VEGF、MMP-2、MMP-9在胰腺癌中的表达及临床意义

张小博 李艳会 李开良 张 平 (吉林大学第一医院肝胆胰外科，吉林 长春 300)

胰腺癌是预后最差的肿瘤之一，具有发病隐匿、早期症状不典型、诊断困难、可出现局部淋巴结和血行转移、恶性程度高以及对各种治疗均不敏感等特点。有研究表明〔1〕，胰腺癌转移是该病难以治愈的主要原因之一。肿瘤的发生发展、侵袭转移等过程与肿瘤血管生成密切相关，也与多种细胞因子的作用有关〔2〕。血管内皮生长因子(VEGF)主要作用于血管内皮细胞。基质金属蛋白酶(MMPs)是一类活性依赖于锌离子和钙离子的蛋白水解酶，几乎在所有肿瘤组织中的表达均较正常组织明显增加〔3〕，其过量表达后打破癌细胞生存的微环境平衡状态，破坏了细胞外基质(ECM)和基底膜(BM)的结构，促进了癌细胞的侵袭能力和转移能力。本文分析胰腺癌组织的中VEGF、MMP-2、MMP-9的表达情况及相关性。

1 材料和方法

1.1 标本来源 取自2009年1月至2013年1月于吉林大学第一医院接受手术治疗的50例胰腺癌患者手术切除病理标本作为样本。年龄34～76〔平均(55.2±10.3)岁〕，中位年龄55岁，其中男33例，女17例。病理分化情况:低分化腺癌13例，中分化23例，高分化14例。所有患者均有完整的临床资料。另取同期行胆胰腺癌根治术(胰十二指肠切除术)的胆管癌或胰腺癌癌旁1 cm正常胰腺组织10例作为对照。

1.2 SP法 所有标本均经过甲醛固定，常规石蜡包埋;分别采用兔抗人VEGF多克隆抗体(bs-0279R)、兔抗人MMP-2多克隆抗体(bs-0412R)、兔抗人MMP-9多克隆抗体(bs-0397R)均购自北京博奥森生物制品厂。采用福州迈新生物技术开发有限公司的S-P免疫组化试剂盒及二氨基联苯胺(DAB)染色，具体步骤参照迈新公司免疫组化染色步骤说明书。

1.3 结果判断 参照文献〔4～6〕，MMP-2、MMP-9、VEGF 表达判定阳性的标准:胞质有棕黄色颗粒为阳性细胞，高倍镜下(400倍)随机取10个高倍视野，阳性细胞数＞10%定为阳性，＜10%定为阴性。染色强度与阳性细胞所占百分比结果评分相加，0～3分为阴性(－)，4～7分为阳性(+)。见表1。

表1 免疫组化计分标准

1.4 统计学方法 应用SPSS17.0软件进行分析，阳性率组间比较采用χ2检验，相关分析用非参数相关(Spearman)分析。

2 结果

2.1 MMP-2表达及与临床病理参数间的关系 MMP-2在胰腺癌组织及胰腺正常组织均有表达。胰腺癌患者MMP-2阳性表达〔34例(68%)〕明显高于胰腺正常组织〔2例(20%)〕(P＜0.05)。图1。

MMP-2的阳性表达率随着胰腺癌分化程度的降低而呈上升趋势，但三者间表达无统计学意义(P＞0.05)。MMP-2阳性表达率随着胰腺癌临床分期的增高而增强(P＜0.05)，有、无转移组间表达差异有统计学意义(P＜0.05)，而与年龄，性别，肿瘤部位及大小无关(P＞0.05)。见表2。

表2 MMP-2在胰腺癌中的表达与临床病理参数的关系(n)

2.2 MMP-9的表达及与临床病理参数间的关系 MMP-9在胰腺癌组织及胰腺正常组织均有表达。胰腺癌患者MMP-9阳性表达〔32例(64%)〕高于胰腺正常组织〔1例(10%)〕(P＜0.01)。见图1。

MMP-9阳性表达率随着胰腺癌临床分期的增高而增强P＜0.01，无转移组间表达差异具有统计学意义(P＜0.01)，但与年龄、性别、病理分化程度、肿瘤部位及大小无关(P＞0.05)。见表3。

表3 MMP-9在胰腺癌中的表达与肿瘤生物学指标的关系(n)

2.3 VEGF的表达及与临床病理参数间的关系 VEGF在胰腺癌组织及胰腺正常组织均有表达。胰腺癌患者VEGF阳性表达〔32例(64%)〕高于胰腺正常组织〔2例(20%)〕(P＜0.05)。见图1。

VEGF阳性表达率随着胰腺癌临床分期的增高而增强(P＜0.05)，有、无转移组及不同胰腺癌分化程度组间比较有统计学意义(P＜0.05)，与年龄、性别、肿瘤部位及大小无关(P＞0.05)。见表4。

表4 VEGF在胰腺癌中的表达与临床病理参数的关系(n)

2.4 MMP-2、MMP-9、VEGF在胰腺癌组织中表达相关性VEGF、MMP-2与MMP-9三者之间表达均具有高度相关性(P＜0.01，Kappa＞0.4)。其中 MMP-9(+)时，VERF(+)26 例，(－)6例;MMP-9(－)时，VEGF(+)6例，(－)12例;MMP-2(+)时，VEGF(+)29例，(－)5例;MMP-2(－)时，VEGF(+)3 例，(－)13例;MMP-9(+)时，MMP-2(+)28例，(－)4例;MMP-9(－)时，MMP-2(+)6例，(－)12例。

图1 MMP-2、MMP-9、VEGF在胰腺癌组织的阳性表达(×400)

3 讨论

肿瘤细胞侵袭转移能力作为肿瘤的主要特点之一，是决定恶性程度重要因素之一。其包括肿瘤细胞自身的黏附性降低，癌细胞与ECM之间相互作用。这将主要依赖于MMPs和VEGF的作用。MMPs是其中较为重要的一类，其中MMP-2、MMP-9的作用显得尤为重要。Curran等〔7〕研究发现MTI-MMP可以激活 MMP-2酶原，激活的MMP-2反过来又可以激活MMP-9，从而形成正反馈回路，促进恶性肿瘤的扩散。血管的生成受到许多因子的调控，其中最重要的是VEGF，VEGF能诱导血管内皮细胞增殖，毛细血管袢形成，促进新生血管形成，并可增加微血管通透性。An等〔8〕认为VEGF是调控因子中目前针对肿瘤新生血管过程中最强的，具有高度特异性。Suzuki等〔9〕认为VEGF具有促进血管内皮细胞生长、增殖、促进血管新生、增加血管通透性以及血管维持功能，还直接与肿瘤浸润、转移有关。

本研究提示MMP-2、MMP-9在胰腺癌的侵袭和转移过程中都起着重要作用。另外提示，MMP-2、MMP-9通过降解BM及ECM，促进胰腺癌细胞的浸润和转移，且MMP-2、MMP-9表达率越高，该肿瘤的浸润性越强，因此，联合检测胰腺组织中MMP-2、MMP-9的表达，对于临床上做出早期诊断，判断预后具有一定的指导意义，同时又可为临床选用合适的MMPs抑制剂进行后期治疗提供参考。VEGF的表达与胰腺癌的分化程度相关，这提示VEGF表达的高低与胰腺癌的恶性程度密切相关，而胰腺癌的恶性程度与预后密切相关。这与有关的研究成果相一致〔10～13〕。

本结果还表明MMP-2、MMP-9、VEGF可能在胰腺癌的发生发展及血管生成中发挥协同作用，促进BM及ECM的分解，有利于胰腺癌细胞的侵袭和转移，但其机制尚有待进一步研究。

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