm，150 mm ×4.6 mm)，流动相:甲醇 － 水(72∶28)，定量环:10 μL，运行时间:16 min，UV 检测器(检测波长 254 nm);流速:1.0 mL·min－1;积分参数:满量程设置为对照溶液色谱峰高的4～5倍。

2.2 内标溶液的制备 取丙酸倍氯米松适量，加乙腈溶解并稀释制成1 mL中约含0.5 mg的溶液，摇匀，即得。

2.3 对照品溶液制备 取糠酸莫米松对照品14 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度。摇匀，精密量取15 mL，精密加入内标溶液15 mL，摇匀，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 供试品溶液制备 取本品适量(约相当于糠酸莫米松2 mg)，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液与乙腈各15 mL，置80℃水浴加热使融化，强力振摇2 min，置冰浴中冷却10 min，离心，精密量取上清液5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

计算:含量(%)=供试品溶液主峰面积÷供试品溶液内标峰面积×对照品溶液内标峰面积÷对照品溶液主峰面积×对照称重(mg)×对照纯度÷取样量(g)×15。

2.5 阴性干扰性试验 取糠酸莫米松工作对照品2 mg、糠酸莫米松乳膏适量(约相当于糠酸莫米松2 mg)、处方比例的阴性样品2 g，照含量测定方法测定。结果表明:在此色谱系统下，处方比例的阴性样品在糠酸莫米松主峰位置上无任何色谱峰，糠酸莫米松原料和糠酸莫米松乳膏在糠酸莫米松主峰位置上一致，表明本法检测本处方样品阴性无干扰，见图1。

图1 糠酸莫米松乳膏含量方法学验证——阴性样品(含内标)

2.6 专属性试验 分别精密称取本品2 g，置具塞试管中，照有关物质检查方法学中的破坏条件进行破坏试验后，分别转移至50 mL具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液与乙腈各15 mL，置80℃水浴中加热使融化，强力振摇2 min，置冰浴中冷却10 min，离心，精密量取上清液5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。另取糠酸莫米松对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并定量稀释制成每1 mL中约含0.14 mg的溶液，精密量取15 mL，精密加入内标溶液15 mL，摇匀，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，同法测定。结果显示:各降解产物峰与主峰的分离度均符合规定，表明专属性良好，见图2、3。

图2 糠酸莫米松乳膏含量方法学验证——未破坏样品

图3 糠酸莫米松乳膏含量方法学验证——强酸破坏样品

2.7 系统适用性试验 标准中对照品取样量为约相当于糠酸莫米松14 mg(定容至100 mL)，因此三个浓度的称量为 11.2、14、16.8 mg。取糠酸莫米松工作对照品(纯度 99.5%)11.2、14、16.8 mg，各 3份，分别置100 mL量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度。精密量取15 mL，精密加入内标溶液15 mL，摇匀，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。照含量测定方法进行测定。结果表明系统适用性良好。

2.8 线性及范围考察 精密称取糠酸莫米松工作对照品28.52 mg(纯度99.5%)，置100 mL 量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度。分别精密量取2、3、4、5、6、7、8 mL，分别置 10 mL 量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀。精密量取5 mL，精密加入内标溶液5 mL，摇匀，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为各对照品溶液。照含量测定项下色谱条件与方法注样，各浓度注样2针，取校正因子F平均值。以校正因子为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归，回归方程为F=17.603×C－0.002 6(R=0.999 98，n=7)。结果表明:糠酸莫米松在0.014 2 ～0.056 8 g·L－1的浓度范围内，线性良好，纵截距与标示浓度的校正因子的百分比为－0.42%，小于2%，说明曲线通过原点，可采用外标一点法进行计算。

2.9 回收率试验 标准中供试品取样量为约相当于糠酸莫米松2 mg，因此回收率加入量为1.6、2、2.4 mg。取糠酸莫米松工作对照品(纯度99.5%)1.6、2、2.4 mg，各 3 份，分别置 50 mL 具塞锥形瓶中，再分别加入2 g的糠酸莫米松阴性样品，精密加入内标溶液与乙腈各15 mL，置80℃水浴中加热使融化，强力振摇2 min，置冰浴中冷却10 min，离心，精密量取上清液5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。照含量测定方法进行测定。按测得量与加入量的比值计算回收率，得平均回收率为100.7%，RSD 为1.26%(n=9)。

2.10 重复性试验 取同批均质样品连续取样6份，分别照上述含量测定方法测定每份样品含量，计算RSD为0.24%(n=6)，重复性良好。结果表明:本法测定糠酸莫米松乳膏含量重复性良好。

2.11 精密度试验 取重复性项的均质样品，照含量测定项下的方法连续进样6次，进行测定。RSD为0.47%(n=6)，两组测定结果含量差异无显著性，表明仪器精密度良好。

2.12 稳定性试验 取供试品溶液与对照品溶液，分别于 0、1、2、4、8、24 h 注样分析，测定峰面积，RSD为0.12%(n=6)，表明稳定性良好。

2.13 样品含量测定 精密量取2.2.2项的样品溶液和2.2.3项的对照品溶液各注入液相色谱仪，按上述选定的色谱条件测定，记录主峰面积，按内标法计算峰面积，结果见表1。

表1 含量测定方法学验证——含量

由表1可知，糠酸莫米松注射液的含量在98%～102%之间，符合规定。

3 讨论

在糠酸莫米松乳膏含量方法学验证中，糠酸莫米松乳膏含量专属性试验是基于强制降解试验结果所得图谱进行判断的。含量条件使主成分含量加有关物质总杂质达到90%～110%。实验可以通过调整强制降解试验的破坏条件使有关物质总杂质达到规定要求。杂质峰与主峰间的分离度应符合要求。若主成分含量加有关物质总杂质达不到90%～110%，可能是由于实验的色谱条件不符合要求，可以通过PAD扫描，重新确定糠酸莫米松的最大吸收波长。

在糠酸莫米松乳膏含量方法学验证中，由结果可知本法的专属性良好，各降解产物峰与主峰的分离度均符合规定，表明在含量测定中，本法的专属性良好。由糠酸莫米松线性关系考察可知本法测定糠酸莫米松含量在 0.014 2 ～0.056 8 g·L－1的浓度范围内，本法的线性良好，回归方程为F=17.603 ×C －0.002 6(R=0.999 98，n=7)。纵截距与标示浓度响应值比值(B/Y)为 －0.42%小于2%，可采用外标一点法进行计算。由糠酸莫米松乳膏6份样品含量测定的RSD=0.24%小于1%可知本法的重复性良好。由测得量与加入量的比值计算本法的回收率，RSD=1.26%小于2%表明本法测定糠酸莫米松乳膏含量方法的回收率良好，方法准确度高。由中间精密度试验中两组数据相对标准偏差为0.32%，本法中间精密度良好。由糠酸莫米松峰面积与内标溶液主峰面积在24 h内相对标准偏差均小于1.0%，其比值小于1.0%以及三柱耐用性结果可知本色谱系统稳定，且供试品溶液与对照品溶液在24 h内稳定性良好。因而本色谱条件可用于糠酸莫米松乳膏含量的测定。

［1］ 陈新谦，金有豫，汤 光.新编药物学［M］.17版.北京:人民卫生出版社，2011:616.

［2］ 张建中.几种新的外用糖皮质激素［J］.中国药物应用与监测，2005，2(5):30 －31.

［3］ 刘 园，吴 燕，张福成.HPLC法同时测定复方痤疮凝胶中三种药物的含量［J］.安徽医药，2012，16(7):920 －921.

［4］ 刘 亭.一阶导数分光光度法测定自制糠酸莫米松微乳的含量［J］.药学与临床研究，2010，18(1):86 －87.

［5］ 国家药典委员会.中国药典(二部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:附录VD.