藤茶二氢杨梅素对小鼠高尿酸血症模型的降尿酸作用

李广枝，卢忠英，徐敬友，郁建平

(贵州大学生命科学学院，贵州 贵阳 550025)

藤茶是一种代茶饮品，在我国民间饮用历史悠久，藤茶系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata(Hand.Mazz)W.T.Wang.茎叶的加工物，有效成分为黄酮类物质，包括二氢杨梅素、杨梅素、藤茶苷、槲皮素等，二氢杨梅素约占黄酮的80%［1］。藤茶味甘，淡，性凉，藤茶全株入药用于治慢性肾炎、肝炎、小便涩痛、治胃热呕吐、感冒、咽喉肿痛等症［2］。高尿酸血症是痛风病临床表现之一，近年来，据国内外文献报道高尿酸血症与糖尿病、高血压、高脂血症、冠心病等心血管疾病发生率也有相关性。目前用于治疗痛风的药物副作用比较大，大量研究表明:二氢杨梅素可影响高尿酸血症小鼠血清尿酸水平，可做为治疗痛风药物的备选材料［3-4］。调查发现，饮用藤茶能降低血清尿酸含量，本试验利用小鼠高尿酸血症模型，探讨二氢杨梅素对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响，为治疗痛风药物的开发和利用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

试材藤茶植株采自贵州省江口县和平镇，由贵州大学生命科学学院植物教研室廖海民教授鉴定为葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata(Hand-Mazz)W.T.Wang。试验用藤茶由贵州江口梵净山云峰野生植物开发有限公司提供。

试验动物昆明种小鼠，雄性，体重(20±2g)，由重庆腾鑫生物技术有限公司提供［许可证号:SCXK(渝)2012-006］，实验前在实验室正常饲养一周，实验过程中自由饮水和颗粒饲料喂养。

1.2 方法

1.2.1 二氢杨梅素制备 取藤茶200 g，采用沸水提取，浓缩乙醇除杂，丙酮提取，浓缩加水沉淀结晶及重结晶的方法制备二氢杨梅素(DM)［5］，用HPLC检测纯度［6］为纯度89.87%。

1.2.2 小鼠分组及给药［7］将60只昆明种小鼠随机分为6组，分正常对照组，模型组、别嘌呤醇组、二氢杨梅素高剂量组、中剂量组、低剂量组，其中二氢杨梅素高、中、低剂量分别为0.752 g/kg、0.376 g/kg、0.187 g/kg，别嘌呤醇按 0.04 g/kg 剂量给药。除空白对照组灌胃给予相应体积的生理盐水。其余各组全部建模。模型组(上午按腺嘌呤:200 mg/kg，乙胺丁醇:250 mg/kg的剂量给药，下午灌胃等体积生理盐水)，别嘌呤醇组、二氢杨梅素高，中，低剂量组上午建模，下午分别按剂量给药，每天一次，直至14天。

1.2.3 检测指标 各组给药连续14天，分别于实验14天后，小鼠摘除眼球取血(取血前禁食12小时)，以测定血尿酸值(尿酸酶法)、尿酸氮(脲酶法)、肌酐(苦味酸法)。静止1 h，低温离心，3 500 r/min离心12 min以分离血清，-20℃冰箱冷冻保存。待测。

数据用SPSS20.0统计软件分析，两组间均数比较采用t检验，多组间均数比较采用单因素方差分析。

2 结果与分析

2.1 肾脏肉眼观察

如图所示;正常对照组(图1):肾脏色泽红润，模型组(图2):肾脏增大明显，颜色苍白，肉眼可见大量白色结晶;别嘌呤醇组(图3):肾脏轻微增大，颜色苍白，肉眼可见少量白色结晶;二氢杨梅素高、中剂量组(图4-5):肾脏轻微增大，颜色微红，肉眼可见少量白色结晶;二氢杨梅素低剂量组(图6):肾脏增大明显，颜色苍白，肉眼可见大量白色结晶;对小鼠肾脏重量的变化，与正常对照组相比各组都有显著差异，与模型组相比有显著差异(表1)。

图1 正常对照组Fig.1 Control group

图2 模型组Fig.2 Model group

图3 别嘌呤醇组Fig.3 Allopurinol group

图4 藤茶高剂量组Fig.4 High-dose group of dihydromyricetin

图5 藤茶中剂量组Fig.5 Medium-dose group of dihydromyricetin

图6 藤茶低剂量组Fig.6 Low-dose group of dihydromyricetin

表1 各组小鼠肾脏重量的变化情况Tab.1 Changes in kidney weight of mice

2.2 腺嘌呤复制高尿酸血症小鼠模型情况比较

模型组小鼠血清UA水平为(294.8±25.31)μmol/L，与正常组血清UA水平(161.7±10.53)μmol/L有显著差异，说明成功地复制了小鼠高尿酸血症模型(表2)。

2.3 不同剂量给药对小鼠血清UA水平的影响

别嘌呤组、二氢杨梅素高、中剂量组的血清UA与模型组相比有明显的降低;二氢杨梅素高、中剂量组的血清UA与别嘌呤组相比差异显著(表2)。

2.4 不同药物对肾功能的影响

模型组BUN及Cr比正常组升高;二氢杨梅素高、中、低剂量组BUN及Cr均低于模型组;别嘌呤组与模型组无显著差异;二氢杨梅素高、中剂量与别嘌呤醇组相比有明显降低(表2)。

表2 各组小鼠血清尿酸(UA)水平的变化情况Tab.2 Changes in serum uric acid(UA)of mice

3 讨论

随着人民生活水平有进一步的提高，高尿酸血症的患病率也逐渐上升，因此，临床上对高尿酸和痛风病的药物治疗也倍受关注，药物治疗主要重视安全有效性，模拟与临床上相似的高尿酸血症动物模型是研究防治高尿酸血症药物药效的基础。据现有资料显示，藤茶植物中化学成分丰富，研究表明，藤茶有消炎，止咳、祛痰、镇痛、抗氧化、护肝、降血糖，降血脂 抗高血压、抗菌、抗癌等药理作用［8-14］，藤茶资源丰富，二氢杨梅素含量高，本实验主要探讨二氢杨梅素对动物模型的降尿酸作用，进一步深入对二氢杨梅素药理的研究，可为藤茶资源的综合开发利用提供依据。同时也为高尿酸血症和痛风病的新药研发提供理论依据。

本试验结果显示;别嘌呤对高尿酸血症模型虽有极明显的降尿酸作用，但对肾脏损害的副作用较为明显，不容忽视。而二氢杨梅素能够有效的干预腺嘌呤+乙胺丁醇片［7］所引发的高尿酸血症，尤其是二氢杨梅素高、中剂量具有明显降低血尿酸的作用，同时对肾脏的损害有保护和治疗作用，二氢杨梅素在预防治疗高尿酸血症上具有潜在的前景。但其作用机制如何，有待于进一步的研究。

［1］张秀桥，李全红，舒志元，等.蛇葡萄属民族民间药研究开发进展［J］.长春中医学院学报，2001，17(1):60-61.

［2］中国科学院植物研究所.中国高等植物图谱补编:第2册［M］.北京:科学出版社，1983:242.

［3］HOVIND P，ROSSING P，TARNOW L，et al.Serum uric acid as a predictor for development of diabetic nephropathy in type 1 diabetes an inception cohort study［J］.Diabetes，2009，58:1 668-1 671.

［4］RIEGERSPERGER M，COVIC A，GOLDSMITH D，et al.Allopurinol，uric acid，and oxidative Stress in cardiorenal disease.IntUrol Nephrol.2011，43(2):441-449.

［5］郁建平，伍贵祥，樊静静.从蛇葡萄属植物中同时分离二氢杨梅素和杨梅素的方法:中国，201110458347.7［P］.2011，11.

［6］覃洁萍，谭建宁，欧 莹，等.广西瑶族藤茶中双氢杨梅树皮素的含量测定方法研究［J］.中国新药杂志，2004，13(10):915-917.

［7］杨桂梅，黄胜华.大鼠高尿酸血症模型的建立［J］.实验动物科学，2001，28(3):25-28.

［8］林 萍，伍 扬.藤茶抗炎作用的实验研究［J］.四川中医，2006，24(9):12-15.

［9］吴 春，李俊生.脂溶性二氢杨梅素的制备及其抗氧化性研究［J］.食品科学，2011，32(20):69-71.

［10］郑作文，胡远燕.藤茶双氢杨梅树皮素对实验性慢性肝损伤的保护作用［J］.中国药物应用与监测，2008，5(3):12-15.

［11］陈玉琼，倪德江，程 倩，等.藤茶总黄酮及二氢杨梅素降血脂作用研究［J］.茶叶科学，2007，27(3):221-225.

［12］杨志坚，袁弟顺，陈凌华，等.藤茶中二氢杨梅素的研究概况［J］.中国茶叶加工，2010，9(1):20-22.

［13］邝满元，刘映霞，李映菊，等.藤茶总黄酮抗大鼠肝纤维化的作用［J］.南京大学学报(医学版)，2008，36(6):745-747.

［14］李 刚，郑作文，唐云丽.藤茶总黄酮体外抗人肝癌细胞作用研究［J］.中国药房，2008，19(9):651-652.