胃癌组织中H.pylori-L型感染及骨桥蛋白、基质金属蛋白酶-2的表达

周 蕾 俞 岚 魏 军 于东红

(蚌埠医学院第一附属医院病理科 蚌埠医学院病理学教研室，安徽 蚌埠 233030)

研究证实幽门螺杆菌(H.pylori)及其L型感染与胃癌的发生密切相关，骨桥蛋白(OPN)及基质金属蛋白酶(MMPs)是近年来发现的与恶性肿瘤的浸润、转移密切相关的蛋白。本实验主要探讨Hp-L型感染对OPN、MMPs表达的影响以及它们在胃癌侵袭、转移中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料 120例胃癌标本挑选自我科2006～2007年确诊为胃癌的手术存档蜡块。所有蜡块经重新切片复查，每例连续切片数张，4 μm厚进行革兰染色及免疫组化染色。免疫组化主要试剂:MMP-2鼠抗人单克隆浓缩型抗体购自福州迈新生物有限公司。OPN鼠抗人单克隆浓缩型抗体(sc 21742)购自Santa Cruz生物科技公司(工作浓度为1∶100)。H.pylori-L多克隆抗体，由蚌埠医学院微生物教研室帮助制作。

1.2 革兰染色 检测胃癌组织中H.pylori-L型感染情况，油镜(10×100)观察并计数，每例随机观察10～15个视野，取平均数;H.pylori-L型和 Hp平均数≥20为阳性，＜20或未查见H.pylori-L型和Hp为阴性，H.pylori-L型形态多样，大小不等，有巨型体、圆球体、短棒状等，革兰阴性呈红色，阳性呈紫色;Hp则呈螺旋形、“S”形或海鸥形(见图1)。

1.3 免疫组化染色 检测MMP-2和OPN表达，阳性染色见于肿瘤细胞的胞质内，呈棕黄色颗粒;切片中细胞阳性数≤10%为(-)，细胞阳性数＞10%为(+)。H.pylori-L型抗原免疫组化的阳性标准为:在癌巢或间质中见到棕黄色颗粒为H.pylori-L型抗原表达阳性。

1.4 判断标准 革兰染色H.pylori-L型检出和免疫组化H.pylori-L型抗原表达同时阳性者定为H.pylori-L型感染阳性。

1.5 统计学方法 应用四格表资料χ2检验分析。

2 结果

2.1 胃癌组织H.pylori-L型感染阳性率、形态及在组织中的分布 革兰染色切片发现H.pylori-L型可散在分布于癌性腺腔、癌巢和间质中，亦可聚集于其中，同时可见H.pylori-L型黏附于胃癌细胞表面或位于癌细胞胞质内(见图1)。胃癌组织中有88例革兰染色检出L型，检出阳性率为73.33%(88/120)，免疫组化H.pylori-L型抗原表达阳性85例(见图2)，其阳性率为70.83%(85/120)，革兰染色L型检出和H.pylori-L型抗原表达同时阳性的病例有82例(68.33%)(两者同时阳性被定为H.pylori-L型感染阳性)。

图1 胃癌癌巢内的Hp-L型，部分黏附于癌细胞表面(箭头)(革兰染色，×1 000)

2.2 胃癌组织H.pylori-L型感染、OPN和MMP-2表达与临床病理指标之间的关系 从表1可见，胃癌中H.pylori-L型阳性、OPN和MMP-2阳性(见图2)与肿瘤大小、癌细胞的血管侵犯、浸润深度及淋巴结转移相关，肿瘤直径大于3 cm者多于小于3 cm者;侵及浆膜者多于未侵及浆膜者;累及血管者多于未累及者;发生淋巴结转移者多于无转移者，以上各组经统计学处理，均有统计学意义(P﹤0.05)。

2.3 H.pylori-L型感染与肿瘤组织中OPN、MMP-2表达之间的关系 H.pylori-L型感染阳性组中OPN阳性和MMP-2阳性的例数(58例和61例)高于H.pylori-L型感染阴性组(16例和15例)。两组之间的差异有统计学意义(P＜0.005)。H.pylori-L型感染与OPN和MMP-2阳性表达率均有相关关系(r=0.27，r=0.34)。

表1 Hp-L型感染、OPN和MMP-2阳性表达与胃癌临床病理指标之间的关系

3 讨论

胃癌是我国十大恶性肿瘤之一，其发病率及死亡率均居前三位。大量的研究显示幽门螺杆菌(Hp)感染是胃癌发病的重要原因〔1，2〕。而Hp-L型是Hp适应外界不良条件的一种自我保护形式，形态多样性，对环境抵抗力强，对抗生素等具有较强的抵抗力〔3，4〕。

OPN是一分泌性细胞因子，自被发现以来，人们对它的认识不断深入，目前研究〔5，6〕认为OPN参与人体多种肿瘤的转化、侵袭、转移过程，它在一定程度上能够反映肿瘤的恶性程度。OPN可能是一个很好的肿瘤转移标志物及监测肿瘤预后的指标。Denhardt等〔6〕认为，无论是细胞、动物实验还是临床实体肿瘤研究，均发现OPN与肿瘤转移的关系十分密切。Angelucci等〔7〕发现当OPN的RGD序列被其受体整合素αvβ3识别或与CD44突变体结合后，可通过促进肿瘤细胞的黏附、细胞外基质的降解，抑制细胞凋亡等途径参与肿瘤的浸润和转移。OPN的表达与恶性肿瘤的许多临床特征密切相关。有研究报道，在肝癌〔8〕、乳腺癌卵巢癌〔9〕等肿瘤中，OPN的表达与预后关系密切，复发或转移者中血或组织中的表达水平显著升高。

MMPs家族中以MMP-2蛋白为代表，以酶原形式分泌，被激活后形成Ⅳ型胶原酶，降解、破坏靠近肿瘤表面细胞外基质中的Ⅳ型、Ⅴ型胶原和明胶，然后肿瘤细胞沿着缺失的基膜向周围浸润，最终导致肿瘤的侵袭和转移〔10〕。目前有研究证明许多恶性肿瘤浸润和转移与MMP2高表达有关〔11〕，例如在直肠癌和乳腺癌组织中均有MMP2过度表达〔12〕，并与肿瘤转移密切相关。

本文结果说明，H.pylori-L型感染可促进胃癌的侵袭和转移，H.pylori-L型感染可促进胃癌组织中OPN和MMP2的表达。OPN、MMP2的表达可促进胃癌的侵袭和转移。

综上，Hp-L型感染可导致胃癌侵袭和转移能力增强，其机制之一可能是增加胃癌细胞侵袭和转移相关蛋白OPN、MMP2的表达。

1 庄小强，林三仁.幽门螺杆菌与胃癌的研究进展〔J〕.世界华人消化杂志，2000;8:206-7.

2 姚永莉，张万岱.幽门螺杆菌致病因子研究进展〔J〕.世界华人消化杂志，2002;10:455-8.

3 Brenciaglia NI，Fornara AN，ScaltritoNN，et al.Helicobacter pylori:cultivability and antibiotic susceptibility of coccoid forms〔J〕.Int Antimicrob Agents，2000;13(4):237-41.

4 Wen M，Zhang Y，Yamada N，et al.An evaluative system for the response of antibacterial therapy:based on the morphological change of Helicobacter pylori and mucosal inflammation〔J〕.Pathol Int，1999;49(4):332-7.

5 Koopermann J，Fedarko NS，Jain A，et al.Evaluation of osteopontin as biomarker for pancreatic adenocarcinoma〔J〕.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2004;13(3):487-91.

6 Denhardt DT，Mistretta D，Chambers AF，et al.Transcriptional regulation of osteopontin and the metastatic phenotype:evidence for a Ras-activated enhancer in the human OPN promoter〔J〕.Clin Exp Metastasis，2003;20(1):77-84.

7 Angelucci A，Festuccia C，Gravina GL，et al.Osteopontin enhances the cell proliferation induced by the epidermal growth factor in human prostate cancer cells〔J〕.Prostate，2004;59(2):157-66.

8 Gotoh M，Sakamoto M，Kanetaka K，et al.Overexpression of osteopontin in hepatocellular carcinoma〔J〕.Pathol Int，2002;52:19-24.

9 Schorge JO，Drake RD，Lee H，et al.Osteopontin as an Adjunct to CA125 in detecting recurrent ovarian cancer〔J〕.Clin Cancer Res，2004;10:3474-8.

10 Somiari SB，Somiari RI，Heckman CM，et al.Circulating MMP2 and MMP9 in breast cancer-potential role in classification of patients into low risk，high risk，benign disease and breastcancercategories〔J〕.Cancer Int，2006;119(6):1403-11.

11 Zeng ZS，Guillem JG.Distinct pattern of matrix metalloproteinase 9 and tissue inhibitor of metalloproteinase 1 mRNA expression in human colorectal cancer and liver metastases〔J〕.Br J Cancer，1995;72:575-82.

12 ZucKer S，LysiK RM，Zarrabi MH，et al.Mr 92 ，000 typeⅣ collagenase is increased in plasma of patients with colon cancer and breast cancer〔J〕.Cancer Res，1993;53:140-6.