硒与川芎嗪配伍对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

辽宁卫生职业技术学院卫检教研室(110101)范 颖 董 瑶 徐国锋 马月娇

在缺血性疾病抢救和治疗过程中，目前发现对组织造成损伤的主要因素不是缺血本身，而是恢复血液供应后出现了更加严重的脑机能障碍。脑缺血再灌注损伤发生机制十分复杂，与自由基的生成、细胞内钙超载、兴奋性氨基酸毒性、白细胞高度聚集和高能磷酸化合物的缺乏等有关。多项实验研究证明，这种病理生理变化存在一定的药物干预性［1，2］。本实验从硒与川芎嗪配伍对脑缺血再灌注损伤保护机制的研究，探讨中药复方制剂对其防治作用的可行性。

1 材料与方法

1.1 动物 SD大鼠50只，雌雄各半，体重(200±20)g，由辽宁长生生物技术有限公司提供。

1.2 药物与试剂 亚硒酸钠由沈阳市第五试剂厂生产，批号1304151，临用时用生理盐水配制。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒，均购于南京建成生物工程研究所。

1.3 方法

1.3.1 大鼠脑缺血再灌注损伤模型 参考文献方法［3］，取健康大鼠腹腔注射3%戊巴比妥后固定于手术台上。沿颈中线剪开颈部皮肤，分离双侧颈总动脉。用小动脉夹夹闭双侧颈总动脉30分钟后，松开双侧小动脉夹再灌注60分钟，缝合颈部皮肤。其他组麻醉后颈部切开，分离双侧颈总动脉，不夹闭。

1.3.2 分组及给药 50只大鼠随机分成5组。即假手术组、缺血再灌注组、硒组、川芎嗪组、硒加川芎嗪组。1)假手术组:只绕颈总动脉穿线，不结扎。2)缺血再灌注组:术后4周生理盐水灌胃处理。3)硒组、川芎嗪组、硒加川芎嗪组:术后4周分别以亚硒酸钠生理盐水溶液0.625mL/100g、川芎嗪注射液1.25mL/100g、硒与川芎嗪配伍液1.875mL/100g灌胃处理。

1.3.3 指标检测 抗凝颈总动脉血以3000r/min离心10分钟，取上清液分别测定GSH-Px、MDA和SOD含量。测定时按照试剂盒说明书严格操作。

2 结果

缺血再灌注组与假手术组相比，MDA含量明显高于假手术组(P＜0.05)，SOD、GSH-Px含量明显低于假手术组(P＜0.05)。硒组、川芎嗪组、硒加川芎嗪组与缺血再灌注组相比，MDA含量明显低于缺血再灌注组(P＜0.05)，SOD、GSH-Px含量明显高于缺血再灌注组(P＜0.05)。硒加川芎嗪组分别与硒组、川芎嗪组相比，MDA含量低于硒组、川芎嗪组(P＜0.05)，SOD、GSH-Px含量高于硒组、川芎嗪组(P＜0.05)。见表1。

表1 硒与川芎嗪配伍对大鼠脑缺血再灌注损伤血浆中SOD、GSH-Px、MDA含量()

表1 硒与川芎嗪配伍对大鼠脑缺血再灌注损伤血浆中SOD、GSH-Px、MDA含量()

注:缺血再灌注组与假手术组比较，*P＜0.05;硒组、川芎嗪组、硒加川芎嗪组与缺血再灌注组比较，#P＜0.05。硒加川芎嗪组分别与硒组、川芎嗪组比较，△P＜0.05。

3 讨论

大量自由基产生及其导致的质膜、细胞器膜脂质过氧化反应是脑缺血再灌注损伤的重要致病机制［4］。有效地自由基清除对脑缺血再灌注损伤可以起到重要的保护作用［5］。

MDA是体内重要的氧自由基代谢产物，能较好地反应组织过氧化程度。其含量是反映机体抗氧化潜在能力的重要参数，可以反应机体脂质过氧化速率和强度，也能间接反映组织过氧化损伤程度。缺氧可使脑组织生成大量氧自由基，氧自由基作用于细胞膜上的不饱和脂肪酸使膜脂质产生过氧化反应，进而导致细胞的损伤，并形成脂质过氧化物。本实验中，硒与川芎嗪配伍能显著降低大鼠脑缺血再灌注损伤时MDA含量，从而减少脂质过氧化反应。

SOD能专一性清除体内有害自由基，解除因自由基氧化体内某些组成成分而造成的机体损害。正常细胞内有自由基清除剂SOD，使氧自由基转变为过氧化氢，后者又通过触酶及GSH-Px的作用还原为水和分子氧，故小量氧自由基并不造成损伤。再灌注时产生了大量的氧自由基，造成内源性自由基清除系统活性降低［6］。GSH-Px的活性中心是硒半胱氨酸，其活力大小可以反映机体硒水平。硒是GSH-Px酶系的组成成分，它能催化GSH变为GSSG，使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物，从而保护细胞膜的结构及功能不受过氧化物的干扰及损害。本实验中，硒组、川芎嗪组、硒加川芎嗪组均能能明显增加缺血再灌注组血浆中SOD和GSH-Px的含量，而硒加川芎嗪组比硒组、川芎嗪组增加血浆中SOD和GSH-Px的含量更为明显。

实验结果表明，硒与川芎嗪配伍能明显抑制脑缺血组织中SoD、GSH的降低以及MDA的增高。硒与川芎嗪联合用药比单独用药更能增强缺血脑组织清除氧自由基的能力。

［1］学海，杨永举，曹奕丰，等.干预前后脑血管血液动力学指标对比分析［J］.中国公共卫生，2003，19(6):664

［2］孟庆年.川芎嗪注射液加补阳还五汤治疗急性脑梗塞38例［J］.中西医结合实用临床急救，1999，6(1):12.

［3］汪远金，申国明，王钦茂.川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用［J］.安徽中医学院学报，2000，19(1):44

［4］陈玉敏，陈涛平，冯浩楼.脑缺血再灌注损伤机制与治疗现状［J］.医学研究与教育，2012，29(6):47

［5］刘忠民，李向群，何丽娅，等.自由基在大鼠脑缺血再灌注损伤时的作用及药物防护［J］.数理医药学杂志，1997，10(4):347

［6］Dimagl U，Lindauer U，Them A.Global cerebral ischemiain the rat:online monitoring of oxygen free radical productionusing chemiluminescence in vivo［J］.J Cereb Blood Flow Metab，1995，15(6):925